MEA - Розливання чашок Петрі - MycoGenetics
Перевіреним методом культивування мікроорганізмів і грибів є вирощування в чашках Петрі на напівтвердих стерильних агарових культуральних середовищах. Агар-агар є полісахаридом і виготовляється з червоних водоростей. Агар здатний затвердіти/гелевувати воду. Утворюється тривимірна мережа, яка оптимально сприяє зростанню здорового міцелію.
Інструкції до екстракту солодового агару
- 2 х 1 літр пляшки з молоком зі скла з кришкою (очищений)
- 1 літр дистильованої води
- 25 г агар-агару
- 20 г солодового екстракту (порошок)
- Необов’язково: 2 г дріжджового екстракту + 1 г пептону
- Алюмінієва фольга
- Скороварки
- HEPA-фільтр
- 40 х PS чашки Петрі (стерильні)
- Парафільм
- Дезінфікуючий засіб Стериліум/Антифект
- Одноразові рукавички
- Зубний захист
Підготуйте MEA
Спочатку покладіть всі інгредієнти в каструлю і нагрійте суміш із закритою кришкою та періодично помішуючи, поки всі компоненти не розчиняться у воді. Потім рівномірно розподіліть розчин між обома пляшками з молоком. Оскільки солодовий екстракт може сильно пінитися під час варіння, пляшки не повинні бути заповнені більше наполовину.
Тепер візьміть під руку щедрий шматок алюмінієвої фольги - якщо фольга тонка, слід взяти подвійний шар - і покладіть його на відкриту пляшку з молоком. Тепер трохи покладіть кришку і злегка поверніть її, щоб тиск можна було вирівняти під час варіння, але кришка все одно не відвалиться від горловини пляшки. Тепер візьміть ще один великий шматок алюмінієвої фольги і покладіть його над кришкою пляшки з молоком. Притисніть фольгу вниз і щільно притисніть до пляшки. Переконайтеся, що згодом біля кришки немає тріщин. При необхідності візьміть ще один шар алюмінієвої фольги.
Тепер живильне середовище MEA можна стерилізувати 20 хв при 121 ° C в автоклаві.
Стерилізуйте MEA
Для цього наповніть горщик водою так, щоб пляшки знаходились у воді приблизно 3-5 см. Також використовуйте ситову вставку каструлі, щоб пляшки не стояли прямо на підлозі. В іншому випадку існує ризик того, що скло розіб’ється або солодовий екстракт у живильному середовищі випаде в осад (злипається) через надмірно високих температур.
Коли автоклав досягне робочої температури, починається час стерилізації 20 хвилин, а потім дайте горщику трохи охолонути. Тим часом ви можете підготувати своє робоче місце перед фільтром HEPA.
Підготуйте робоче місце фільтра HEPA
Запустіть HEPA-фільтр принаймні за 15 хвилин до початку роботи. Ретельно очистіть робочу поверхню дезінфікуючим засобом та підготуйте чашки Петрі. Пляшки з молоком з MEA, які ще не охололи, найбезпечніше охолодити до запуску фільтра. Як тільки розчин MEA досягне приблизно 50 ° C, ви зможете наповнити ним чашки Петрі.
Налийте і закупоріть чашки Петрі
Для цього надіньте одноразові рукавички та маску для обличчя. Потім очистіть руки дезінфікуючим засобом. Також обприскайте ним упаковку чашок Петрі. Також змочіть поверхню пляшки з молоком та алюмінієву фольгу дезінфікуючим засобом. Тепер максимально зніміть фольгу, щоб можна було зняти кришку. Розкрийте упаковку чашок Петрі чистим/стерильним ножем і вийміть стільки чашок Петрі одночасно, скільки складених і складених однією рукою зверху. Помістіть посуд один на одного, а поруч відкритий розчин MEA. Знову почистіть руки дезінфікуючим засобом, а потім починайте розливати чашки Петрі.
Для цього однією рукою схопіть чашки Петрі зверху і залиште лише нижню частину нижньої чашки. Візьміть пляшкою молока іншою рукою і швидко налийте розчин у миску. Знову покладіть всі чашки Петрі, складені одна на одну, і цього разу підніміть їх, за винятком найнижчої вже розлитої чашки Петрі та нижньої частини другої чашки Петрі, яку ви тепер можете наповнити MEA тощо. Таким чином чашки Петрі можуть повільно твердіти і лише трохи утворюється конденсат.