Плазмовий (активний) грелін

Загальна інформація та рекомендації щодо визначення граду

Грелін - це гормон з пептидною структурою (28 амінокислот), що виробляється ендокринними клітинами слизової оболонки шлунково-кишкового тракту (головним чином клітинами P/D1 шлунка), а також клітинами епсилону в підшлунковій залозі, відповідальними за стимулювання голоду.

Він був виділений в 1999 році із шлунка щурів і описаний як ендогенний ліганд для рецептора гормону росту секретагоги (GHS-R) в гіпофізі. Грелін стимулює вивільнення гормону росту не так, як GHRH (гормон, що вивільняє гормон росту).

Хімічно грелін має унікальну структуру завдяки ацилюванню залишків серину в положенні 3 амінокислотного ланцюга октановою кислотою - процесом жирної кислоти, що каталізується нещодавно ідентифікованим ферментом GOAT (грелін О-ацилтрансфераза). Октаноїлювання має важливе значення для біологічної активності гормону.

Грелін виділяється як попередник - препрогрелін; Після посттрансляційних змін утворюється як ацильована форма - ацил-грелін -, так і неацильована де-ацил-грелінова форма. Обидва типи греліну присутні в циркуляції, але переважає дезацил-грелін - форма, позбавлена ендокринної активності, але яка має певні клітинні ефекти, згідно з останніми дослідженнями.

Орексигенна дія греліну зумовлена діями на дугоподібні та паравентрикулярні ядра гіпоталамусу, які, як відомо, беруть участь у регуляції апетиту. Таким чином, грелін активує нейрони, що містять орексигенні пептиди (NPY - нейропептид Y та AgRP - пов’язані з агуті пептиди), та інгібує ті, що містять анорексигенні пептиди (CART - кокаїн та пов’язаний з амфетаміном транскрипт та POMC - про-опіомеланокортин). Лептин чинить протилежний вплив на ті самі нейрони, припускаючи, що два гормони є доповнюючими компонентами регуляторної системи, яка інформує центральну нервову систему про гострий та хронічний енергетичний дисбаланс. У свою чергу, нейрони в дугоподібному ядрі передають імпульси нейронам, що містять орексин, у бічній гіпоталамусовій області, стимулюючи тим самим апетит.

Грелін нещодавно був причетний як до регуляції інсуліну, так і до гомеостазу глюкози. Таким чином, більшість досліджень вказують на зворотну кореляцію між системним рівнем греліну та інсуліну. Інсулін знижує рівень греліну, а грелін пригнічує секрецію інсуліну. Гіперглікемічний ефект греліну обумовлений, з одного боку, його ендокринною дією, а з іншого - безпосереднім впливом на гепатоцит для стимулювання глюконеогенезу. Щодо його ролі у діабеті, низький рівень греліну асоціюється з резистентністю до інсуліну, гіпертонією та поширеністю діабету II типу. Більше того, низький рівень греліну також був виявлений у пацієнтів з діабетом І типу (гормон, схоже, відіграє роль у регенерації клітин бета-підшлункової залози) 1 .

Навчання пацієнта - збирання врожаю проводитиметься вранці в умовах голодування (натщесерце) 4 .

Зібраний зразок - венозна кров; вакутейнер дуже обережно струшують, перевертаючи, і негайно кладуть на лід; транспортувати до лабораторії якомога швидше 4 .

Збиральний контейнер - вакутейнер з ЕДТА К3 + апротинін (рожева кришка), що зберігається в холодильнику до збору врожаю; апротинін використовується для запобігання деградації протеази ацильованого греліну 2 .

Кількість зібраного - поки вакуум дозволяє 4 .

