Електрофорез білків сироватки - Синево
Загальна інформація
Білки сироватки виконують різні функції в організмі:
• компоненти буферних систем;
• імунологічні засоби (імуноглобуліни);
• роль носія, що забезпечує транспорт певних іонів і молекул (гаптоглобін, преальбумін, трансферин);
• роль регулюючої активності різних протеолітичних ферментів (антипротези: альфа1-антитрипсин, альфа2-макроглобулін);
• роль у регулюванні онкотичного тиску 2 .
Сучасним методом розділення сироваткових білків, що використовується в лабораторіях медичної біохімії, є електрофорез. Використовуються тверді носії та лужне рН, при якому всі білкові компоненти заряджені негативно і мігрують до позитивного полюса. На електрофореграмі після фарбування білки з’являються у вигляді смуг, оптична щільність яких вимірюється, причому кожна смуга має максимальне поглинання. За допомогою електрофорезу в згаданих вище умовах отримують п’ять фракцій: сироватковий альбумін, a1, a2, b, g - глобуліни 3. Деякі електрофорезні системи можуть диференціювати зону b на дві окремі смуги b1 і b2, що призводить до загальної кількості 6 білкових фракцій.
Альбумін, a1 і b виглядають як однорідні, чітко визначені смуги. a2, і g виглядають як дифузні смуги, а частка g представляє в своїй центральній частині більш інтенсивно забарвлену область 2 .
Рекомендації щодо електрофорезу білка в сироватці крові - виявлення моноклональних гамапатій; оцінка сироваткових білків та харчового стану 3 .
Навчання пацієнта - натщесерце (на голодний шлунок) або після їжі 1 .
Зібраний зразок - кров 1 .
Збиральний контейнер - пилосос без антикоагулянта з/без розділювального гелю 1 .
Необхідна обробка після збору врожаю - відокремити сироватку центрифугуванням 1 .
Тестовий обсяг - мінімум 0,5 мл ser 1 .
Причини відхилення доказів - сироватка, гемолізована або не зберігається при 2-8 ° C 1 .
Стабільність зразків (пов'язана з лабораторіями в країні) - виділена сироватка стабільна протягом 4 днів при кімнатній температурі або один тиждень при 2-8 ° C 1 .
Метод роботи (пов'язаний з лабораторіями в країні)- електрофоретичний (в агаровому гелі) з подальшим денситометричним скануванням отриманих фракцій 1 .
Довідкові значення (відносно лабораторій в країні) - залежать від віку 2 років
У випадку системи, яка розділяє 6 фракцій, використовуються такі контрольні значення:
Причини відторгнення зразка (пов'язані з Центральною лабораторією): зразок гемолізований або не зберігається при температурі 2-8 ° C
Стабільність зразка (пов'язана з Центральною лабораторією): 10 днів при 2-8 ° C, 2 місяці при -20 ° C
Метод роботи (відносно Центральної лабораторії): Капілярний електрофорез у вільному розчині
Довідкові значення (відносно Центральної лабораторії):
| Альбумін | 58,9- 73,4 | 57,4- 71,4 | 57,4-69 | 57,5- 67,7 | 57,1- 67,2 | 55,8 - 66,1 |
| Альфа-1 глобулін | 3,2 - 11,7 | 3–5 | 3,2- 5,4 | 3.3- 5.4 | 3,2 - 4,9 | 2,9 - 4,9 |
| Альфа-2 глобулін | 10.6-14 | 10.2- 16.1 | 10,7 - 15,5 | 10-14.8 | 8.9-13 | 7,1 - 11,8 |
| Бета-1 глобулін | 4,8- 7,9 | 5,3- 6,9 | 5,6 - 7 | 5,2- 7 | 5,1- 6,9 | 4.7- 7.2 |
| Бета-2 глобулін | 2.1- 3.3 | 2.1- 3.6 | 2,3- 3,5 | 2.6 - 4.2 | 2.9 - 5.2 | 3,2- 6,5 |
| Гамма-глобулін | 3,50- 9,7 | 4.2-11 | 5.8 - 12.1 | 7,7 - 14,8 | 9,8- 16,9 | 11.1- 18.8 |
Інтерпретація результатів 3
Для полегшення інтерпретації результатів буде описана кожна з 5 фракцій із складовими білками: (див. Малюнок 8.1.2) 2
Знижений рівень сироваткового альбуміну (гіпоальбумінемія) виникає при різних патологічних станах і має різне значення (неправильне харчування, порушення всмоктування, нефротичний синдром, новоутворення). Збільшення альбуміну відбувається після зневоднення. В особливих випадках в зоні міграції альбумінів виявляється додаткова смуга через генетичні варіації, що не мають клінічного значення (алоальбумінемія та бісальбумінемія).
