Лікарські засоби, виготовлені з рослинних екстрактів як інгібітори ліпази - SCHREZENMEIER JUERGEN

1. Застосування таких речовин, речовинних екстрактів або речовинних есенцій як окремих компонентів або у вигляді суміші для виробництва перорально введеного препарату, який діє як інгібітор ліпази:
Кардамон та/або
Майоран та/або
Чебрець та/або
Чилі (Capsicum frutescens) та/або
Примула вечірня та/або
Листя материнки (oreganum vugare) та/або
Листя ромашки (Chamomilla recutica) та/або
Мускатний горіх (Myristica fragrans) та/або
Яблучний пюре (вичавка) та/або
Зернові зародки та/або
Мигдаль та/або
Фундук та/або
Волоський горіх та/або
Насіння гарбуза та/або
Cuphea wrightii та/або
Примула вечірня та/або
Льон олійний (Linum usitatissimum) та/або
великий лопух (Arctium lappa L) та/або
Льон та/або
Зародки Helianthus annuus (соняшник) та/або
Чорнобривці (Calendula officinalis) та/або
Echinops banaticus та/або
Mallotus philippinensis та/або
Ріпак та/або
Кунжуту та/або
чорний кмин та/або
Cynoglossum officinale та/або
Лапахотея та/або
Arctostaphylos uva-ursi та/або
Кам'яна квітка (Flor de piedra) та/або
Прополіс та/або
Primula Veris та/або
Магнолія лікарська та/або
Селера (Apium graveolens)

2. Використання наступних речовин, екстрактів речовин або есенцій речовин як окремих компонентів або сумішей
Кардамон та/або
Майоран та/або
Чебрець та/або
Чилі (Capsicum frutescens) та/або
Примула вечірня та/або
Листя материнки (oreganum vugare) та/або
Листя ромашки (Chamomilla recutica) та/або
Мускатний горіх (Myristica fragrans) та/або
Яблучний пюре (вичавка) та/або
Зернові зародки та/або
Мигдаль та/або
Фундук та/або
Волоський горіх та/або
Насіння гарбуза та/або
Cuphea wrightii та/або
Примула вечірня та/або
Льон олійний (Linum usitatissimum) та/або
великий лопух (Arctium lappa L) та/або
Льон та/або
Зародки Helianthus annuus (соняшник) та/або
Чорнобривці (Calendula officinalis) та/або
Echinops banaticus та/або
Mallotus philippinensis та/або
Ріпак та/або
Кунжуту та/або
чорний кмин та/або
Cynoglossum officinale та/або
Лапахотея та/або
Arctostaphylos uva-ursi та/або
Кам'яна квітка (Flor de piedra) та/або
Прополіс та/або
Primula Veris та/або
Магнолія лікарська та/або
Селера (Apium graveolens)
як інгібітори ліпази.

Цього можна систематично досягти за допомогою активних інгредієнтів, які самі поглинаються або інактивуються під час травлення, і таким чином видаляються з реакційної маси за допомогою комплексу ліпаза-коліпаза-жир.

Введення інгібіторів ліпази вважається корисним ліками для пацієнтів із симптомами метаболічного синдрому. Крім того, інгібуючий ліпазу рослинний екстракт або виділені з нього компоненти можуть бути використані як харчові добавки.

Використання рослинних екстрактів як можливих інгібіторів ліпази в шлунково-кишковому тракті названо з декількох патентів. Це японські програми з такими номерами: JP 2003 026 585, JP 2002 275 077, JP 2002 047 194 .

Позитивний вплив рослинних екстрактів на ліпідний профіль після їжі було описано в декількох публікаціях, а саме таких речовин, як Zylokaria Paliurus, виноградні кісточки, шавлія, Cassia mimosoides, L. var. Nomame Makine та Alpinia officinarum.

Крім того, винахід поставив перед собою завдання визначити інші рослини, які можна використовувати як інгібітори ліпази.

