Лептин у грудній сироватці та грудному молоці, пов’язаний із збільшенням маси тіла в Росії

лептин

  • Теми
  • Анотація
  • Головна
  • МЕТОДИ
  • Теми.
  • Збір зразків.
  • Підготовка зразка.
  • Аналіз лептину.
  • Статистичний аналіз.
  • РЕЗУЛЬТАТИ
  • Лептин у грудному молоці проти рівень лептину в сироватці крові матері та антропометричні дані.
  • Еволюція лептину в грудному молоці.
  • Сироватка молочної залози проти рівня лептину в грудному молоці.
  • Рівень лептину та ріст немовлят.
  • ОБГОВОРЕННЯ
  • Глосарій

Теми

  • Біохімія
  • Ожиріння
  • Педіатрія

Анотація

Повний розмір таблиці

Збір зразків.

Зразки молока отримували у матерів наприкінці першого, другого, третього та четвертого тижня, а потім другого, третього, четвертого, п’ятого та шостого місяців після пологів. ІМТ ваги матері та немовляти постійно фіксувався в цьому дослідженні, як уже згадувалося вище. Зразки крові матері отримували після першого тижня та третього та шостого місяців, збирали у пробірки із сироваткою та центрифугували при 1500g протягом 10 хв при 4 ° C. Грудне молоко та зразки сироватки зберігали при -20 ° C до аналізу.

Підготовка зразка.

Перед аналізом концентрації лептину в грудному молоці ми виконали етапи підготовки зразків. Спочатку 1 мл зразка грудного молока гомогенізували три рази протягом 5 секунд за допомогою ультразвукової палички (ультразвуковий процесор UP100H, 100 Вт, 30 кГц, амплітуда 100%; Hielscher Ultrasonics GmbH, Тельтов, Німеччина). Після обробки ультразвуком зразки молока центрифугували протягом 30 хвилин при 14000 об/хв, а нижню фазу знежиреного молока відсмоктували за допомогою канюлі для вимірювання в аналізі лептину. Якщо зразок все ще був каламутним, етап центрифугування повторювали.

Аналіз лептину.

Концентрації лептину у зразках сироватки та грудного молока людини визначали комерційно доступним людським лептином RIA (Lep-R40, чутливий до людського лептину, Lep-R40; Mediagnost, Ройтлінген, Німеччина). Ми провели протокол тесту на високу чутливість, який включав два додаткові етапи інкубації протягом ночі та додаткове використання стандартів низької концентрації. Це збільшило чутливість тесту до 0,01 нг/мл, як вказано виробником. Крім того, ми провели тести для оцінки точності (середнє відновлення 1, 6, 3, 2 і 4, 8 нг/мл для лептину становило 70, 2 ± 8, 7%, n = 10) та лінійності (середнє відновлення для етапів розведення 1: 2 та 1: 4 відповідало 82,2 ± 11,3%, n = 11) тесту після підготовки нашої проби.

Статистичний аналіз.

Дані аналізували за допомогою програм статистичного аналізу SPSS (SPSS Statistics 17.0, IBM). Описову статистику обчислювали та повідомляли як медіану та коефіцієнт ІР. Для нормальності використовувався тест Колмогорова-Смірнова, а для значень, що дозволяють виявити поздовжні профілі, тест Вілкоксона. Значення незалежних непараметричних зразків досліджували за допомогою U-критерію Манна-Уітні. Кореляційні зв'язки між двома змінними були перевірені лінійно-регресійним аналізом. Прості кореляції оцінювали за коефіцієнтами кореляції Пірсона. Непараметричні дані аналізували за допомогою коефіцієнта рангової кореляції Спірмена. У всіх випадках рівень значимості визначався як p

(А) Визначення концентрацій лептину в грудному молоці та антропометричних показників. Форми в (А) показують дані лептину в грудному молоці (нг/мл) (▪), ІМТ матері (кг/м 2) () та ваги дитини (г) () протягом 6 місяців. Незважаючи на те, що вага немовляти значно збільшився, за цей період ІМТ матері не спостерігалося суттєвих змін. Рівні лептину в грудному молоці на другому місяці після пологів були значно нижчими (р = 0,01) порівняно з даними першого та третього місяців після пологів. Значення відображаються як медіана та ІР. (В) Визначення концентрації лептину в грудному молоці та грудній сироватці крові. Концентрацію лептину (нг/мл) визначали у сироватці грудей (▪) та грудному молоці (▾) на першому тижні та на третьому та шостому місяцях після пологів. Вони представлені у середній та ІЧ-формі. Рівні лептину в грудному молоці були суттєвими (с

