Якісний аналіз молока вуглеводів методом тонкошарової хроматографії
Преамбула: інформація, значення, таблиці, графіки та питання, представлені нижче, є лише частиною вивченої теми.Деякі питання не відображаються в документі про підтримку діяльності, але їх задавали під час сесій.
Взагалі кажучи, хроматографія - це аналітичний метод, який відокремлює складові суміші шляхом видалення за допомогою а мобільна фаза (рідина чи газ), називається елююючи, уздовж а стаціонарна фаза (тверда або рідка), яка несе (або захоплює) розчинені речовини, що підлягають обробці.
Повинна бути фіксована фаза та мобільна фаза не змішується і мають протилежні символи, щоб можна було добре розділити різні розчинені речовини.
На молекули розчиненої речовини будуть діяти дві основні сили:
- навчальна сила: через розчинність розчиненої речовини в елюенті;
- сила утримання: через спорідненість розчиненої речовини до фіксованої фази.
в результаті з цих двох сил, що змінюються залежно від продукту, cТому кожна розчинена речовина буде мігрувати з характерною швидкістю (поділ відповідно до швидкості міграції)
Хроматографія може бути:
- якісний: якщо це дозволяє виявити рішення;
- підготовчий: якщо це дозволяє відновити розчинені речовини після поділу;
- кількісний: якщо це дозволяє кількісно визначити розчинені речовини після поділу.
Частина 1: Принцип тонкошарової адсорбційної хроматографії (ТШХ)
- "тонкий шар": тверда опора для відокремлення складається з дуже тонкого шару кремнезему, на який будуть наноситися свідки (або стандарти), що читають, та суміші, що відокремлюються
- "адсорбція": фіксація (утримання), яка встановлюється між діоксидом кремнію та розчиненими речовинами під дією електростатичних зв’язків (= слабкі зв’язки: сили Ван-дер-Ваальса, взаємодії диполів, водневі зв’язки).
Кажуть, що розчинені речовини є адсорбований на діоксиді кремнію або навіть хроматографії АДСОРБЦІЯ. Ці електростатичні сили представляють сила утримання
Увага ! ніне плутати з "адсорбцією": проникнення всередину чогось (наприклад, поживних речовин у крові, після перетравлення)
У наступному документі (витяг з книги "Біотехнологія - клас терміналу STL", редактор Кастейя, наведено приклад хроматопластинки
Частина 2: Проведення хроматографічного розділення складових суміші
Ось різні кроки, які слід застосувати:
1) Підготовка стаціонарної фази: повторна активація пластини діоксиду кремнію при 100 ° C для видалення молекул води, можливо адсорбованих на діоксиді кремнію, і наявність яких змінить тип хроматографії (силікагель, що містить воду, реалізує принцип розподілу, а не адсорбції)
2) Підготовка мобільної фази: насичення атмосфери резервуару, що містить розчинник, за допомогою кришки, щільно закриває резервуар; насиченість
3) Депонування зразків: контрольні розчини (або стандарти зчитування) та суміш (и), що аналізуються, наносяться у вигляді мікрокапель; осад повинен бути достатньо концентрованим, щоб бути видимим під час розкриття, але плями (плями) повинні бути невеликими
4) Розвиток нальоту: інший термін, що позначає міграцію розчинника на пластині вздовж твердої фази. Потрібно зупинити до того, як елюенти досягнуть верхнього краю пластини, з наступним негайним маркуванням фронту міграції елюентів.
5) Одкровення: розчинені речовини, які слід розділити, найчастіше безбарвні, тому непомітні неозброєним оком; отже, розкриття полягає у тому, щоб вони з'явилися за допомогою реагенту, специфічного для відокремлених молекул, або за допомогою використання УФ-світла (приклад нижче: виявлення кофеїну під УФ-світлом)
6) Запис форми, кольору та відстані міграції: кожної розчиненої речовини та фронту міграції)
7) Розрахунок фронтального співвідношення: це співвідношення між пройденою від розчиненої речовини відстанею до пройденої розчинником відстані на рівні фронту міграції
8) Інтерпретація та висновок
3-та частина: експлуатація хроматограми
Приклад тонкошарової хроматографії вуглеводів:
"": лактоза стандартна на 4 р. л -1
"Гл": лактоза стандартна на 4 р. л -1
"FD":" легкозасвоюване "молоко, молоко, яке зазнало додавання лактази виробником і раніше дефекувало (осадження білків у кислому середовищі)
"UHT": 1/2 знежиреного молока, стерилізованого надвисокою температурою та попередньо дефекованого (осадження білка в кислому середовищі)
"Її": стандарт сахарози при 4 мкл -1
"Га": стандарт галактози при 4 мкл -1