Імунна регуляція регуляцією слизової оболонки Foxp3 позитивними Т-клітинами у дітей та підлітків

Імунна регуляція за допомогою регуляції слизової оболонки Foxp3 позитивними Т-клітинами у дітей та підлітків з целіакією Дисертація на здобуття наукового ступеня д-р. мед. на медичний факультет Лейпцизького університету, поданий: Майклом Баухом, народженим 24 квітня 1986 року в Карл-Маркс-Штадті, зробленим в Клініці та поліклініці для дітей та підлітків Лейпцизького університету Науковий керівник: PD Dr. мед. хабіл. Holm H. Uhlig Рішення про присудження докторського ступеня від: 18.09.2012

регуляцією

Зміст Зміст Бібліографічний опис. 2 Зміст. 3 Список скорочень. 5 1. Вступ. 6 1.1 Целіакія. 6 1.1.1 Епідеміологія. 6 1.1.2 Етіопатогенез. 6 1.1.3 Діагностика. 10 1.1.4 Терапія. 11 1.1.4.1 Безглютенова дієта. 11 1.1.4.2 Стратегії експериментальної терапії. 11 1.2 Регуляторні Т-клітини. 12 1.2.1 Типи регуляторних Т-клітин. 13 1.2.2 Механізми придушення CD4 + CD25 + Foxp3 + регуляторні Т-клітини. 14 1.3 Мета дипломної роботи. 17 2. Матеріал і методи. 19 2.1 Етичне голосування. 19 2.2 Хід дослідження. 19 2.3 Набір досліджуваної сукупності. 20 2.3.1 Група хворих на целіакію. 22 2.3.2 Контрольна група. 22 2.4 Телефонне інтерв’ю Збір анамнестичних даних. 23 2.5 Антропометричні дані. 23 2.6 Клінічна хімія. 24 2.7 Целіакія - специфічні антитіла. 24 2.8 Фарбування гістологічних зрізів. 25 2.8.1 Підготовка зразків тканин. 25 2.8.2 Фарбування гематоксилін-еозином (ВІН). 25 2.8.3 Імуногістохімічне фарбування. 26 2.8.4 Імунофлуоресцентне фарбування. 27 2.8.5 Мікроскопія та фотографія. 28 2.9 Морфометричне вимірювання гістологічних зрізів. 28 2.9.1 Вимірювання ворсин та крипт. 28 3

Список скорочень Список скорочень ІМТ Індекс маси тіла CD Кластер диференціації CTLA-4 Антиген асоційований з цитотоксичними Т-лімфоцитами 4 Cy5 Ціанін 5 DAB 3,3 -Діамінобензидин DAPI 4,6-Діамідіно-2-феніліндол дигідрохлорид FITC флюоресцеїн 3-тиоціанафтіофакс 3-циклоксин 3 Злитий пептид HA гіпоалерген ВІН гематоксилін та еозин HLA лейкоцитарний антиген людини HRP пероксидаза хрону пероксидаза хрону IDO індоламін-2,3-діоксигеназа IEL Внутрішньоепітеліальні лімфоцити IgA/IgG імуноглобулін A або імуноглобулін міжфлорний імуноглобін, ІМ, ІФ, ІФ ентеропатія X-зв'язаний синдром LAG-3 лімфоцитарний антиген 3 MCV середній корпускулярний об'єм (середній об'єм еритроцитів) MHC Основний комплекс гістосумісності MICA MHC клас I поліпептидна послідовність A матриця MMP металопротеїнази NKG2D рецептор природних клітин-кілерів PBST фосфатно-буферний сольовий розчин Довідкові одиниці SDS Standard Dev Іаційний бал TBS Тріс, забуференний сольовим розчином TGF-β Трансформуючий фактор росту бета Th T допоміжна клітина (CD4 + CD3 + T клітини) TNFα фактор некрозу пухлини альфа 5

1. Вступ Це дослідження має на меті вивчити наступні теми: 1. Групу дітей та підлітків з целіакією слід охарактеризувати клінічно, параклінічно, анамнестично та гістологічно. Зокрема, клітинні та гуморальні імунні маркери порівнюються між групою хворих на целіакію та групою пацієнтів без целіакії. 2. Одна з основних увага приділяється виявленню та кількісному визначенню регуляторних Т-клітин Foxp3 + у слизовій оболонці тонкої кишки у дітей та підлітків із целіакією та контролів без атрофії ворсинок. 3. Мета полягає у дослідженні, чи співвідноситься кількість слизових регуляторних Т-клітин Foxp3 + у місці запалення з анамнестичними, антропометричними, серологічними, гематологічними та гістологічними маркерами у пацієнтів з целіакією. Зокрема, слід дослідити вікову залежність та можливі гендерні відмінності у регуляторних Т-клітинах. 18-го

2. Матеріал та методи З метою збору анамнестичних даних було проведено коротке опитування з батьками при першому контакті. Як тільки було отримано письмову згоду, в Інституті патології було запрошено архівовані зразки тканин тонкої кишки. Одночасно ретроспективно реєстрували антропометричні, клінічні, параклінічні та серологічні дані кожного пацієнта на момент ендоскопії. Після здачі зразків тканини їх вирізали, гістологічно фарбували та оцінювали. Усі записані параметри були введені в базу даних Excel (рис. 2.1). Рисунок 2.1 Огляд практичного курсу дослідження. 2.3 Набір досліджуваного населення Спочатку було встановлено контакт із батьками 195 дітей та підлітків. Целіакія була діагностована у 63 з цих пацієнтів. Целіакія була виключена шляхом біопсії у 132 пацієнтів. Лише 17 батьків (8,7%) відмовились брати участь у дослідженні після першого контакту. Для остаточної участі письмова згода 20 числа