ВЕРХ-аналіз методу оптимізації вітаміну С та створення довідкових значень - PDF безкоштовно

З центральної лабораторії кампусу Любека Медичного центру університету Шлезвіг-Гольштейн Керівник: проф. мед . Сейфарт та медичний факультет Любецького університету Декан: проф. мед . Сольбах ВЕРХ аналіз вітаміну С: оптимізація методу та створення еталонних значень Інавгураційна дисертація на здобуття ступеня доктора університету Любека - медичного факультету - представлена ​​Корнелією Арлін Фокке з Бремена Любек 2010 1

вітаміну

1. Доповідач: проф. мед. айкл сейфарт 2-й доповідач: приват-доз. Лікар. мед. Gunther Eitz День усного іспиту: 06.06.2010 Схвалено до друку. Любек, 6 вересня 2010 р. Підписав професор д-р мед. ернер Сольбах - декан медичного факультету 2

їжте те, що можна виміряти. (Галілео Галілей) 3

2.2.8 Дослідження стабільності зразків. 31 2.2.9 Оптимізовані методи ВЕРХ для визначення аскорбінової кислоти в сироватці та плазмі. 32 2.2.10 Дослідження сечі та ліквору вітаміну С. 32 2.3 Валідація методу. 33 2.3.1 Експертизи на правильність. 33 2.3.2 Точні дослідження. 33 2.3.3 Дослідження на межі виявлення та кількісної оцінки. 34 2.3.4 Дослідження лінійності вимірювань. 34 2.4 застосування методів: визначення контрольних значень та дослідження кінетики вітаміну С. 34 2.4.1 Довідкові значення. 34 2.4.2 Кінетика. 35 2.5 Статистичні методи. 35 3. Результати. 37 3.1 оптимізація та перевірка методів. 37 3.1.1 Стаціонарна фаза. 37 3.1.2 Фаза рухомості. 37 3.1.3 Внутрішній стандарт. 40 3.1.4 Правильність. 40 3.1.5 Точність. 41 3.1.6 Межа виявлення. 41 3.1.7 Лінійна обідня зона. 3.1.8 Стабільність зразків вітаміну С. 42 3.1.9 Вимірювання зразків сечі та ліквору. 46 3.2 застосування методів. 47 3.2.1 Визначення еталонного значення. 47 3.2.1.1 Обстеження на вікові відмінності. 3.2.1.2 Обстеження гендерних відмінностей. 51 3.2.2 Кінетика вітаміну С. 53 4. Обговорення. 56 4.1 оптимізація методу. 56 4.2 Обмеження методу. 58 4.3 Довідкові значення. 58 4.4 Кінетика. 59 4.5 Можливе використання. 60 4.6 Outlook. 60 5

5. Підсумок. 61 6. Додаток. 62 Бібліографія. 67 Подяка. 80 резюме. 81 Декларація про незалежність та заява про застосування. 82 6

Список абревіатур Рис Рисунок Аква дистильована вода d день ECD електрохімічне виявлення EDTA етилендіамінтетраоцтова кислота ВЕРХ високоефективна рідинна хроматографія I.U. міжнародні підрозділи i.v. внутрішньовенно кг кг кг маси тіла л літр ЛПНЩ ліпопротеїдів низької щільності мг іліграмм хв інут мл іллілітр мкмоль ікромоль ммоль ілімол ПА метафосфорна кислота на наноампер №. Кількість pavk периферична артеріальна оклюзійна хвороба PCA перхлорна кислота rp ВЕРХ зворотно-фазова ВЕРХ RT Кімнатна температура див. Стандартне відхилення SD Таблиця. Таблиця U обертів УФ ультрафіолетовий V вольт VK коефіцієнт варіації 7

Крім того, через інтерфейс, який дозволяє контролювати систему, а дані вимірювань записувати та обчислювати за допомогою комп'ютера. Рис. 5: Зображення системи ВЕРХ з рухомою фазою (розчинник), насосом, системою впорскування (інжектор), колоною (колонка ВЕРХ), детектором (детектором), відходами (асте) та підключеним комп’ютером для оцінки даних (даних) ( http://www.chemistry.nmsu.edu/instrumentation/aters_hplcsystem.gif). Оскільки сполуки утримуються на твердій фазі протягом різних періодів часу (час утримання), речовини можна ідентифікувати, тобто можливий якісний аналіз. На хроматограмі графічне зображення сигналу детектора (вісь у) щодо часу (вісь х), висота прогину, так званий пік, також дозволяє визначити концентрацію, тобто кількісний аналіз, за ​​допомогою розрахунку висоти або площі. Рис.6: Приклад хроматограми. Величина відхилення (вісь у) наноситься на графік відносно часу (вісь х) (час утримання). А і В показують дві вершини різної висоти. 20-го

Систематичне дослідження стабільності зразків у різних середовищах Створення референтних значень для різних вікових груп Дослідження кінетики вітаміну С у здорових добровольців. Крім того, слід перевірити, чи оптимізований метод принципово також підходить для визначення вітаміну С в інших біологічних рідинах, особливо в сечі і спинномозкової рідини. 26-й

2. Матеріал та методи 2.1 Обладнання, випробувальні матеріали, хімікати 2.1.1 Обладнання Система ВЕРХ: L-6220 Інтелектуальний насос (Erck Hitachi) D-6000A Інтерфейс (erck Hitachi) AS-2000A Автовідбірник (Erck Hitachi) Дегазатор (Knauer) L- 4250 УФ-VIS-детектор (erck Hitachi) Амперометричний детектор L-3500A (рецепт erck) Колонка і захисна колонка ВЕРХ: Synergi 4 мкм Hydro-RP 80A 150 x 4,6 мм (Phenomenex 00F-4375-E0) Комплект охоронних картриджів, AQ -C18 Картридж 4 х 3,0 мм (Phenomenex AJ0-7511) Програмне забезпечення для ВЕРХ: odel D-7000 Хроматографічне програмне забезпечення для станцій обробки даних Система HPLC анагер (erck) Система фільтрації: Вакуумний фільтруючий пристрій (іліпоре) Ацетатний фільтр целюлози 0,2 мкм розмір пор Sartorius AG 11107-47-N) Інші пристрої: ph-етер (ettler Delta 345) Vortex ischer aage (ettler Toledo Ag 241) ультразвукова ванна 2.1.2 Сироватки, плазми, ліквор та сеча Сироватки та плазма: Для розробки методу та перевірки були Залишкові сироватки та плазми, сечі та лікери з рутинного аналізу центральної лабораторії U університетська лікарня 27