Зона 1 в основному відображає сироваткову концентрацію альфа1-антитрипсину, так що зменшення цієї фракції виявляється при дефіциті альфа1-антитрипсину, пов'язаному з певними захворюваннями легенів (емфізема з раннім початком) та печінки (неонатальний гепатит). Посилення реєструються у всіх запальних реакціях ("реагент гострої фази"). У рідкісних випадках отримання додаткової широкої смуги в цій області може свідчити про наявність альфа-фетопротеїну.
Зона 2 складається з 2 білкових компонентів: альфа2 макроглобуліну та гаптоглобіну.
Підвищення а2 відбувається при гострих інфекціях, гострому ревматоїдному артриті, артеріїтах, нефротичному синдромі, цукровому діабеті, новоутвореннях; зменшення цієї фракції може бути виявлено при важкому гострому панкреатиті, гепатоцелюлярних ураженнях, синдромах дисемінованого внутрішньосудинного згортання, гемолітичних анеміях, мегалобластних анеміях.
Зона b складається з 2 різних смуг: b1, що відповідає трансферину, і b2, що включає фракції комплементу С3 і С4. Третім компонентом цієї зони є бета-ліпопротеїн, смуга якого може перекриватися з зоною трансферину або С3 або може знаходитися в бета-гамма-зоні.
Рівень глобуліну сироватки крові підвищує залізодефіцитну анемію та жовчний цироз та зменшує аутоімунні захворювання (СКВ), нефроз, захворювання печінки, новоутворення, гострі та хронічні інфекції. У деяких випадках множинної мієломи типу IgA в цій області можна виявити наявність моноклонального компонента.
Зона g Гамма-глобуліни - найважливіші глобуліни. До цієї категорії належать імуноглобуліни (IgG, IgA, IgM, IgD та IgE). Потерпілі від них аномалії перекладаються або різними дефіцитами, або поліклональною або моноклональною гіпергамаглобулінемією.
Відсоток g глобулінів зменшується при агамаглобулінемії, гіпогамаглобулінемії та нефротичних синдромах. Гіпогамаглобулінемія може бути вродженою або набутою, і її легко виявити за допомогою електрофорезу білка в сироватці крові, коли концентрація основних 3 класів імуноглобулінів низька (IgG, IgA та IgM). Наявність гіпогаммаглобулінемії у дорослих вимагає подальших досліджень з метою виявлення можливого лімфопроліферативного захворювання (мієлома з легкими ланцюгами, хронічний лімфолейкоз, лімфоми).
Поліклональне збільшення гамаглобулінів свідчить про хронічний імунний процес, пов’язаний із захворюваннями печінки (хронічний активний гепатит, цироз), хворобою колагену (СЧВ, ревматоїдний артрит), новоутвореннями (наприклад, хвороба Ходжкіна), хронічним мієло-моноцитарним лейкозом. У цих випадках гіпергаммаглобулінемія обумовлена активацією великої кількості клонів плазматичних клітин, що вивільняють імуноглобуліни. Слід згадати про характерний вигляд бета-гамма-мостового алкогольного цирозу, що візуалізується на гелі як інтенсивно забарвлена зона між бета-і гамма-зонами.
Іноді в гамма-зоні можна побачити невеликі вузькі смуги, звані олігоклональними, виявлені у хворих на гепатит, захворювання імунного комплексу, синдром набутого імунодефіциту, ангіоімунобластну лімфому.
Моноклональні гамапатії включають велику кількість клінічних та біологічних станів, зазвичай пов'язаних із злоякісними захворюваннями (множинна мієлома, хвороба Вальденстрема, амілоїдоз, лімфоми), але також з деякими доброякісними станами або навіть відсутністю патологічних змін (моноклональні гамапатії невизначеного значення). У цих випадках при електрофорезі білка виявляється моноклональний компонент (смуга М), що є результатом проліферації одного клону плазматичних клітин. На гелі моноклональні компоненти виглядають у вигляді вузьких, чітко визначених смуг, і після денситометричного сканування отримують характерні «піки», які можна знайти в будь-якому місці між альфа- та гамма-зонами, завдяки змінній електрофоретичній рухливості, найбільш але часто в гамма-зоні.
Моноклональні імуноглобуліни є структурно та біохімічно однорідними і складаються з одного типу легкого ланцюга (каппа або лямбда). Повні імуноглобуліни або лише їх субодиниці (наприклад, легкі моноклональні ланцюги, звані білками Бенс-Джонса) можуть бути випущені в кровообіг. Наявність моноклонального компонента буде вказано в бюлетені остаточного аналізу пацієнта з рекомендацією провести електрофорез білка в сироватці крові з імунофіксацією 1-3 .
У таблиці нижче узагальнено представлену інформацію: