Коливання часу утримання - Частина 1 SHIMADZU DEUTSCHLAND
9 - час утримання частина 1
10 - час утримання частина 2
11 - Життя колонки - Частина 1
12 - Життя колонки - Частина 2
Найбільш поширеними типами виявлення при ВЕРХ є виявлення УФ-поглинання, флуоресценції та показника заломлення. Ці типи виявлення не є специфічними для речовини, і в більшості випадків аналіти призначаються через час утримання. Якщо час утримання коливається, можуть бути неправильні результати. Тому відтворюваність часу утримання має велике значення.
На наступному, а також на наступному тижні, представлені різні впливи.
1. Вплив температури
Як і при багатьох проблемах при ВЕРХ, температура також впливає на час утримання. Чим вище температура, тим менша в'язкість рухомої фази. Тому зворотний тиск у системі також зменшується із підвищенням температури. Як правило, зміна температури на 1 ° C призводить до зміщення часу утримування на 1-2%. Отже, зсув у часі внаслідок коливань температури є більшим для пізньо елюйованих аналітів. У наступних чотирьох парабенах вимірювали при різних температурах.
Якщо порівняти вимірювання при 20 і 50 ° C, загальний час роботи зменшується майже вдвічі. Звичайно, цей вплив також може бути використаний для оптимізації або скорочення методу за умови, що він залишається в специфікаціях колонки. Однак при дуже високих температурах можна очікувати, що більшість колон мають менший термін служби.
Однак, якщо для оптимізації слід використовувати температуру, слід зазначити, що не всі аналіти реагують однаково на зміну температури. Як показано в прикладі праворуч, вони можуть поводитися дуже по-різному. Поки аналіти розділяються при 20 ° C, сорбінова кислота та бензойна кислота элюируются при 30 ° C. Якщо температуру додатково підвищити, послідовність елюції може бути навіть зворотною. Якщо цього не помітити, тут також можуть траплятися неправильні результати.
У кращому випадку використовуйте колоночну піч, щоб підтримувати температуру колонки якомога постійнішою.
1: сорбінова кислота, 2: бензойна кислота, 3: метилпарабен
2. Зміна швидкості потоку
Кожен насос має певну кількість витратних деталей, які слід регулярно замінювати. Наприклад, більшість поршневих ущільнень призначені для перекачування певного обсягу. Якщо знос занадто сильно прогресував, вони можуть витікати і тим самим впливати на швидкість потоку. Якщо час утримання коливається, несправність насоса також може бути проблемою.
Найпростіший спосіб перевірки насосів - це їх калібрування. Для цього візьміть вимірювальний циліндр, підключіть капіляр протитиску безпосередньо до насоса і встановіть заданий потік. Тепер порівняйте час, за який перекачується певний об’єм, із заданою швидкістю потоку.
Регулярно перевіряйте витратні матеріали вашої ВЕРХ. Також тримайте готові запасні частини, щоб дефектні деталі можна було швидко замінити.
На жаль, усі заходи, що ведуть до стабілізації хроматографічних умов, мало допомагають, якщо ви працюєте з дуже надійними методами. За таких умов навіть незначні зміни, наприклад, температури або елюентів, мають великий вплив на час утримання.
В результаті зразки часто доводиться повторювати або оцінку переробляти вручну. Це велика проблема, особливо в регульованих умовах.
Краще інвестувати більше часу у розробку надійних методів. У ретроспективі у вас буде менше зусиль і більше часу в рутині, а час, вкладений раніше, буде амортизований дуже швидко.
Що слід враховувати щодня:
Загальне:
- Проводити регулярні тести на придатність
- Регулярно перевіряйте витратні матеріали
- Документація про час утримання, розчинення та ін еталонних розчинів
Система:
- Для регулювання температури використовуйте колоночну піч
- Ведіть щоденник колонок
- Ведення документів
Наступний тиждень із впливом складу елюентів, колони та часу врівноваження також визначає коливання часу утримання.