ДНК вірусу герпесу людини (HHV) типу 6 (кров, ліквор) - Synevo
Загальна інформація
Герпесвірус людини типу 6 - Герпесвірус людини 6 (HHV-6) - був виділений в 1986 р. Салагуддіном та співавт. . Він належить до підродини β-герпесвірусів, роду Roseolovirus, і описаний у двох варіантах: A та B. HHV-6B є основним агентом, який бере участь в етіології стану шкіри - екзантема субтитуму (roseola infantum або 6-та дитяча хвороба) - в тоді як HHV-6A виявляли головним чином у імунітетів із порушеннями імунітету 2 .
HHV-6 - вірус ДНК, його геном оточений ліпідною оболонкою. Як і інші віруси герпесу, HHV-6 викликає як первинні інфекції, так і реактивацію прихованих інфекцій. .
HHV-6 поширений повсюдно, 95% населення мають антитіла до HHV-6; Зазвичай вірус передається через слину інфікованих людей.
In vivo HHV-6 інфікує та розмножується в CD4-позитивних лімфоцитах через клітинний рецептор CD46, який є трансмембранним глікопротеїном 52-57 кДа, який взаємодіє з вірусними глікопротеїнами: gH, gL, gQ1 або gQ2.
Під час гострої інфекції реплікація відбувається в лімфоцитах (B, T, NK), макрофагах, гістіоцитах, ендотеліальних клітинах, гепатоцитах, слинних залозах та центральній нервовій системі. HHV-6A переважно вражає нервові клітини, тоді як HHV-6B частіше зустрічається в мононуклеарах периферичної крові. Вірус виробляє прямий цитоліз, цей ефект відповідає за шкірні прояви та подібні до інфекційного мононуклеозу. HHV-6 збільшує експресію CD4 на поверхні Т-лімфоцитів, що призводить до підвищеної сприйнятливості до ВІЛ-інфекції.
Первинне зараження відбувається після інкубаційного періоду 1-2 тижні, як правило, у немовлят (40 - 50% дітей хворіють на перший рік життя, відсоток заражених досягає 77 - 82% у віці до 2 років)., з піком між 9 і 21 місяцями) і відповідає за третину випадків фебрильних судом у дітей у віці 6-24 місяців. Приблизно 25% інфекцій HHV-6 проявляється у вигляді екзантеми підкішечника (roseola infantum), що характеризується високою температурою, що триває 3-4 дні, а потім макулярними або макулопапульозними висипаннями, які виникають, коли температура нормалізується. Висипання починаються від тулуба або шиї, поширюються на обличчя та кінцівки і тривають від кількох годин до 2 днів. Захворювання також може супроводжуватися: кашлем, шийною або потиличною лімфаденопатією, дратівливістю, кон’юнктивітом, набряком повік, випинанням фонтану, ринореєю або діареєю. Клінічні прояви тривають в середньому 9 днів і рідко ускладнюються менінгітом або енцефалітом.
HHV-6 є рідкісною причиною менінгіту; вірус також може спричинити енцефаліт у здавалося б здорових дітей із порушенням свідомості, судомами, психозом або паралізацією черепних нервів. У більшості випадків саме паненцефалія може бути пов’язана із стійкими неврологічними наслідками 2. ДНК HHV-6 була виявлена в лікворі у ліквору у приблизно 57% дітей 1 .
Гостра інфекція HHV-6 рідко зустрічається у імунокомпетентних дорослих і може проявлятися як синдром, подібний до інфекційного мононуклеозу з лихоманкою, лімфаденопатією, генералізованою висипкою, фульмінантним гепатитом, тромбоцитопенічною пурпурою, міокардитом або енцефалітом.
Після первинної інфекції вірус залишається прихованим у лімфоцитах і моноцитах, зберігається на низькому рівні в різних клітинах або тканинах і може реактивуватися при порушенні імунної системи. У імунокомпетентних осіб ця стійка інфекція не має наслідків.
Реактивація HHV-6 є загальним проявом у імунодепресивних осіб (50% пацієнтів з трансплантацією гемопоетичних стовбурових клітин та 33% пацієнтів із трансплантацією твердих органів), а вірусну ДНК можна виявити в периферичній крові. Реактивації відбуваються в перший місяць після трансплантації і частіше трапляються у пацієнтів, які отримують анти-CD3 антитіла або кортикостероїди, або у тих, хто пройшов алогенну трансплантацію або стовбурові клітини пуповини. У пацієнтів часто спостерігається лихоманка та висип у ранній посттрансплантаційний період. HHV-6 інфікує гемопоетичні клітини-попередники, пригнічуючи утворення колоній in vitro, і в деяких дослідженнях він асоціювався з пригніченням кісткового мозку та пізньою трансплантацією. 95% вірусних реактивацій у пацієнтів з трансплантацією гемопоетичних стовбурових клітин обумовлені HHV-6B.