Для вирішення цієї проблеми згадуються екстракти або есенції наступних речовин та їх суміші.
Кардамон
майоран
чебрець
Перець чилі (Capsicum frutescens)
Примула вечірня
Листя материнки (oreganum vugare)
Листя ромашки (Chamomilla recutica)
Мускатний горіх (Myristica fragrans)
Яблучний соус (вичавка)
Зернові зародки
мигдаль
фундук
волоський горіх
Гарбузове насіння
Cuphea wrightii (e)
Примула вечірня
Льон олійний (Linum usitatissimum)
великий лопух (Arctium lappa L) (e)
Льон (е)
Зародки Helianthus annuus (соняшник) (e)
Чорнобривці (Calendula officinalis) (e, h)
Echinops banaticus
Mallotus philippinensis (e)
Ріпак, (e)
Кунжут
чорний кмин (іменник)
Cynoglossum officinale
Лапахотея (е)
Arctostaphylos uva-ursi
Кам'яна квітка (flor de piedra)
Прополіс
Primula Veris
Магнолія лікарська
Селера (Apium graveolens)

Опис приготування екстрактів а) екстракти CO 2:

Екстракція високого тиску надкритичним вуглекислим газом. Не містить води, цукру та білків.

Кардамон:

Частина рослини, що використовується: насіння з капсулами від Elettaria cardamomum.
Сировину отримували з Гватемали.
Консистенція екстракту: масляниста рідина
Екстракт містить 72% ефірних масел
Інші компоненти:
α-пінен, β-пінен, β-мірцен, 1,8 цинеол, ліналоол, α-терпінеол, ліналілацетат, терпінілацетат

Майоран:

Частина рослини, що використовується: Листя материнки материнки
Консистенція екстракту: масляниста рідина
Екстракт містить 80% ефірних масел
Інші компоненти:
Сабінен, цис і транс Сабіненгідрат, Терпінен-4-ол, Сабіненгідратацетат

чебрець

Частина використовуваної рослини: листя тимусу вульгарного. Сировину отримували з Німеччини. Для отримання додаткової інформації див. Вище Кардамон.

Інгібуючі ліпазу речовини в рослинних екстрактах ще не вдалося ідентифікувати.

Опис препарату та порядок визначення активності ферментів. Приготування досліджуваного розчину

Для приготування досліджуваного розчину з екстрагованого порошку та рідкого матеріалу 200 мг екстрагованого матеріалу розчиняють у 1 мл відповідного розчинника та інтенсивно перемішують. Після центрифугування при 3400 обертах протягом 5 хвилин отриманий рідкий компонент використовують як тест-розчин. Для регулювання співвідношення між концентрацією твердих складових та масою ферменту в останньому експерименті досліджуваний розчин розводили у співвідношенні 1: 200 для того, щоб визначити лужну фосфатазу.

Для приготування досліджуваного розчину з екстрактів CO 2 та олеорезинів 100 мкл маслянистого рідкого екстракту розчиняють у 900 мкл відповідного ферментного буфера та обробляють ультразвуком при 100 Вт протягом 5 хвилин.

Панкреатична ліпаза (панкреатична ліпаза)

Для визначення активності ліпази підшлункової залози in vitro проводили два визначення ліпази:

1. Аналіз для визначення активності ліпази складається з
- 200 мкл 50 мМ/л буфера BICIN (pH 8,0), що містить 1% технічної гуміарабіки.
- 50 мкл розчину рослинного екстракту та
- 25 мкл 0,35 мМ/л розчину підшлункової ліпази

Цю суміш інкубували протягом 20 хвилин при 37 ° С.

Остаточне вимірювання активності ліпази підшлункової залози проводиться в автоаналізаторі для клінічної хімії (Konelab, Kone) з використанням ліпазного колориметрового тесту з діацилгліцерином з метилрезоруфіном на третьому місці як субстрату та коліпази та солей жовчі як основних факторів. Цей процес є специфічним для ліпази підшлункової залози і заснований на ферментах, що відщеплюють метилрезоруфін від субстрату.

Для визначення активності підшлункової ліпази в автоаналізаторі була обрана наступна схема піпетування:

1. 60 мкл реагенту 1: коліпаза та холат
2. 2 мкл досліджуваного розчину + 10 мкл промивного розчину
3. Інкубація 180 секунд
4. 40 мкл реагенту 2: колориметричний субстрат і холат
5. Інкубація протягом 120 секунд

Активність ліпази визначали на основі 12 точок вимірювання через 83 секунди. Метилрезоруфін вимірювали фотометрично при 75 нанометрах.

