Протокол ниткоподібних грибів (переклад французькою мовою)
Стенограма
Зверніть увагу, що всі переклади створюються автоматично.
Ниткоподібні гриби - це багатоклітинні еукаріотичні організми, які часто знаходяться у великій кількості в грунті, відіграючи важливу роль в екосистемі. Гриби можна виділити, кількісно оцінити та дослідити в лабораторії.
Грибів багато в поверхневих грунтах і відіграє важливу роль у кругообігу поживних речовин та розщепленні органічних речовин та забруднень. Будучи не в змозі синтезувати власну їжу, вони класифікуються як аеробні гетеротрофи і тому потребують кисню.
У культивованих грибах ґрунти зразків розводять до відомих концентрацій у стерильній воді, потім засівають на агар та інкубують. Потім отримані колонії грибів можна підрахувати та ідентифікувати.
Це відео ілюструє принципи виділення, кількісного визначення та ідентифікації ниткоподібних грибів.
Грунти зазвичай містять мільйони грибів на грам; тому серійні розведення використовуються для підготовки зразків ґрунту до аналізу. Дану кількість грунту додають до дисперсійного розчину. Аликвоти суспензії переносять у послідовний буферний розчин до тих пір, поки суспензія не розведеться настільки, щоб дати можливість ізольованим колоніям грибів рости.
Потім ці розведення висівають на агарові середовища та інкубують. Як тільки вони сформують видимі колонії грибів, ви зможете рахувати. Оскільки передбачається, що кожна колонія грибів походить від одного організму, термін колонієутворюючі одиниці, або КУО, використовується для вираження кількості організмів, розрахованої на грам сухого ґрунту.
Більшість грибів ростуть у вигляді гіф - довгих, розгалужених структур, які є основним способом вегетативного росту. Гіфні агрегації називаються міцелієм. Гриби також можуть існувати як одноклітинні організми, дріжджі є відомим прикладом.
Розмноження грибка може відбуватися кількома шляхами. Гриби, що продукують гіфи, можуть розмножуватися безстатевим шляхом, фрагментуючи гіфи або стебла з насіннєвими спорами. Одноклітинні гриби можуть розмножуватися нестатевим шляхом брунькуванням.
Гриби також можуть розмножуватися статевим шляхом. Це рідше, ніж безстатеве розмноження, і зазвичай відбувається у відповідь на несприятливі умови навколишнього середовища. Виробники грибів-гіф, дві репродуктивні гіфи різних штамів грибів можуть зливатися, створюючи зиготу. У простих одноклітинних грибах злиються дві протилежні стовбурові клітини.
Родючі грунти зазвичай містять в межах 106 "грибкових пропагул" на грам сухої маси. Пропагули - це спори грибів, гіфи або фрагменти гіф. Використання культивованих підрахунків - це швидкий, недорогий і відтворюваний метод для з’ясування вмісту грибків. Однак результати можуть бути упередженими тим, що не всі організми будуть культивувати на пластинах середовища.
Рожево-бенгальські агари з антибіотиками, такими як стрептоміцин, зазвичай використовують для грибкових культур. Оскільки бактерій переважає кількість грибів у більшості ґрунтів, ідеальні грибкові середовища відбиратимуть ріст бактерій, дозволяючи грибам вижити. Рожево-бенгальський барвник стримує ріст більшості бактерій і зменшує розмір колоній грибів. Він ідеально підходить і запобігає розмноженню грибкових бляшок, а також контролює бактерії.
Тепер, коли ми знайомі з принципами вирощування ниткоподібних грибів, давайте подивимось, як це робиться в лабораторії.
Після відбору проб ґрунту віднесіть їх у лабораторію для аналізу. Спочатку розрахуйте вологість ґрунту. Додайте деіонізовану воду, щоб зменшити вміст вологи до 15%.
Оберніть контейнери поліетиленовою плівкою та закріпіть гумкою, щоб обмежити випаровування. Кілька разів проткніть плівку, щоб забезпечити вентиляцію.
Зважте зразок грунту та контейнер та папку. Інкубуйте при кімнатній температурі протягом тижня, щоб забезпечити ріст природних грибів.
Зважте зразки ґрунту та ємності та запишіть вагу. Обчисліть втрату ваги через втрату вологи протягом тижня. Додайте води в землю, щоб повернути вагу до початкового значення.
Додайте 10 г вологого ґрунту до 95 мл дистильованої води і ретельно перемішайте. Це розведення ґрунту 10-1 10 г об’ємом приблизно 5 мл. Проведіть чотири серії розведень по 1 мл у 9 мл заготовок водою з цього вихідного розчину.
Потім зберіть вісім пластинок стерильного агару Троянда-Бенгалія-Стрептоміцин. До двох пластин додайте 0,1 мл пробірки для розведення 10-2 і розподіліть поверхню агару за допомогою стерилізованого розподільника для полум’яного склоподібного етанолу. Оскільки нанесено 0,1 мл мл, що робить ефективне розведення 10-3.
Вони інкубують у темній шафі при кімнатній температурі протягом тижня.
Через тиждень підрахуйте різні колонії на кожній тарілці. Слід підрахувати пластини з 10 - 20 колоніями грибків. Відзначте та опишіть відмінні риси бляшок або колоній.
Візьміть чистий скляний скляний мікроскоп і покладіть в центр краплю рідини для монтажу лактофенолу. Пінцетом, щоб уникнути забруднення, виріжте смужку прозорої целофанової стрічки довжиною близько 3 см. При необхідності скористайтеся голкою для розсічення, щоб звільнити стрічку від щипців.
Нанесіть липку сторону клейкої стрічки на поверхню спороносної колонії грибка, обережно, щоб уникнути надмірного тиску. Потім нанесіть клейку сторону стрічки зі зразком спор на рідину для кріплення на предметному склі. Акуратно натріть смужку гладким плоским інструментом, щоб видалити бульбашки повітря.
Розгляньте редагування стрічки під чудовим потужним об'єктивом.
Гриби можна ідентифікувати під мікроскопом, досліджуючи плодові тіла та спори. Ключ ідентифікації грибка може полегшити цей процес. Поширені види грибів, що спостерігаються, включають пеніцилій та аспергіл.
Використовуючи пластини, гриби можна перерахувати за тією ж методикою, що і при переліку бактерій.
Ідентифікація та вирощування грибів корисні для різних наукових програм.
Такі галузі, як виробництво целюлози та паперу, можуть використовувати ниткоподібні гриби для деградації деревини в процесі виробництва целюлози, використовуючи техніку, яка називається біодеградацією. Такі гриби, як біла гниль, можуть ефективно розщеплювати чіпси, що призводить до зменшення потреби у використанні хімічної або механічної целюлози.
Гриби також можна використовувати для розщеплення інших матеріалів, включаючи деякі види біологічно розкладаються пластмас. Це може бути корисно для сільського господарства або садівництва, де біологічно розкладається мульча може бути використана для створення тимчасових бар'єрів для росту небажаних рослин.
Гриби також є виробниками антибіотиків, сполук, які революціонізували медицину в 20 столітті і сьогодні продовжують залишатися передовим захистом від інфекцій. Пеніцилін, зазвичай антибіотик, був виділений із звичайних ниткоподібних грибів Penicillium rubens. Донині ниткоподібні гриби все ще виділяють і вивчають у пошуках нових антибіотиків.
Ви щойно переглядали вступ JoVE до ниткоподібних грибів. Тепер ви повинні зрозуміти, як вирощувати ниткоподібні гриби з ґрунту, як їх кількісно оцінити та як визначити типи грибів, які зазвичай зустрічаються в грунті. Дякую за перегляд !