Новий метод мікроскопії для тонкої локалізації білків Université de Rennes 1
В межах ізольованих тканин та органів метод кореляційної мікроскопії, розроблений у Ренні (платформа UMS Biosit/Mric), підпадає під Array Tomography. Він поєднує в собі фотоніку та скануючу електронну мікроскопію. Він особливо оптимізований для збереження флуоресценції та інновацій, дозволяючи проводити аналіз великих поверхонь неруйнівним способом. Публікація в журналі «Розвиток».
- Додайте якості двох технік візуалізації
- Особливо інноваційна техніка
- Протокол коротко
- Довідково
Питання клітинної біології та розвитку вимагають знання місця розташування певних клітин або організмів у безлічі різноманітних біологічних тканин, наприклад, під час диференціального дослідження між мутантним модельним організмом та диким організмом.
Новий метод корелятивної мікроскопії, що допомагає тонкій локалізації білків у ізольованих тканинах або органах, щойно був розроблений у Ренні, на платформі Mric UMS Biosit під керівництвом Т'єррі Гійо. Ця робота була створена завдяки співпраці з доктором Іриною Колотуєвою з Лозаннського університету.
Додайте якості двох технік візуалізації
Клітинна візуалізація є важливим інструментом для розуміння біологічних процесів, а світлова мікроскопія - важливим інструментом для відповіді на запитання про розташування, динамічну активність та взаємодію білків. І це в різних органах чи в клітинних структурах.
Трансмісійна електронна мікроскопія (ТЕМ) забезпечує точну ультраструктурну інформацію на наномасштабі.
Особливо інноваційна техніка
- перенесений на предметне скло або в кремнієву пластину,
- швидко перевіряється за допомогою світлової або електронної мікроскопії, щоб спочатку вивчити загальну анатомію зразка
- потім більш конкретно для вивчення клітин або органів, що представляють інтерес.
Протокол коротко
Спочатку була розроблена методика Array Tomography (AT) для визначення місцезнаходження певних білків, присутніх у синапсах.
По суті, зразки вкладають у гідрофільну смолу і нарізають ультрамікротомом на довгі стрічки з послідовними ділянками, які потім переносять на предметне скло. Після цієї підготовки можливо декілька стратегій візуалізації:
- мультиплексна світлова мікроскопія для виявлення множинних флюорофорів,
- TEM-аналіз серійних зрізів для відновлення обсягу придбання та розпізнавання області, що цікавить, та забезпечення збереження клітинної ультраструктури,
- Корельована мікроскопія між фотонікою та електроном, заснована на збереженні флуоресценції (у смоляному блоці та в розрізі), а також на правильній ультраструктурній якості скануючої електронної мікроскопії (скануюча електронна мікроскопія або SEM).
Метод Ренна AT-SEM дозволяє ефективно та полегшити локалізацію структур (клітин, конкретних органел) в межах різноманітних та різноманітних біологічних тканин, зокрема на асиметричних зразках та модельних організмах (Caenorhabditis elegans, Drosophila melanogaster, Danio rerio).
Довідково
Аньес Бурель, Марі-Терез Лаво, Клеман Шевальє, Гельмут Гнєгі, Сільвен Приджент, Антоніо Муччоло, Стефанія Дутертре, Бруно М. Хамбель, Т'єррі Гійоде, Ірина Колотуєв
Розробка 2018 145: dev160879 doi: 10.1242/dev.160879 Опубліковано 21 червня 2018 року
Поділіться
Контакти
Відповідає за наукове спілкування