Необхідна обробка після збору врожаю - протягом максимум 30 хвилин після збору врожаю плазму відокремлюють центрифугуванням (бажано у центрифузі, охолодженій до 2-8 ° C) протягом 10 хвилин при 3500 об/хв; пластикова піпетка використовується для відділення плазми; відокремлену плазму негайно підкислюють до рН 3-4 (додають 100 мкл 1N HCl на кожні 1 мл плазми), а потім знову центрифугують протягом 5 хвилин при 3500 об/хв; супернатант переносять у вторинну пробірку; зразок обробляється негайно; якщо це неможливо, плазма зберігається при -20 ° C у пластиковому контейнері (поліпропілен або полістирол); зразки, зібрані поза приміщеннями лабораторії, транспортуються до контейнера для заморожених зразків 2; .

Стабільність зразка - плазма стабільна протягом тривалого часу при -20 ° C або при -70 ° C; не розморожувати/не заморожувати 2; 4 .

Метод - ІФА; тест, проведений у нашій лабораторії, виявляє ацильовану форму - активний грелін.

Довідкові значення -.

Межа виявлення - 4 пг/мл 4 .

Інтерпретація результатів

Рівень плазми збільшується безпосередньо перед кожним прийомом їжі і знижується до мінімуму протягом 1 години після прийому їжі. Величина і тривалість зниження після їжі залежить від кількості калорій та жирності вживаної їжі. Пригнічення після прийому їжі нижче у пацієнтів із ожирінням, грелін, ймовірно, сприяє патогенезу ожиріння.

Циркулюючий рівень греліну обернено корелює з індексом маси тіла (ІМТ). Таким чином, рівні нервової анорексії та кахексії збільшуються, знижуються при ожирінні та нормалізуються після отримання ідеальної ваги. Винятком із асоціацією з ІМТ є синдром Прадера-Віллі, при якому ожиріння асоціюється з високим рівнем греліну.

Рівні греліну змінюються в інших клінічних станах:

Зниження: після шлункового шунтування та резекції шлунка, хронічного гастриту, асоційованого з інфекцією H. pylori, гіпертиреозу (пояснює втрату ваги, яка зазвичай зустрічається в цих умовах), синдрому короткої кишки (ймовірно, через втрату тканин, що продукують грелін), чоловічий гіпогонадизм, синдром полікістозу яєчників, синдром Кушинга.

Низький рівень греліну незалежно пов'язаний з діабетом I та II типу.

У літніх людей зафіксовано зниження рівня греліну.

Зростання: нервова булімія, хронічне обмеження їжі, гриліноми шлунку або підшлункової залози 1 .

Межі та перешкоди

На рівень греліну в плазмі впливає ряд гормонів, ліків та інших речовин:

Зниження: інсулін, пероральна або внутрішньовенна глюкоза, соматостатин та його природний аналог кортикостатин, анорексигенні пептиди (YY пептид, оксинтомодулін, урокотин-1), гормони щитовидної залози, глюкокортикоїди.

Підвищується: агоністи ацетилхоліну, комбіноване введення GHRH та аргініну, тестостерону (у пацієнтів з гіпогонадизмом), естрогену та фактору росту інсуліну-1 (IGF-1 у пацієнтів з нервовою анорексією) 1 .

Бібліографія:

Аделіно Ф. Лейте-Морейра та Жоао-Бруно Соарес. Фізіологічна, патологічна та потенційна терапевтична ролі греліну. У „Відкритті наркотиків сьогодні”, том 12, вип. 7/8, квітень 2007 р.
Хіросі Хосода та ін. Оптимальні умови збору та зберігання для вимірювання греліну: октаноїлова модифікація греліну швидко гідролізується до дезацилового греліну у зразках крові. У клінічній хімії, 2004, т. 50, No 6, 1077-1080.
Korner J та співавт. Вплив операції шлункового шунтування на Roux-en-Y на концентрації греліну в плазмі, пептиду YY та інсуліну натще і після їжі. У J- Clin. Ендокринол. Метаб. 90, 359 + 365, 2005.
Синевська лабораторія. Конкретні посилання на використовувану технологію роботи. 2012. Тип посилання: Каталог.
М. Кодзіма, К. Кангава. Грелін: Будова та функції. У Physiol Rev 85: 495–522, 2005.