2. Інгібування ліпази під впливом рослинних екстрактів визначали за допомогою другого методу вимірювання активності ліпази, при якому вимірюють вивільнення вільних жирних кислот під час гідролізу з триолеїну ферментом.
Готовий до використання розчин (реагент R1) використовується для приготування інкубаційної суміші. R1 складається з:
26 ммоль/л трис-буфера, рН 9,2
19 ммоль/л дезоксихолату натрію
0,1 ммоль/л хлориду кальцію
0,3 ммоль/л триолеїну
300 КО/л коліпази

Інкубаційна суміш складається наступним чином:
50 мкл 26 ммоль/л трис-буфера, рН 9,2
50 мкл 9,7 ммоль/л емульсії триолеїну в R1
50 мкл 0,134 моль/л панкреатичної ліпази в 26 ммоль/л трис-буфера рН 9,2
50 мкл досліджуваного розчину

1% метилцелюлози в 26 ммоль/л трис-буфера (рН 9,2) використовували для дослідження екстрактів CO 2.

Через час інкубації 30 хвилин при 37 ° на водяній бані реакцію зупиняли додаванням 3 мл суміші хлороформ-гептан-метанол (50: 49: 1). Вивільнені вільні жирні кислоти екстрагували з реакційної суміші енергійним перемішуванням протягом 10 хвилин. Після центрифугування (3400 обертів, 10 хвилин) отримують залишок 2 мл із фази хлороформу та 1 мл з мідного реагенту (94 мл чистої води, 6 мл 1 N NaOH, 6,45 ммоль/л на Cu (NO 3) 2, Додають 0,1 моль/л триетаноламіну, 33% (мас./Об.) NaCl). Цю суміш інтенсивно перемішували протягом 10 хвилин і центрифугували при 3400 обертах протягом 10 хвилин. 1 мл видаляли з надосадової рідини і додавали 1 мл хлороформу при 0,1% батокупроїну та 0,05 (мас./Об.) 3-трет-бутил-4-гідроксианізолу. Комплекс жирних кислот-міді-батокупроїну остаточно визначають фотометрично при 480 нм у стандартному фотометрі.

Для того, щоб переконатися, що зниження активності ліпази не зумовлене неспецифічним інгібітором ферменту або денатурацією ферментного комплексу, також визначали активність α-амілази та лужної фосфатази. Інгібування α-амілази може призвести до зниження рівня цукру в крові після їжі і розглядається як додатковий позитивний ефект для пацієнтів з діабетом.

Вимірювання активності амілази під впливом рослинних екстрактів проводили наступним чином:
Інкубаційна суміш для визначення активності амілази складається загалом з 250 мкл:

- 200 мкл 50 мМ/л буфера MOPSO (pH 8,0) з 1% арабію камеді
- 25 мкл розчину рослинного екстракту та
- 25 мкл 0,35 мМ/л розчину α-амілази

Цю суміш інкубували 20 хвилин при 38 ° С. Остаточне вимірювання активності ліпази підшлункової залози проводиться в автоаналізаторі хімічної хімії (Konelab, Kone).

Принцип хімічної реакції:

1. Етилен-п-нітрофенол- (глюкоза) 7 → етилен- (глюкоза) 3-4 + ρ-нітрофенол- (глюкоза) 2-4
2. Залишки ρ-нітрофенолу (глюкози) → ρ-нітрофенол (λ = 405 нм) + глюкоза

Процедуру піпетування в автоаналізаторі для визначення активності α-амілази проводили наступним чином:

1. 120 мкл реагенту: субстрат + α-глюкозидаза
2. 300 секунд інкубації
3. 3 мкл розчину для тестування
4. Інкубація 180 секунд

Активність α-амілази визначається вимірюванням 5 балів за 120 секунд.

Вимірювання активності лужної фосфатази під впливом рослинних екстрактів проводили наступним чином:
Складалася інкубаційна суміш для визначення активності ліпази

- Містить 200 мкл 50 мМ/л буфера HEDTA (рН 8,0),
- 25 мкл розчину для випробування рослинного екстракту та
- 25 мкл 0,014 мМ/л розчину лужної фосфатази

Суміш інкубували протягом 20 хвилин при 22 ° С.

Остаточне вимірювання активності панкреатичної ліпази проводили в автоаналізаторі для клінічної хімії (Konelab, Kone).

Рівняння реакції

2-аміно-2-метил-1-пропанол + 4-нітрофеніл фосфатний ефір → (2-аміно-2-метил-1-пропаноо) фосфат + 4-нітрофеноксид (λ = 409 нм)

Процедура піпетування в автоаналізаторі для визначення активності лужної фосфатази була наступною:

1. 150 мкл реагенту
2. 300 сек. Інкубація
3. 3 мкл розчину для тестування
4. Інкубація протягом 120 сек

Активність лужної фосфатази визначали за допомогою 5 точок вимірювання за 22 секунди.

Результати% інгібування ферментів у ферментативних тестах: