Імунологія - Bioxa - 11 лабораторій медичної біології - Реймс, Еперне, Тінке, Сезанн

Імунологія

Антиядерні антитіла

Антиядерні антитіла (АНА) - це аутоантитіла, спрямовані проти антигенних детермінант ядра клітин організму, вони виявляються під час неспецифічних аутоімунних захворювань органів під назвою коннективіт, найвідоміший з яких - поширений червоний вовчак (Світлодіод).

Їх шукає непряма імунофлуоресценція (IFI) на культурах людських клітин Hep-2, на яких ми можемо розрізнити багато аспектів флуоресценції щодо типу виявлених антитіл. Тонкість зображень, отриманих при флуоресценції, дозволила, таким чином, описати багато різних антитіл, пов'язаних з різними типами патологій (див. Циркулюючі антикоагулянти).

Виявлення ANA за допомогою IFI

Принцип: Сироватка пацієнта осідає на субстраті (найчастіше клітини Hep-2) та інкубується у вологій камері протягом 30 хвилин, протягом цього часу антитіла, присутні в сироватці крові, зв’язуватимуться зі своїми антигенними мішенями, і їх наявність буде виявлено. додаванням антитіла проти людського імуноглобуліну, міченого флуоресцеїном. Зчитування визначає 2 основні параметри цієї методики: поява флуоресценції та титр антитіл.

Інтерпретація: Поява флуоресценції може бути однорідною, крапчастою, нуклеолярною, цитоплазматичною або мембранною залежно від розпізнаних антигенів, при цьому можливі всі суміші між цими різними типами.

Титр антитіл виражають при останньому розведенні сироватки, що дає видиму флуоресценцію, у дорослих мінімальний значущий рівень становить 1/80 (1/40 у дітей), рівні вимірюють до розведення 1/640, що відповідає дуже високій швидкості, розведення можна продовжувати, щоб розрізнити два типи флуоресценції, які перекриваються на одній і тій же опорі.

Ідентифікація ANA

Залежно від зовнішнього вигляду спостережуваної флуоресценції, яка більш-менш наводить на думку про певний тип антитіл, для ідентифікації ANA можуть використовуватися різні методи.

1 Анти-ДНК-антитіла, природні та/або денатуровані:
Більшість анти-ДНК-антитіл розпізнають обидва типи молекул, причому нативна ДНК є дволанцюжковою і денатурованою одноланцюговою ДНК, пошук лише анти-ДНК-антитіл представляє невеликий інтерес (багато випадків без клінічної кореляції). На даний момент існує 4 методики пошуку цих антитіл.

Тест Фарра: Після інкубації сироватки з радіоактивно міченою ДНК імунні комплекси осаджуються, а радіоактивність, присутня в осаді, пропорційна рівню антитіл до ДНК у зразку. Цей тест має велику перевагу в тому, що він є кількісним (результат в МО/мл), але його технічна реалізація складна.
МФІ про Crithidia luciliae: це биччачий найпростіший, який містить кінетопласт, дуже багатий циркулярною самородною ДНК, зображення флуоресценції дозволяє легко читати, кінетопласт, розташований недалеко від базального тіла джгутика, легко відрізнити від серцевини. Отриманий результат якісний.
Тести ELISA: Фрагменти самородної ДНК, зафіксовані на дні лунок мікротитраційних пластин, пов'язують антитіла сироватки пацієнта, які потім виявлятимуть антитіло IgG проти людини, мічене пероксидазою, наприклад. результати кількісні та виражаються в різних одиницях залежно від використовуваної методики (найчастіше МО/мл).
Імунодот: це метод ІФА, проведений на нітроцелюлозній смужці, до якої прикріплена нативна ДНК. Показання дають якісний результат, який іноді важко інтерпретувати для низького рівня антитіл.

2 Антигістонові антитіла:
Це строката група антитіл, що реагують з різними гістонами або нуклеосомами, їх найчастіше шукають за допомогою ІФА, вони виявляються при СЧВ та у більшості СЧВ, індукованих наркотиками, їх клінічний інтерес залишається на даний момент.

3 Антитіла до розчинних ядерних антигенів (ENA):
Вони спрямовані проти витяжних складових ядра і відповідають за різні типи рябої флуоресценції. Вони мають імена, пов’язані з першим описаним пацієнтом (Sm), або пов’язаною патологією (SS для синдрому Шегрена), або їх молекулярною масою (gp100).

Класифікація:

Антитіла проти RNP: Вони виявляються при ВКВ та змішаному коннективіті.

Анти-Sm антитіла: Вони виявляються в 70% вовчака і практично лише при цій патології.

Анти-SS-A антитіла: Вони зустрічаються при деяких СКВ, але особливо при синдромі Гужеро-Шегрена. Вони також пов'язані з підвищеним ризиком розвитку атріовентрикулярної блокади у новонароджених, матері яких є носіями цього типу антитіл.

Анти-SS-B антитіла: Вони виявляються майже виключно при синдромі Гужеро-Шегрена.

Антитіла проти Scl 70: Вони спрямовані проти топоізомерази та виявляються при склеродермії.

Антитіла проти Jo1: Вони виявляються при поліміозиті.

Антитіла проти PCNA: Вони дуже специфічні для хвороби вовчака, але рідко.

Антинуклеосомні антитіла: Вони є хорошим маркером систематичного вовчака і переважно пов’язані з пошкодженням нирок.

