Створення абдомінальних спайок у мишей (переклад на німецьку)
Вступ
Черевні спайки - це форма рубцевої тканини, яка утворюється в животі у відповідь на запалення, як правило, після операції або внутрішньочеревної інфекції. Спайки є основною причиною хронічного болю в животі та безпліддя, а також основною причиною непрохідності тонкої кишки 1. Наявність спайок ускладнює проведення другої операції на черевній порожнині та збільшує ймовірність ускладнень 2.
Незважаючи на багаторічні дослідження, механізми, що лежать в основі утворення спайок, залишаються недостатньо вивченими. Відомо, що початкове пошкодження поверхні очеревини викликає ексудацію рідини, багатої фібрином, яка потім утворює згусток, який зв’язує поверхні кишечника та черевної стінки 3. Пізніше фібробласти та інші клітини мігрують на клейову поверхню та виділяють сполучну тканину 4. Протягом місяців-років розвивається адгезія судин і нервів 5.
Існує кілька комерційних препаратів, призначених для зменшення утворення спайок після операцій на черевній порожнині (наприклад, Seprafilm). Всі ці продукти діють як механічні бар'єри та зупиняють утворення адгезії, запобігаючи фізичному контакту між кишковими петлями та черевною стінкою 6,7. Незважаючи на дані контрольованого дослідження про те, що хірургічний адгезійний бар'єр зменшує утворення спайок 8, анекдотично багато хірургів були розчаровані ефективністю механічних бар'єрних препаратів.
В даний час не існує жодної терапії проти адгезії на основі лікарських засобів, що відображає той факт, що точні процеси, пов’язані з формуванням адгезії, недостатньо вивчені. Розробка терапії, яка конкретно націлена на клітинні або молекулярні агенти, що беруть участь у формуванні спайок, вимагатиме кращого розуміння подій, які беруть участь у формуванні спайки. Кілька груп визначили молекулярні механізми, які можуть бути важливими для утворення спайок 9-11. Моделі на тваринах забезпечують чудове середовище для утворення спайок для вивчення. Багато досліджень було опубліковано на кількох тваринах, зокрема на щурах та мишах 6,12-14, що описують хірургічне створення відповідальності. Через наш досвід фіброзу у мишей та широку доступність трансгенних мишей та антитіл на основі мишей під час дослідження, ми обрали мишу як модель для вивчення спайок. Тут ми повідомляємо про технологію, яку ми розробили для відтворюваності та надійності створення спайок на миші.
Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.
Протокол
Наступний протокол затверджений Інституційним комітетом з догляду та використання тварин Стенфордського університету (IACUC) та відповідає всім інституційним етичним рекомендаціям щодо використання лабораторних тварин.
1. Створення спайок
Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.
Репрезентативні результати
До семи днів після операції сліпа кишка і, можливо, висхідна кишка, печінка та петлі тонкої кишки повинні прилягати до правосторонньої черевної стінки. (Малюнок 8) Відібрані тканини можна вставляти та розрізати та давати чудові гістологічні зрізи. (11, 12)
Якщо процедуру виконано правильно, 100% мишей повинні мати значні спайки через сім днів. Смертність повинна бути менше 5%.
1 ">
тронг> Рисунок 9: Вирізання адгезійної тканини. (а) і (b) "Острів" шкіри і черевної стінки, зрощений з підстилаючим кишечником, звільняється шляхом розрізання повним колом навколо прилеглої області. Клацніть тут, щоб побачити збільшену версію цього малюнка.
jove_content "fo: keep-together.within-page =" 1 ">
Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.
Обговорення
Найважливішими етапами цієї процедури є: ретельне шліфування апендикса, не викликаючи перфорації, накладення швів на черевну стінку та прикладання потрібної сили. Наносити лише наждачний папір сліпої кишки або на невелику конкретну частину кишечника. Широке використання наждачного паперу на великих кількостях тонкої кишки, як правило, викликає значний ілеус. Будьте обережні, шліфуйте апендикс достатньою силою, щоб поверхня стала шорсткою, але не настільки, щоб стіна тріснула. Пошук такого балансу може зайняти час. Бережіть кишку обережно і уникайте гострих або зубних щипців, щоб маніпулювати кишечником. Легко випадково викликати кровотечу, захопивши брижу тонкої кишки щипцями або занадто сильно потягнувши за кишечник.
Якщо в стінці апендикса стався розрив, процедуру слід припинити і тварину евтаназувати. З нашого досвіду, сльоза сліпої кишки призводить до смерті тварин через кілька днів, навіть якщо сльоза добре відремонтована. Крім того, розрив стінки апендикса призведе до виливання стільця, що непередбачувано вплине на запальну реакцію.
