ТЕСТУВАННЯ SARS-CoV-2 Medlife CORONAVIRUS
Автор: Доктор Василеску Роксана, головний медичний працівник лабораторії MedLife Grivita, Бухарест
SARS-CoV-2 (Тяжкий гострий респіраторний синдром Коронавірус 2) належить до сімейства Coronaviridae, групи бета-коронавірусів.
коронавіруси являють собою віруси з оболонкою одноланцюгового типу РНК великих розмірів, приблизно 125 нм. Вірусний геном кодує 16 неструктурних білків і 4 структурні білки.
Останніми є: білок S (колосок), білок E (оболонка), білок M (мембрана) та білок N (нуклеокапсид).
Ряд коронавірусів (HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-HKU1, HCoV-OC43) викликають ендемічні легкі респіраторні захворювання, включені до групи звичайних «застуд» або «поширених респіраторних вірусів». Два інших коронавіруси спричинили важкі спалахи дихання. Мова йде про:
• SARS-CoV, виявлений у 2002 році на півдні Китаю, у швидко поширюваному глобальному регіоні Гунагдун, і який на момент зникнення в 2004 році спричинив понад 8000 випадків людських захворювань та 774 смертей (9,5% смертності)
• MERS-CoV (Близькосхідний респіраторний синдром коронавірусу), виявлений у 2012 році в Саудівській Аравії, широко поширений у 27 країнах і все ще циркулює на Близькому Сході, який на сьогодні визначив 2521 випадок та 919 смертей (смертність 35 %), що асоціює шлунково-кишкові симптоми та гостру ниркову недостатність.
Природним резервуаром цих вірусів, здається, є популяції кажанів. У людини вони передаються через проміжного господаря. Якщо у випадку SARS-CoV та MERS-CoV цей проміжний господар відомий (цивета, відповідно верблюд), то для SARS-CoV-2 все ще неможливо точно вказати.
ГРВІ-Cov-2 у світі та в Румунії
В кінці 2019 року новий коронавірус був визначений причиною спалаху пневмонії у місті Ухань - місті провінції Хубей, Китай. Він швидко поширився, що призвело до епідемії по всьому Китаю. 11 березня ВООЗ оголосила пандемію коронавірусу. Перший випадок, підтверджений у Румунії, був 26 лютого чоловікові з повіту Горж. 16 березня в Румунії було оголошено надзвичайний стан, а 22 березня в Румунії було повідомлено про перші випадки смерті від COVID-19. На сьогоднішній день смертність у Румунії серед людей, інфікованих ГРВІ-CoV-2, залишається близько 5,6% порівняно з рівнем тестування в країні.
ГРВІ-CoV-2 викликає респіраторну інфекцію під назвою COVID-19 (коронавірусна інфекційна хвороба - 2019) із середнім періодом інкубації близько 5 днів (межі 2-14 днів). Хвороба характеризується переважно респіраторними симптомами (лихоманка, кашель, утруднене дихання) середньої інтенсивності приблизно в 80% випадків, але може мати важкі прояви (двостороння інтерстиціальна пневмонія), з прогресуванням до дихальної недостатності, гострим респіраторним дистрес провідна причина смерті. Бувають також випадки з шлунково-кишковими проявами (особливо діареєю), а у деяких пацієнтів (особливо молодих) гіпо/аносмія (втрата нюху) та гіпо/дисгевзія (втрата смаку) повідомляються як ранні симптоми.
Як тестувати?
Контрольний тест для специфічного діагнозу COVID-19 проводиться за технологією NAAT (технологія ампліфікації нуклеїнових кислот), відповідно ПЛР зворотної транскрипції в реальному часі (qRT-PCR).
Цей тест виявляє наявність вірусної РНК в носоглотці; іншими словами, це свідчить про наявність вірусу.
Серологічні дослідження проводяться на крові та показують наявність антивірусних антитіл (SARS-CoV-2), антитіл, які представляють імунну відповідь організму господаря на наявність вірусу. Ці антитіла - це імуноглобуліни, що належать до класів A, M, G, рідше D.
Попередні моделі встановлено серологічних реакцій типу антитіл на вірусні інфекції, вцілому, наступна послідовність цих антитіл з часом з моменту зараження вірусом:
• найбільш ранніми є IgA,
• уважно стежте за IgM,
• IgG-антитіла з'являються останніми і залишаються з високим титром протягом більш тривалого періоду часу, ніж попередні (IgA та IgM).
