Функціональні наслідки мутацій MC4R при ожирінні у дітей - Інститут Danone
Сьогодні 15% дітей у США та 12,7% дітей у Європі страждають ожирінням. Ця проблема із зайвою вагою, як правило, супроводжується низкою серцево-судинних та/або метаболічних захворювань на більш тривалий або коротший термін. Тому одним із пріоритетів сьогодні є виявлення патофізіологічних механізмів, що беруть участь у цій складній багатофакторній хворобі.
Дослідження на гризунах нещодавно виявили участь рецептора меланокортину типу 4 (MC4R) у контролі вагового гомеостазу. Насправді було показано, що на тваринах лептин, гормон, який регулює споживання їжі, що виробляється жировою тканиною, зв’язується з нейрональними рецепторами, розташованими в гіпоталамусі, де стимулює синтез меланокортинів, які зв’язуються з MC4R. Активація цього рецептора призводить до гальмування прийому їжі. У людини мутації MC4R відповідають за моногенну форму ожиріння, і вважається, що вони відповідають за майже 6% важкого ожиріння у дітей, фенотип якого різниться від дитини до дитини.
Метою дослідження Беатріс Дюберн є оцінка частоти мутацій MC4R та їх функціональних наслідків. Вона буде зосереджена на 200 дітей із ожирінням, набраних із відділення дитячої гастроентерології та харчування лікарні Арман Труссо, Париж.
Пряме секвенування області кодування гена MC4R для кожного з цих 200 дітей спочатку визначатиме поширеність мутацій MC4R. Потім будуть вивчатися функціональні зміни, викликані мутацією, для кожної з виявлених мутацій. Робити
- Кодуюча послідовність для мутованого рецептора буде ампліфікована, а потім клонована у вектори експресії, що дозволяє мітити MC4R флуоресцентним білком. Потім дослідження мембранної експресії мутованого рецептора проводиться за допомогою імунофлуоресценції
- Дослідження зв'язування мутантних рецепторів з лігандами буде проводитися за допомогою міченого агоніста рецептора та збільшення концентрацій лігандів
- Дослідження шляху трансдукції мутованого рецептора буде проведено шляхом вимірювання продукції цАМФ у клітинних лініях, трансфікованих плазмідою, що експресує люциферазу, під контролем залежного промотору цАМФ.
Всі ці аналізи дозволять краще зрозуміти механізми ожиріння, пов'язані з мутаціями MC4R. Крім того, використання цих різних методів функціонального аналізу може згодом бути розглянуто в клінічних дослідженнях для вивчення сімей дітей з мутацією MC4R. На додаток до свого патофізіологічного інтересу, це дослідження буде цінним для розробки фармацевтичних методів лікування осіб, які мають мутації MC4R.