SERVALНабір EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP Substra Kit - PDF Free Download
КЕРІВНИК ДЛЯ КОРИСТУВАЧІВ Набір підкладки EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP (Кат. № 42586) SERVA Electrophoresis GmbH Carl-Benz-Str. 7 D-69115 Гейдельберг Телефон + 49-6221-138400, факс + 49-6221-1384010 електронна адреса: [email protected] http://www.serva.de
Зміст 1. SERVALIGHT EOSULTRA 2 1.1. Загальна інформація 2 1.2. Компоненти набору 2 1.3. Умови зберігання 2 2. ВИКОНАННЯ ВИЗНАЧЕННЯ 3 2.1. Важливо на початку 3 2.2. Необхідні матеріали та розчини, що не постачаються 4 2.3. Вестерн-блот-схема виявлення 5 2.4. Протокол 5 3. РІШЕННЯ ПРОБЛЕМ 7 4. ІНФОРМАЦІЯ ПРО ЗАМОВЛЕННЯ 8 Вер 03/12 1
1. SERVALight EosUltra 1.1. Загальна інформація SERVALight EosUltra - це високочутливий хемілюмінесцентний субстрат для виявлення кон'югатів пероксидази хрону (HRP), наприклад мічені антитіла на імуноблоти. Інтенсивність сигналу субстрату дозволяє виявляти антиген у нижньому діапазоні фемтограм (10-15). Переваги: виявлення на плівках або в системах документації, придатних для хемілюмінесценції, наприклад ProXima C16Phi +, Isogen Дуже короткий час опромінення та/або більші розведення антитіл завдяки оптимізованим світлоінтенсивним сигналам SERVALight EosUltra не підходить для діагностики та інших клінічних застосувань, а лише для досліджень та розробок. SERVALight виробляється компанією Cyanagen Srl. Cyanagen Srl є предметом наступних патентів США та ЄС US 7803573, EP 1962095, US 7855287, а також вже поданих та діючих патентів для інших країн. 1.2. Компоненти набору кат. - № SERVALight EosUltra Luminol Solution SERVALight EosUltra Peroxide Solution 42586.01 10 мл 10 мл 42586.02 50 мл 50 мл 42586.03 100 мл 100 мл 1.3. Умови зберігання Зберігати комплект при температурі 2 8 С. Якщо зберігати його при рекомендованій температурі, його можна використовувати принаймні до: див. Етикетку. 2
2.3. Схема інкубації блокування електрофорезу за допомогою гелю для виявлення венон-плями 1. Інкубація антитіл 2. SERVELight виявлення інкубації EosUltra 2.4. Протокол (1) Видаліть пляму з апарата для промокання, а потім блокуйте при кімнатній температурі (20-60 хв) або при температурі 2-8 С протягом ночі. (2) Видаліть блокуючий реагент і додайте перший робочий розчин антитіла у відповідному розведенні. Інкубація протягом 1 години при кімнатній температурі або протягом ночі при 2-8 С зі струшуванням. (3) Подальше промивання мембрани промивним буфером (5 хв). Повторіть крок прання 4-6 разів. Більші обсяги буфера або кількість етапів миття можуть допомогти зменшити фон. (4) Додайте відповідне розведення кон'югату HRP. 1 год інкубації помарки при кімнатній температурі зі струшуванням. (5) Повторіть крок (3). (6) Перед виявленням розчини для виявлення повинні мати кімнатну температуру. (7) Приготуйте робочий розчин субстрату, змішавши рівні пропорції розчину перекису з розчином люмінолу. На см 2 мембрани слід використовувати 0,1 мл робочого розчину. 5
(8) Робочий розчин стабільний протягом 24 годин при кімнатній температурі. (9) 5 хв інкубації помарки мембрани з робочим розчином підкладки. (10) Перенесіть захищену кляксу (наприклад, оберніть харчовою плівкою без бульбашок повітря) у касету для плівки білком догори та вставте плівку. Тут вам слід працювати у відповідній темній кімнаті. Під час витримки плівка повинна залишатися сухою. ВАЖЛИВО: Надлишки субстрату слід видалити з помарки. Плівку слід надягати обережно, оскільки через інтенсивність сигналу навіть невелике ковзання плівки/плями може призвести до розмитих або неправильних сигналів. (11) Перш за все, рекомендується час експозиції 60 с. Залежно від потужності сигналу, відповідно може бути обраний подальший час експозиції для оптимальної інтенсивності сигналу. (12) Потім відкривається відкрита плівка. (13) Як альтернатива розробці плівки, виявлення може також здійснюватися за допомогою відповідних систем документації, наприклад ProXima C16 Phi +, Isogen. (14) За потреби блот можна видалити після виявлення та завантажити антитілами. 6-й
4. Інформація про замовлення мембран Кат. Іммоболон (PVDF), 26,5 см x 3,75 м, розмір пор: 0,2 мкм (1 рулон) 42574 Флуоробін (PVDF), 10 x 10 см, розмір пор: 0,2 мкм (20 аркушів) 42573 Флюороін ), 25 см х 3 м, розмір пор: 0,2 мкм (1 рулон) 42571 Стандарт білка SERVA Western Blot Протеїн стандарт 39256 Реагенти Твін 20 37470 Реагенти для виявлення/Набори Хемілюмінесцентний реагент для пероксидази хрону 42582 SERVALight Polaris CL HRP WB Субстратний комплект 42584 SERVALight Комплект основи Eos CL HRP WB 42585 SERVAL Набір підкладки Helios CL HRP WB 42587 8