Фракціонування молока та аналіз деяких його компонентів - PDF Безкоштовно завантажити

1 Кельнський університет Інститут зоології WS 2000/2001 Вправи для прогресу: Фізіологія тварин B Фракціонування молока та дослідження деяких його компонентів

компонентів

2 1. Вступ Цього дня стажування ми мали справу з молоком ссавців, досліджуючи лише коров’яче молоко. Оскільки молоко ссавців є єдиним джерелом їжі для новонароджених, можна припустити, що воно містить усі необхідні для цього виду поживні речовини. Це дозволяє зробити висновки щодо харчових потреб цього виду. Для цього молоко фракціонують на його компоненти. Це білки (особливо казеїн), жири, вуглеводи (особливо лактоза), мінерали (особливо кальцій) та вітаміни. 2. Матеріал та методи Додаток 1.3: Зразок молока складали 2 мл молока та 2 мл води. В іншому випадку тести проводились, як описано в сценарії. 3. Результати 1. Поділ казеїнів (ізоелектрична точка) 1.0 Кислотне осадження При досягненні рН 4,6 можна спостерігати осадження казеїну. 1.1 сичужні опади: Таблиця 1: швидкість сичужних опадів, мл сичужний час [с] стор. 2 з 2

3 1.3 Контрольний експеримент для сичужних опадів Склад використовуваних контрольних партій показаний у таблиці для уточнення: Щоб з’ясувати, який іон може спричинити осадження молока Таблиця 2: Огляд партій для контрольного експерименту Номер партії Реагент Ліквіон (кип’ячений) EDTA CaCl MgCl FeCl NaCl Спостерігали опади? ні так так так ні ні ні так так ні + додано реагент, - реагент не додано Сторінка 3 з 3

4 2. Характеристика білка молока: На основі відомих амінокислотних сумішей ми змогли добре визначити окремі смуги в ТШХ. Відповідно до цього в казеїні містяться наступні амінокислоти: His, Arg, Lys, Gly, Ser, Asp, Thr, Glu, Pro, Ala, Val, Met, Ile, Phe, Leu Смуга аланіну була настільки слабкою, що тут остаточна Заяву робити не можна. Для валіну та метіоніну, а також для фенілаланіну та лейцину смуги перекривались таким чином, що чітка ідентифікація неможлива. Нам вдалося визначити наступні AS за зразком желатину: Thr, Hypro, Ala, Met/Val, Pro, Phe. У цьому випадку ідентифікація Met і Val на основі смуг була однозначно неможливою. Згідно з нашим DC, найважливішою амінокислотою в желатині з точки зору кількості був би треонін. Однак, згідно зі структурною формулою, цю позицію слід призначати гліцину. Сторінка 4 з 4

5 3. Характеристика молочного жиру 3.1 Йодне число Йодне число визначали за кількістю титруваного Na 2 S 2 O 3 за такою формулою: g йоду (10 мл 0,1 н. Na2 S 2O3) 0, йодне число = 100 г жиру, г вказаного жиру Таблиця 3: Визначення йодного числа мл Na 2 S 2 O 3 йодного числа [г йоду/100 г жиру] моль йоду/100 г жиру вершкового масла 6,3 42,68 0,34 6,4 41,53 0,33 оливкової олії 1,4 99 .21 0,78 1,8 94,6 0,75 Лляна олія 1,7 191,5 1,51 1,3 200,73 1,58 Приклад розрахунку: 42,68 г йоду/100 г жиру (йодне число) = 0, 34 моль йоду/100 г жиру 126,9 (молекулярна маса) сторінка 5 з 5

6 3.2 Кількість омилення Номер омилення визначали за кількістю титруваного HCl за такою формулою: Таблиця 4: Визначення числа омилення мл Кількість омилення HCl [мг КОН/г жиру] Середня молекулярна маса жирних кислот [г/моль] Масло 3, 53 4 3 199,5 281,20 Оливкова олія 5,5 157,5 356, 71 трибутирин, 49 мг КОН омилення номер г жиру Приклад розрахунку: (10 мл мл 0,5 Н HCl) 28 = г зазначеного жиру ((10 мл 3,8 мл HCL ) x 28)/0,8 г жиру = 217 мг КОН/г жиру 217 мг КОН/г жиру x 1/56100 мг/моль = 0,004 моль КОН/г жиру = X 1/X = 258,53 г/моль (середня молекулярна маса жирних кислот ) Середня кількість подвійних зв’язків Оскільки йод приєднується лише до подвійних зв’язків, йодне число можна використовувати безпосередньо для визначення кількості подвійних зв’язків. Ми припускаємо, що 1 моль I 2/100 г відповідає 1 молю подвійних зв'язків. Таблиця 5: Кількість подвійних зв'язків Йодне число [г йоду/100 г жиру] моль йоду/100 г жиру моль подвійних зв'язків/100 г жиру Вершкове масло 42,68 0,34 0,17 41,53 0,33 0,16 Оливкова олія 99,21 0,78 0, 39 94,6 0,75 0,37 Приклад розрахунку: сторінка 6 з 6

