Протокол утримання та вирощування риб даніо (переклад французькою мовою)
Стенограма
Зверніть увагу, що всі переклади створюються автоматично.
Для успіху експериментів з даніо добре потрібне хороше розведення. Оптимальна якість води сприяє зміцненню здоров’я риби та експериментальній відтворюваності. Крім того, виробництво яєць даніо сильно залежить від правильного харчування. У цьому відео описується спосіб розміщення та годування риби в лабораторії, поради щодо утримання та управління запасами, а також короткий огляд того, як маніпулюють середовищем даніо в біологічних експериментах.
Почнемо з перегляду основ природного середовища існування риб.
Дикі даніо данини є рідними для прісних вод Гімалаїв. У цьому кліматі риба проводить більшу частину часу, купаючись серед млявих водойм прісної води.
Як цей рай відтворений в лабораторії? Почнемо з найважливішої частини: води. Незважаючи на те, що прісну воду здається легко отримати, водопровідна вода токсична для даніо через хлор та потенційні забруднювачі. Отже, акваріумну воду потрібно пропускати через систему очищення, наприклад, систему зворотного осмосу. Потім до очищеної води додають буфер солі та рН для оптимізації солоності та рН.
Щоб максимізувати експериментальну ефективність, багато риб розміщуються в обмеженій кількості води. Бруд швидко накопичується з усіма цими рибами, що робить необхідне оновлення води. Ця потреба створює високий попит на воду, тому рибні споруди використовують систему рециркуляції, щоб мінімізувати використовувану воду. Брудна вода фільтрується та стерилізується за допомогою УФ-обробки перед поверненням до системи.
Рибок даніо поміщають у спеціальні резервуари, які бувають різних розмірів. Ємності накриті для зменшення випаровування та запобігання виходу риби. Щоб резервуар міг інтегруватися в систему, кришка має отвори, через які постійно тече чиста вода. Рівень води залишається стабільним завдяки отвору для переливу в задній частині резервуара, який захищений перегородкою з невеликими отворами, що дозволяє брудній воді, але не рибі, виходити.
Незважаючи на обмін водою, у резервуарах все ще можуть утворюватися водорості та тверді відходи, тому їх потрібно регулярно чистити.
Контроль екологічних параметрів у рибних господарствах також надзвичайно важливий. Температура тримається близько 28 ° C або 80 ° F. Щоб підтримувати циркадний ритм тварин, світло кружляє 14 годин світла і 10 годин темряви.
Тепер, коли ми побачили умови утримання даніо, давайте поговоримо про їх раціон.
У своєму природному середовищі існування даніо в основному споживає зоопланктон та комах. Ця дієта відтворена в лабораторії, поєднуючи сушену їжу та дрібні організми. Личинки або молоді риби добре ростуть із живими мікроорганізмами, такими як парамецій, тоді як дорослих риб часто годують комерційними порошками та дрібними ракоподібними, що називаються соляними креветками.
Ці тварини особливо схильні до лабораторної підготовки, оскільки їх яйця можуть зберігатися як сплячі цисти при кімнатній температурі. Щоб підготувати креветки до їжі, їх шкаралупу видаляють відбілюванням. Потім декапсульовані яйця ретельно промивають. Потім яйця переносять в аеровану колону, щоб забезпечити їх ріст у солоній воді близько доби. Нарешті, вилуплені креветки збирають і промивають на друшляку і після розливу в їжу. Рибу зазвичай годують 2-3 рази на день, чергуючи живий і сухий корм, і в цей період потік води перекривається, щоб їжа не зникала до того, як її з’їсти.
Тепер, коли ви знаєте, як розміщувати та годувати риб, настав час навчитися працювати з ними та відстежувати свій запас риби.
У лабораторних приміщеннях мешкає безліч різних видів даніо - від диких штамів до риб, геноми яких були змінені з руйнівними мутаціями та введені трансгени. Для відстеження всіх цих риб тварин з однаковим генетичним походженням поміщають разом у марковані резервуари. Етикетки резервуарів містять сувору ідентифікаційну інформацію, включаючи генотип риби та дату її народження.
Плодючість даніо починає знижуватися після першого року життя, тому запаси повинні поповнюватися щороку. Данини данини від інбредних штамів погано виживають, тому генетичне різноманіття потрібно підтримувати, збираючи потомство від неспоріднених кросів риб або "ауткросів" .
При перетині трансгенних або мутантних ліній потомство, що має бажану генетичну модифікацію, слід ідентифікувати за допомогою експресії флуорофорів або їх генотипу. Щоб знати генотип, спочатку знеболіть рибу трикаїном. Потім відріжте невелику частину хвостового плавника як джерело ДНК.
Нарешті, виділіть ДНК із зразка плавника та використовуйте її для аналізу ПЛР для ідентифікації конкретних послідовностей. Очікуючи результатів, тримайте кожну рибу у своєму маленькому резервуарі, позначеному ідентифікатором.
Тепер, коли ми розглянули стандартні умови вирощування риби, давайте розглянемо кілька способів маніпулювання цими умовами для вивчення біологічних процесів.
Температура води може глибоко вплинути на здоров’я даніо. Щоб створити модель цукрового діабету, ці дослідники обробляють риб підшлунковою токсином, стрептозоцином, і розміщують їх у резервуарах із зниженою температурою води. Риби з діабетом демонструють очікувані фенотипи, такі як пошкодження нирок та очей, а також знижену регенерацію хвостового плавника, і можуть бути використані для вивчення біології діабету.
Клітини також можна модифікувати для конкретних експериментальних цілей. Дослідження поведінки рибного плавання можна використовувати як міру тривоги, агресії або соціальної поведінки. Тут відеовідстеження використовується для аналізу різниці у поведінці плавання між необробленою рибою та рибою, яка отримує нейроактивні препарати. Такі дослідження допомагають покращити наше розуміння неврології та можуть бути інструментом для виявлення наркотиків.
Зміна освітленості також може вплинути на даніо. Для придушення світлочутливих клітин із сітківки можна використовувати інтенсивне лікування світлом. Ці риби мають здатність відновлювати тканини сітківки, пошкоджені переростанням клітин, що представляє значний інтерес для дослідників при дегенерації сітківки людини.
Ви щойно переглянули відео JoVE про догляд та розведення даніо. Ми переглянули основи того, як цих риб розміщують, годують та керують ними в лабораторії. Дякуємо за перегляд !