Для деяких вірусів існує період, коли антиген (сам вірус) співіснує (можна ідентифікувати) з антитілами, особливо ранніми антитілами IgA та IgM. Інші віруси мають період «серологічного вікна», тобто часовий інтервал між зникненням антигену (в крові) і появою антитіл, отже, тимчасовим інтервалом, в якому інфекція не може бути виявлена (минула).
Антитіла типу IgG - це пізні антитіла, які зазвичай з’являються після зникнення антигену. Для більшості вірусів антитіла IgG, що зберігаються в крові протягом тривалого періоду часу, вважаються захисними антитілами; якщо є новий інфекційний контакт з тим самим вірусом, або вірус нейтралізується негайно і не починає локалізуватися і розмножуватися на клітинному рівні, або цикл розмноження може розпочатися на клітині-хазяїні, але його наслідки (тому симптоми захворювання ) значно нижчі, ніж при первинній інфекції.
Що говорять дослідники про серологію?
В даний час специфічна імунна відповідь організму на інфекцію SARS-CoV-2 є предметом численних досліджень у всіх країнах. На сьогоднішній день немає повної перевіреної інформації як про динаміку антитіл до часу зараження, так і про їх стійкість після елімінації та нейтралізації здатності вірусу, тому їх здатність захищати від вірусної інфекції за допомогою SARS-CoV- 2. У більшості опублікованих досліджень посиланням на динаміку антитіл є поява симптомів, а не час зараження. На європейському рівні все ще проводяться дослідження серед населення для встановлення серорозповсюдженості, корисної для заходів боротьби з інфекцією з точки зору громадського здоров'я та розуміння важливості безсимптомних інфекцій.
За умови все ще неповної інформації про імунітет після зараження ГРВІ-CoV-2, серологічні тести можуть бути корисними для виявлення осіб, у яких розвинулася імунна відповідь, як частина активної інфекції або в результаті попередньої інфекції. Результати серологічних досліджень особливо важливі при діагностиці безсимптомних або безсимптомних інфекцій. Хоча повної інформації про імунітет після цієї інфекції ще немає, серологічні дані можуть ідентифікувати суб'єктів, які більше не сприйнятливі до інфекції. Це також може бути корисним для виявлення потенційних донорів плазми, які можуть бути використані при лікуванні важких форм.
Крім того, серологічні тести можуть допомогти діагностувати активну інфекцію, коли RT-PCR є негативним у пацієнта з пізньою стадією зараження COVID)
Серологія в поєднанні з RT-PCR також збільшує рівень виявлення SARS-VOC-2 до 98,6%.
Однак серологічні тести мають ряд обмежень. Негативні серологічні результати не можуть виключити зараження ГРВІ-COV2, особливо коли зараження недавнє. З іншого боку, існує ризик позитивних результатів через перехресну реактивність з антитілами, що утворюються в результаті зараження іншими коронавірусами. Серологічний метод вважається затвердженим, якщо він дає результати, які правильно визначають наявність або відсутність антитіл, на заздалегідь визначеному рівні статистичної достовірності.
Незважаючи на те, що низка імунологічних тестів є комерційно доступними, їх точність для діагностики та оптимального використання повинна залишатися захищеною, чекаючи випробування часом.
Антитіла IgG до MedLife
Тести на антитіла IgG та IgM на аналітичній системі Abbott - це якісні серологічні тести, засновані на хемілюмінесценції мікрочастинок (CMIA). Виявляються вірусні нуклеокапсидні антитіла проти SARS-CoV-2. Білок N у вірусному нуклеокапсиді є найпоширенішим, імуногенним та добре збереженим вірусним компонентом, і вважається хорошим діагностичним маркером.
Для антитіл IgG критеріями ефективності тесту є наступні:
Позитивний прогноз (122 зразки від 31 суб'єкта підтвердили позитивним методом ПЛР):
• • 3 - 7 днів від початку симптомів: 25,00%
• 8 - 13 днів з моменту появи симптомів: 86,36%
•> = 14 днів від початку симптомів: 100,00%
Негативне прогнозування (997 сироваток попереднього вересня 2019 р. + 73 зразки у пацієнтів з респіраторними симптомами, протестовані негативно на ПЛР на nCOV)
• Зразки негативних пацієнтів на nCOV: 100,00%
Дослідження перехресної реактивності: 182 зразки підтверджених пацієнтів з 36 різними інфекційними захворюваннями
• 181 зразок був негативним щодо nCOV
• 1 з 5 зразків у пацієнтів з CMV IgG був позитивним