7 42,68 г йоду/100 г жиру = 21,34 г I 2/100 г жиру 21,34 г I 2/100 г жиру/126,9 (молекулярна маса) = 0,17 моль I 2/100 г жиру = 0, 17 моль подвійних зв'язків/100 г жиру 4. Вміст кальцію та фосфатів Вміст кальцію: Таблиця 6: Визначення вмісту кальцію Кислотна сироватка Сичужна сироватка мл ЕДТА 7,5 3,2 мл ЕДТА 7,8 3,4 мл ЕДТА 7,9 3,8 середнє значення 7,73 3, 47 ммоль ЕДТА 0,08 0,03 Кількість ЕДТА в ммолях відповідає вмісту Са 2+ в ммоль/5 мл сироватки. Вміст Са 2+ у ммоль/л молока можна розрахувати із середніх значень відповідних результатів. Розрахунок: (ммоль Са 2+ х мл сироватки -1) х 2000, оскільки 5 мл сироватки відповідає 2,5 мл молока. За цими результатами кількість іонів кальцію в 100 мл молока можна розрахувати, використовуючи молекулярну масу кальцію (40,08 г/моль). Сторінка 7 з 7

8 Таблиця 7: Перетворення: кальцій у молочній кислоті сироватковий сичуг сироватка ммоль Са2 +/л молока 30,93 13,87 мг/100 мл молока 123,98 55,58 Приклад розрахунку: 0,08 ммоль ЕДТА/5 х 2000 = 30,93 ммоль Са 2 +/л молока 30,93 ммоль Ca 2+/л молока * 40,08 (молекулярна маса)/10 = 123,98 мг/100 мл молока Вміст фосфату: Наступні значення фосфату визначали з калібрувальної лінії для наших трьох зразків кислотної перегородки: Таблиця 8: Визначення вмісту фосфату за допомогою калібрувальної лінії Зразок Extincti мл фосфату мг фосфату мг фосфату мг/л на 1 0,1286 1,1 0,15 136,36 2 0,1482 1,25 0,17 136,0 3 0, 1386 1,2 0,16 133,34 Коефіцієнт перерахунку:

8.55 4-а дискусія 1.0 Кислотні опади При рН 4,6 можна спостерігати осадження казеїну. При цьому ph казеїн досягає своєї ізоелектричної точки. Отже, чистий заряд усієї молекули нейтральний при цьому рН, тому він стає нерозчинним у воді і випадає в осад. Визначена таким чином ізоелектрична точка відповідає відповідному рН з літератури. 1.1 Сичужні опади При сичужних опадах опади казеїну провокуються по-різному. Лабораторія гарантує, що міцели казеїну руйнуються, і казеїн, таким чином, випадає в осад (зазвичай він присутній у колоїдно розчиненому вигляді в молоці.) Після додавання 1 мл розчину льону казеїн осаджувався через 210 секунд. У випадку другої проби після додавання 2 мл осади відбувалися через 55 с, що відповідає сторінці 8 з 8

10 3.2 Кількість омилення Згідно з нашими результатами, оливкова олія містить найдовші жирні кислоти, трибутирин - жирні кислоти, які майже в 2 рази коротші, тоді як масло має трохи вищу цінність, ніж трибутирин. 4. Вміст кальцію та фосфатів Вміст кальцію: Вміст кальцію в сичужній сироватці значно нижчий, ніж у кислої сироватці. Це збігається з результатами експерименту, частина 1.3, де ми змогли продемонструвати споживання іонів Са ++ для активності сичужного ферменту. Навпаки, для кислотних опадів кальцій не потрібен, тому вміст кальцію майже такий самий, як на початку експерименту. Вміст фосфатів: З невеликим відхиленням ми маємо вміст

136 мг фосфату/л молока може виявити. Дослідження проводили на кислотній переборці, тобто на надосадовій рідині молока, фракціонованому кислотним осадженням та центрифугуванням. Сторінка 10 з 10

11 Використана література:! # "% $ & ('*), + $ .- 0/21),), + $"% $: 9 KLM # NOQPSRTJUVXWZY [\ S] ^ _ # `ba cdcea [f gjfbhjijkml fon pq r% str5uv wbijwxwzy

wj J C ƒj ƒjˆ Š Œ Ž: J Ž% Z S Ž # š œ ž. oÿ J m J J š z 5 «ªB%. % ± ²j³µ%. ¹ 0ºCºJž »2¼½¾¼ ÁÀÂCà À ¾.Ç5ÀE» ÈÈ ÉËÊ5ÊÌÊÇƼ Í ÎCÏJÍoÐ ÑJÒmÓ ÍoÔ Õ: Ö% Øt 5ÙË ÛšÑCÛxÛQÜ% ÝÞÁÛjßáàJàJâ Сторінка 11 з 11