В кінці процедури гемостаз повинен бути завершений. Деякі судини, що кровоточать, знову відкриються і почнуться після припинення кровотечі. Якщо ви сумніваєтесь, навколо точки кровотечі накладіть розсмоктується мононитковий малюнок швом вісімки. Цей тип ниток кращий шовковому або плетеному розсмоктувальному шву, оскільки його можна витягнути з мінімальним опором, хоча тканина. Однак ми виявили, що шовковий або плетений розсмоктувальний шов є найбільш ефективним для індукції спайок в боці черевної стінки, ніж мононитка, менш запальна.
Застосування крохмалю в кінці процедури допоможе збільшити утворення спайок, але ми виявили, що надмірна кількість крохмалю спричинить запальну реакцію, яка спричиняє смерть. Крохмаль слід злегка посипати. Його не повинно бути стільки, щоб він утворював суцільний шар.
Як перша процедура для вивчення, зазвичай втрачається кілька мишей. З нашого досвіду, найпоширенішими причинами смерті є зневоднення через непрохідність кишки, спричинене надмірною стиранням кишечника та сепсис через перфорацію кишечника. Смерть, спричинена кровотечею, може настати, якщо в кінці операції не досягнуто повного гемостазу.
Якщо утворення спайок недостатнє, розгляньте можливість агресивного стирання апендикса і правої бічної стінки, що залишить більшу міцність, або накладіть більше швів на черевну бічну стінку. З нашого досвіду, очікування менш ніж за тиждень, перш ніж живіт призводить до менш ніж достатнього утворення адгезії, щоб знову відкритися. З іншого боку, якщо рівень смертності мишей високий після операції, розгляньте можливість використання менш агресивного стирання апендикса, точніше для обстеження гемостазу, і застосування менше крохмалю, з іншого боку. Важливо також ретельно контролювати частоту дихання миші під час операції. Якщо хірург набуває досвіду з цією процедурою, рівень смертності повинен бути менше 10%.
Ця методика була розроблена для формування в основному спайок між відростком та правою бічною стінкою живота. Спайки також часто утворюються між тонкою кишкою, печінкою та розрізом по середній лінії. Застосування цієї методики зазвичай не спричиняє спайок на лівій стороні живота. Обмеження цієї методики полягає в тому, що спайки між кишечником і черевною стінкою частіше утворюються, ніж спайки між петлями кишечника. Крім того, малоймовірно, що в повністю замерзлому животі з’явиться тканина, повна клею, що часто спостерігається у людей, які перенесли кілька операцій.
Зміст "> Оскільки ця методика постійно призводить до утворення клейової тканини між відростком та бічною стінкою, ми вважаємо, що вона ідеально розроблена під час тестових втручань для зменшення утворення адгезії. Цей метод також може бути використаний для дослідження молекулярних шляхів та типів клітин беруть участь у формуванні адгезії. Адгезійна тканина легко вирізається і готова до гістології, забезпечуючи чудові гістологічні зображення (Рисунки 11, 12) може бути.
Деякі дослідники можуть захотіти модель, в якій спайки утворюють менше 100% часу. Якщо не застосовувати крохмалю, швидкість зчеплення зменшиться приблизно до 80%. Зменшення кількості шовкових ниток, розміщених у правій черевній стінці, ще більше зменшить швидкість адгезії.
З нашого досвіду, день сьомий після операції - це перший момент часу, коли кишечник постійно прикріплюється до черевної стінки. Однак інший час також може бути більш актуальним, залежно від спрямованості проекту. Наприклад, дослідники, зацікавлені у міграції нейтрофілів та макрофагів у приміщення для утримання, можуть побажати мати можливість збирати тканини протягом перших п’яти днів після операції. З іншого боку, відкладення колагену фібробластами відбувається протягом тижнів після початкової травми, і для цього має сенс досліджувати тканини, що поширюються часом, поширюваними протягом декількох тижнів після операції.
Хірургічні лупи дуже корисні для збільшення хірургічного поля під час виконання цієї процедури. Також може бути використаний хірургічний мікроскоп, але можливість хірурга оглядати хірургічне поле з різних сторін обмежена. Процедуру також можна проводити без збільшення взагалі.
Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.
Розкриття інформації
Автори заявляють, що не мають фінансових інтересів.
Подяка
МЧР підтримано Резидентським науковим стипендіатом Американського коледжу хірургів (ACS). MSH підтриманий грантом клінічного співробітника Каліфорнійського інституту регенеративної медицини (CIRM) TG2-01159. MSH, HPL та MTL були підтримані Американським товариством щелепно-лицевих хірургів (ASMS)/Фондом щелепно-лицевих хірургів (MSF) Research Grant Award. HPL був підтриманий грантом NIH R01 GM087609 та подарунком Інгрід Лай та Білла Шу на честь Ентоні Шу. HPL та MTL підтримані лабораторією дитячої регенеративної медицини Хейгі та Фондом Дуба. MTL підтримувався Фондом Ганна/Олів'є.