Доповіді Aurich Science Days DIfE (III)
Звіт про стажування
Стажування в DIfE Potsdam-Rehbrücke
з 7 по 18 жовтня 2019 року
Автор Антьє Сукен
Завдяки Ауріхським науковим дням я зміг пройти двотижневе стажування в Німецькому інституті харчових досліджень у Потсдамі під час осінньої перерви. Я хотів пройти стажування в Німецькому інституті харчових досліджень, тому що хочу професійно зорієнтуватися в галузі харчування. У Німецькому інституті харчових досліджень мене призначили в область діабетології під керівництвом професора Шюрмана. Моєю контактною особою був доктор Лежер, постдок мого керівника Терези.
день 1
Першого дня мене прийняв секретар, який показав мені інститут і дав лабораторне пальто та ключі від шафки та лабораторії.
Потім мене познайомили з доктором Представник Леджер та його команда. Дослідження стосується уникнення діабету типу 2. Діабет 2 типу - це коли органи стають стійкими до інсуліну, який повинен стимулювати органи до засвоєння глюкози. Однак, якщо органи стійкі до дії інсуліну, глюкоза всмоктується мало або взагалі не всмоктується. Це змушує підшлункову залозу виробляти більше інсуліну, думаючи, що глюкози більше, оскільки вона не засвоюється. Через деякий час підшлункова залоза завдає значної шкоди і виробляє менше або зовсім більше інсуліну.
Досліджуючи дієти, вони виявили, що рівень цукру в крові діабетиків 2 типу не такий високий на дієті з низьким вмістом білка, як на інших дієтах. Це підняло питання “чому?”. Чому люди, які харчуються з низьким вмістом білка, поглинають глюкозу з крові, а ті, хто на іншій дієті, ні?
З’ясувалося, що білок FGF21 виробляється в печінці за допомогою дієти з низьким вмістом білка, що змушує організм помітити, що йому потрібна енергія, і таким чином стимулює органи засвоювати глюкозу. Таким чином, FGF21, що означає «фактор росту фібробластів 21», виконує роль інсуліну. Однак повністю уникнути білка дуже складно і майже нестерпна дієта. Тоді було розглянуто питання, чи слід приймати не лише певний тип необхідного білка, а саме метіонін. Кожен уникає метіоніну, дотримуючись дієти з низьким вмістом м’яса.
На засіданні команди мене тоді привітав професор і вони обговорили завдання на найближчий тиждень.
Потім я спостерігав, як моя керівник Тереза працює над західним сюжетом, за яким можна визначити розмір білків. Пізніше я приготував чашки Петрі для майбутніх досліджень клітин острівців.
день 2
Другий день знову розпочався з приготування страв Петрі. Потім мені показали клітинну лабораторію, де клітини вирощують для різних експериментів. Пізніше я зробив пробний запуск з Терезою для експерименту на наступний день, коли печінку виймали у миші, щоб отримати матеріал для подальших досліджень.
Після обідньої перерви я провів визначення білка у іншого стажиста, в якому білки порівнювали зі стандартами. Це тривало до кінця робочого дня, тому що нам довелося багато піпетувати, що виявилося дуже трудомістким.
День 3
Вранці я та мій керівник підготували лабораторію до передбачуваного експерименту на миші. Це миша В7, вони дуже худі і в експерименті віком 10-18 тижнів. Ми виклали все необхідне та змішали рішення для експерименту.
Після того, як все було підготовлено, першу мишку знеболили. Через кілька хвилин було проведено тест, щоб визначити, чи миша більше нічого не відчуває. Потім його розкрили на животі, а шлунок з тонкою і товстою кишкою ретельно виклали з тіла, щоб оголити порожнисту вену. У порожнисту вену була введена голка, яка прокачує через неї буфер 1. Тим часом ворітна вена відкривається, щоб кров могла виходити з організму. Буфер 1 робить печінку легшою і трохи більшою. Через деякий час буфер 1 обмінюється на буфер 2. Буфер 2 забезпечує розчинення клітин печінки в печінці.