Класифікація антиядерних антитіл ICAP (anapatterns.org)

Виявлення:

ІФА: Це найбільш чутлива методика, але отримання очищених ядерних антигенів надзвичайно складна, з іншого боку, структура епітопів може бути змінена покриттям у реакційних ямах, тому ця методика повинна включати багато внутрішніх контролів для перевірки. Результати виражаються в одиницях або як індекс відносно відомого контролю.

Імунодот: Реакція подібна до ІФА, але на нітроцелюлозному носії результат є якісним.

Імунотрансфер: Це варіант імунодоту, який проводиться на мембрані, яка раніше була електрофорезована на ядерні антигени. Він має перевагу тестування всіх антигенів, присутніх на одному носії, але розділяє їх лише за молекулярною масою, що може викликати клопоти, коли молекулярні маси двох різних антигенів однакові (SS-A та Jo1), з іншого боку, електрофорез може денатурувати певні антигени та модифікувати їх спорідненість до аутоантитіл.

Оновлено 5 листопада 2012 р. Та 21 березня 2018 р. Відповідно до біоформи та посібника з лабораторного аналізу CERBA - Hervé DUPONT - біолог

Непереносимість глютену, лабораторна точка зору

Важливе висвітлення засобів масової інформації щодо "алергії на глютен", механізм якої не є алергічною, оскільки це справді непереносимість глютену, спонукає нас підвести підсумки цієї патології, яка може бути виражена проявами.

Біологія дозволить відрізнити пацієнтів, які страждають справжньою непереносимістю глютену, об’єктивованою гістологічними ураженнями, від тих, для кого виключення глютену буде проявлятися просто через травний або психологічний комфорт.

Целіакія - це аутоімунне розлад, яке провокується, а потім посилюється внаслідок дієтичного впливу білків з глютеном (пшениця, ячмінь, овес та жито), що спричинює атрофічне ураження тонкої кишки, що призводить до порушення всмоктування різних елементів, таких як залізо, фолієва кислота та кальцій.

Це може бути виявлено в будь-якому віці перед проявами травлення (біль, здуття живота, діарея тощо) або поза травлення (анемія, втрата ваги, остеопороз тощо) або навіть за відсутності будь-якої симптоматики, встановленої в свідчення специфічних антитіл.

Хоча вважається, що хвороба майже не існувала 50 років тому, її поширеність сьогодні є значною: 1/1500 для симптоматичних форм, 1/300 для прихованих форм, не виключено, що діагностується лише 20% випадків.
Підвищена поширеність, ймовірно, пов’язана з постійно зростаючим вмістом глютену в сучасних дієтах.

Основними серологічними маркерами є анти-ендомізієві антитіла, а анти-трансглутаміназні антитіла, антигліадинові антитіла, які були виявлені першими, є найменш специфічними і майже не використовуються.

Біологічна діагностика

Маркери сироватки передують біопсії дванадцятипалої кишки в процесі діагностики, їх корисність очевидна з огляду на чудову чутливість та специфічність. Наявність антитіл буде аргументом на користь біопсії, а у випадку атрофії ворсин, зазначеної на біопсії, підтвердить етіологічний діагноз.

Чутливість та специфічність біологічних маркерів

В основному це антитіла типу IgA,
Тому загальний аналіз IgA повинен супроводжувати ці тести, щоб виключити конститутивний дефіцит IgA, який заперечує пошук антитіл. У разі виявленого дефіциту можна шукати антитіла типу IgG, але їх чутливість дещо нижча.

> Anti-Endomysium Ac (AAE):

Специфічність цього маркера дуже висока, його чутливість (> 90%), здається, краща у дорослих, ніж у дітей.

> Антитрансглутаміназа Ac (AATG):

Специфічність близька до 100%, а чутливість> 90%
У 1997 році було продемонстровано, що антигенною мішенню анти-ендомізієвих антитіл насправді є тканинна трансглутаміназа (tTG). Кореляція між антиендомізієвими та антитрансглютаміназними антитілами становить близько 98% для діагностики целіакії.
Проведений тест використовує більш специфічну рекомбінантну трансглютаміназу людини

Поєднання 2 антитіл дозволяє отримати специфічність і чутливість близько 100%.

Генетичні маркери:

Контроль дієти без глютену

Серологічні маркери є хорошим показником прогресування захворювання, однак, хоча клінічне поліпшення швидке після введення схеми, зниження рівня антитіл може тривати протягом декількох місяців, при цьому IgA знижується. Зазвичай швидше, ніж IgG.

AAE є найкращим маркером відповідності та найкращим показником стану слизової. Найбільше часу вони вирішують після початку режиму, і їх частота може зменшитися до менш ніж 15% у пацієнтів, які дотримуються суворої дієти. У разі повторного введення глютену вони є позитивними протягом одного місяця, що передує повторному появі гістологічних уражень.

Ці серологічні маркери, чутливість та особливості яких є винятковими, неінвазивно сприяють встановленню остаточного діагнозу та моніторингу целіакії.

Номенклатура:

Анти-ендомізієві антитіла IgA або IgG: B40
Антитіла проти трансглутамінази IgA або IgG: B60

Антитіла до гліадину IgA або IgG: поза номенклатурою 42 €

Оновлено 02.10.2015 H. DUPONT Bioxa
Посилання: AFFMC Hépato Gastro Enterologie