Найкращим задокументованим проявом у пацієнтів із пригніченим імунітетом є енцефаліт. Вони виникають з інтервалом у 2-6 тижнів після трансплантації з головним болем, сплутаністю свідомості, судомами, психозом або дефіцитом черепно-мозкових нервів. Хоча обстеження КТ зазвичай є нормальним на початковій фазі, МРТ вказує на відхилення сірої речовини скроневих часток у 75% пацієнтів. Позитивний діагноз встановлюється на підставі наявності вірусу в лікворі.
Також повідомлялося про випадки гігантоклітинного гепатиту, коліту та гастродуоденіту, пов’язаного з HHV-6, у пацієнтів з трансплантацією.
HHV-6 рідше причетний до енцефаліту та пневмонії у хворих на СНІД, і, як вважають, не впливає на швидкість прогресування ВІЛ-інфекції до стадії СНІДу.
HHV-6 асоціюється з розсіяним склерозом на основі виявлення ДНК та вірусних антигенів у лікворі та у мозку. Таким чином, HHV-6 був виявлений в ядрах олігодендроцитів у місцях ураження хворих на розсіяний склероз, дослідники виявили сильну зв'язок між наявністю антитіл до HHV-6 IgM у лікворі та ранніми стадіями розсіяного склерозу. Деякі стверджують, що вірусна інфекція відіграє важливу роль у патогенезі захворювання, завдяки молекулярній імітації, вірусні білки поперечно реагують з основним білком мієліну. Однак необхідні подальші дослідження для повного визначення ролі HHV-6 при розсіяному склерозі 2. .
Позитивний діагноз первинної інфекції може бути продемонстрований шляхом сероконверсії антитіл IgG з негативної в позитивну або за наявності антитіл IgM. Збільшення титру антитіл IgG у 4 рази свідчить про активне захворювання. Однак серологічний діагноз не може диференціювати первинну інфекцію від реактивації. Альтернативним методом діагностики є виявлення вірусної ДНК у сироватці крові або плазмі до появи антитіл, але цей метод менш специфічний, ніж сероконверсія.
У осіб із ослабленим імунітетом важливо розрізняти приховану інфекцію (без клінічних проявів) та реактивацію, що може бути досягнуто шляхом визначення вірусної ДНК у плазмі 2. .
Рекомендації щодо визначення HHV-6 - ДНК - корисний для швидкої діагностики інфекцій HHV-6 4 .
Навчання пацієнта - не потрібно 3 .
Зібраний зразок - а) прийде кров; б) ліквор, зібраний поперековою пункцією 3 .
Збиральний контейнер - а) пилосос, що містить ЕДТА як антикоагулянт; б) стерильний контейнер для ліквору 3 .
Кількість зібраного - а) стільки, скільки дозволяє вакуум; б) мінімум 2 мл 3 .
Необхідна обробка після збору врожаю - а), б) пробеле ні буде центрифуговано 3 .
Причини відхилення доказів - а) старі, коагульовані, гемолізовані зразки; використання гепарину як антикоагулянта 3 .
Перевірка стійкості - зразки крові або ліквору стабільні протягом 1 тижня при 2-4 ° C 3 .
Метод - ПЛР в режимі реального часу Light-Cycler: ланцюгова реакція полімеризації з виявленням накопиченого продукту ПЛР у реальному часі шляхом вимірювання випромінюваної флуоресценції (тест буде проводитися з плазми або ліквору) 3 .
Довідкові значення - HHV-6 не виявляється ДНК 3 .
Межа виявлення - 10 дітей/зразок 3 .
Інтерпретація результатів
Отримання позитивного результату для плазмової ДНК HHV-6 за наявності клінічної картини є показником активної інфекції.
Виявлення ДНК HHV-6 у спинномозковій рідині свідчить про інфекцію в центральній нервовій системі, але не має абсолютного діагностичного значення (може бути ДНК HHV-6 у лікворі та інших захворюваннях ЦНС, не пов’язаних із цим вірусом; також також може бути виявлений у пацієнтів без неврологічних синдромів) 1; 2; 4 .
Межі та перешкоди
Негативний результат не виключає зараження HHV-6 4 .
Корисність ПЛР-тесту для діагностики інфекцій HHV-6 ускладнюється тим, що HHV-6 інтегрується в хромосомну ДНК у 0,7-1,5% людей. Стовбурові клітини, що містять вбудовані копії HHV-6, передають вірусну ДНК реципієнтам трансплантатів. З цієї причини, якщо аналізований зразок містить лейкоцити, можна отримати позитивний результат за відсутності активної інфекції 2 .
1. Гай Бойвін. Діагностика герпесвірусних інфекцій центральної нервової системи. В HERPES 11, Додаток, 2004.
2. Джеффрі І. Коен, людський герпес, типи 6 та 7. У „Принципах та практиці інфекційних хвороб Манделла, Дугласа та Беннета”, 7-е видання, Churchill Livingstone, Elsevier, 2010, 2011-2014.
3. Синевська лабораторія. Конкретні посилання на робочу технологію, що використовується 2015 р. Тип посилання: Каталог.