(А) Порівняння рівнів лептину у матері (нг/мл) у сироватці та грудному молоці. Через непараметричний розподіл даних кореляцію оцінювали за коефіцієнтом рангової кореляції Спірмена. Значно позитивна кореляція між цими двома групами спостерігалася протягом усього періоду лактації (r = 0,431, p = 0,001, n = 55). (B) Порівняння ІМТ матері (кг/м 2) та рівня лептину в сироватці крові (нг/мл). Через непараметричний розподіл значень кореляцію оцінювали за коефіцієнтом рангової кореляції Спірмена. Значно позитивну кореляцію між цими двома групами спостерігали протягом усього періоду лактації (r = 0, 512, р 2) та лептину грудного молока (нг/мл). Через непараметричний розподіл значень кореляцію оцінювали за коефіцієнтом рангової кореляції Спірмена. Значно позитивна кореляція між цими двома групами спостерігалася протягом усього періоду лактації (r = 0,298, с

Асоціація лептину грудного молока (нг/мл) на 1-му тижні та збільшення ваги немовлят (g) з кінця 1-го до 6-го місяця лактації. Дані розподілялись параметрично. Кореляційний аналіз проводили з використанням коефіцієнта кореляції Пірсона. Виявлено значну негативну кореляцію (r = -0, 681, p = 0, 007, n = 14).

Повнорозмірне зображення

ОБГОВОРЕННЯ

Сміт-Кірвін та ін. (6) показали, що ген лептину експресується в молочній залозі жінок, що годують, і що лептин продукується клітинами епітелію молочної залози. Отже, є два джерела лептину в грудному молоці: лептин може виділятися в молоко молочною залозою і витягуватися з крові (6, 31). Оскільки рецептори лептину ідентифіковані в шлункових епітеліальних клітинах, а також в абсорбуючих клітинах тонкої кишки мишей та людей (32), лептин може також активувати сигнальні шляхи, що беруть участь у розвитку шлунково-кишкової системи.

Концентрацію лептину в молоці та сироватці крові аналізували переважно за допомогою АРВ. Ми використовували RIA з чутливістю 0,01 нг/мл для виявлення мінімальних змін концентрацій лептину. Хауснехт та ін. (1) виявили вищі рівні лептину в незбиранному молоці, ніж у знежиреному. Ці дані узгоджуються з нашими результатами та підтверджують гіпотезу про те, що молочний жир може перешкоджати взаємодії антиген-антитіло імунологічного аналізу або що лептин може бути пов'язаний з глобулами молочного жиру (1, 6, 24). Тому ми центрифугували та обробляли ультразвуком зразки молока перед аналізом, щоб відокремити лептин від глобул молочного жиру та отримати прийнятні значення в експериментах з лінійністю та стрибком.

Обмежуючим фактором у нашому дослідженні може бути методичний характер. Середні значення відновлення, отримані в результаті нашого аналізу, становили приблизно 70% і, отже, трохи нижчі за очікувані. Ми припускаємо, що незначна частина доданого лептину залишалася пов'язаною з жировими кулями під час центрифугування, що призвело до загальної недооцінки рівня лептину. Прийнятна дисперсія для експериментів з відновлення менше 12,5% підтверджує цю гіпотезу і припускає, що якісна інтерпретація наших результатів є виправданою. Крім того, ми вивчали суміш для немовлят як матрицю, порівнянну з ендогенним молоком, щоб переконатись, що тест не розпізнав пов'язану з матрицею лептиноподібну імунореактивність. Виміряний “нульовий” рівень показав, що передбачуваний ефект матриці не виявляється. Крім того, ми також не можемо виключити вплив сімейного успадкування, включаючи генетичні та екологічні компоненти, які могли б замаскувати ефекти лептину, оскільки вони є потужними детермінантами ожиріння у дітей (39, 40).

На закінчення, грудне молоко містить фактори росту, гормони та адипоцитокіни, функція яких у зростанні та розвитку немовлят досі невідома. Отримані нами результати привели до гіпотези, згідно з якою молочний лептин на ранніх стадіях лактації, коли слизова шлунка ще незріла і що може бути полегшено всмоктування інтактного лептину (34), може контролювати механізми, що впливають на збільшення ваги шостого місячне немовля. Це свідчить про критичну важливість дії цього адипоцитокіну на ранніх стадіях життя.