Коли печінка стає губчастою, її вирізають з тіла. Печінка розміщується на текстильному зрізі і стискається пінцетом. Печінка стає рідиною. Потім клітини печінки приводили в контакт з буфером 3 і центрифугували. В результаті бажані клітини осідають на підлозі, а «відходи» плавають у буфері 3. Буфер 3 обережно утилізують, свіжий буфер 3 додають до клітин печінки і клітини обережно видаляють з підлоги за допомогою піпетки. Його знову центрифугують і буфер 3 знову утилізують. Потім підраховується невелика частина білків, яка потім обчислюється відповідно до розмірів, а потім підраховується, скільки мікролітрів знаходиться на площі. До клітин додається ще одна речовина, яка є як їжа для клітин. Клітини можуть вижити близько трьох днів.
День 6
Вранці я приготував наконечники піпеток для автоклаву, а потім приготував чашки Петрі. Потім ми продовжили експеримент з 3-го дня. Ми обробляли отримані клітини антитілами, щоб відокремити від них білки. Ми підрахували ці білки за допомогою машини, тобто зробили визначення білка. FGF21 також підраховується для того, щоб з'ясувати залежність або зв'язок між FGF21 та білками.
День 7
Вранці я знову підготував наконечники піпеток для автоклаву. Потім ми з керівником захотіли повторити експеримент з 3-го дня. Однак, на жаль, нам не вдалося завершити експеримент, оскільки він не спрацював через проблеми, що виникли. У другій половині дня я допоміг іншій докторантці в підготовчій роботі до експерименту. Вона вилучила органи з восьми мишей, які я потім зважив і задокументував. Я також вимірював рівень миші в крові. Потім я заморозив органи за допомогою рідкого азоту.
День 8
На восьмий день я вперше спостерігав, як ми вбивали мишей, щоб дістатися до підшлункової залози. Коли викрили підшлункову залозу, в сусідню кровоносну судину вводили колагеназу, в результаті чого підшлункова залоза набрякала і перетворювалася на гелеподібну масу. Потім підшлункову залозу врятували від тіла миші з якомога меншим контактом, щоб запобігти витоку острівцевих клітин. Ми повторили процес на семи інших мишах. Потім мій керівник підрахував острівцеві клітини в окремій підшлунковій залозі. У другій половині дня, щоб практикувати піпетування, я провів ще одне визначення білка з лаборантом, оскільки піпетування є важливою навичкою в галузі досліджень у лабораторії.
День 9
Того дня ми зробили вестерн-блот. Білки переносяться на мембрану-носій. Для цього ми спочатку зробили гель, який повинен був трохи відпочити. Потім ми додали дуже маленькі кольорові пігменти. Потім гель поміщали в пристрій, який був наповнений рідиною та електрифікований, щоб білки стікали вниз через гель.
Приблизно через півтори години кольорові пігменти досягли самого дна і в гелі з’явились поодинокі кольорові позначки. Потім гель поміщають на мембранний папір і загортають у фільтрувальний папір та губки в інший пристрій, що забезпечує перенесення білків з гелю на мембранний папір. Пізніше мембранний папір кілька разів промивають розчином, а потім потенціюють молокоподібною речовиною. Приблизно через 30 хвилин він додатково посилюється в холодному середовищі.
День 10
В останній день я підготував певні речовини для подальших експериментів. Я також кілька разів промивав і сушив мембранний папір. Потім ми оцінили це в машині. В обідній час я розпочав свій від'їзд.
Висновок
Мені дуже сподобалось стажування в DIfE, тому що мене тепло зустріли, і це було для мене дуже повчально. Було дуже весело і дуже цікаво спостерігати, як це працює в лабораторії. Мені особливо сподобалась лабораторна робота.
Я також отримав розуміння досліджень, і лише зараз справді можу уявити, як це працює. Це багато спільного з офісною роботою, і вам доведеться багато досліджувати та застосовувати, перш ніж ви навіть зможете розпочати. Я також зрозумів, що багато досліджень не працюють, і це справжнє питання терпіння, щоб просунутися вперед. Це було приємне розуміння професійного світу. Я познайомився з багатьма людьми, які всі навчались у різних галузях і отримав багато підказок.