Тести in vitro на дію фуразолідону, гостацикліну, левоміцетину та
Документи
Від Федерального науково-дослідного інституту розведення дрібних тварин, Целле
Експерименти in vitro щодо впливу фуразолідону, клініки заручників, левоміцетину
та дигідрострептоміцин на Salmonella pullorum
У 1954 р. КОСГКОВЕ; КРЕМЛЕННЯ та персонал; HARWOOD та STUNZ, а також SMITH вказали на придатність фуразолідону для лікування інфекції Salmonella pullorurn у птиці. SMITH (1954b), WILSON (1956), TITKEMEYER and SCHMITTLE (1957), BELDINC і MAYER (1958) виявили в порівняльних дослідженнях, що фуразолідон перевершує сульфаніламіди та антибіотики, що раніше використовувались з точки зору лікувального ефекту. Але навіть за допомогою цього препарату неможливо повністю виключити приховані зародки мікробів серед клінічно здорових тварин, як показують численні дослідження: [SMITH (1954b та 1955); ГОРДОН і ТАКЕР (1955); HARBOR і ПРОДАВЕЦЬ (1955); LUCAS (1955); УІЛСОН (1955 & 1956); GYLSTORPF і DORN (1956); HARBOR (1956); SMYSER і VAN ROCKEL (1957); АЯКАРДІ (1958); BELDING і MAYER (1958); ГЕНДЕРСОН та ін. (1958) l.
Ці твердження засновані насамперед на експериментах на тваринах. Експерименти in vitro щодо дії фуразолідону на фізіологічний розчин. мікроби pullorum використовувались лише обмежено. Відповідні автори в першу чергу були зацікавлені у визначенні доз, необхідних для перспективної терапії [YUKCHENCO and YURCHENCO (1953); СМІТ (1954 а і б); РОГЕРС і колеги (1956) л. Крім того, представляють інтерес такі питання, уточнення яких може допомогти оцінити придатність препарату для терапії:
Я Чи можна очікувати стійких штамів бактерій на практиці? 2. Обов’язково враховувати терапевтичну дозу
Виявити різницю в чутливості між різними штамами?
3. Чи має препарат бактеріостатичну або бактерицидну дію?
Вплив фуразолідону, гостацикліну та ін. На Salmonella pullorum 95
4. Наскільки може бути спровокована резистентність до наркотиків у мікробів пуллоруму і чи є вона тоді оборотною або постійною?
5. При довготривалих низьких дозах препарату відбувається стимуляція росту мікробів?
6. Чи втрачають мікроби, які стали стійкими, також чутливість до інших препаратів (перехресна стійкість)? Більш масштабні експерименти in vitro повинні дати відповідь на це
Запитання знайдено. На додаток до фуразолідону в наші дослідження ми включили представника групи тетрациклінів (гостациклін), а також левоміцетин та стрептоміцин.
Всього для випробувань використовували 24 колекційні штами, які були виділені з матеріалів різного походження між 1955 і 1957 роками та ідентифіковані як Salmonella pullorurn. Штам слід розуміти як генетично однорідні мікроби, що вийшли з індивідуально збереженої колонії (для поодиноких штамів ми передбачали дві окремі колонії, які потім позначаються як a і b).
Усі експерименти, в яких слід було визначити ефективні концентрації препарату, проводились за допомогою розведення в пробірці, яке ми встановили в два рази. Наведені значення відносяться до 1 мл і базуються на наступних дозах, які ніколи не використовувались старше 24 годин: 1. Фуразолідон 0,01 г з 4 мл диметилформаміду ') як солюбілізатора
(Furoxon Boehringer, Мангейм) у 96 мл поживного розчину = 100 іл мл 2. Тетрациклін 0, олія г
(Hostacyclin Hoechst) у 100 мл поживного розчину = 100 іл мл 3. Левоміцетин O, OI г
(Boehringer, Mannheim) у 100 мл поживного розчину = 100 мкг/мл 4. Дигідрострептоміцину сульфат 0,1 г
(Bayer, Леверкузен) у 100 мл поживного розчину = 1000 у/мл Використаний поживний розчин складався з:
1,8 г вітаміну бакт. 1,0 г декстрози 0,5 г пептону 0,3 г NaCl O, 2 г сек. Фосфат натрію 0,1 мл бромотимоловий синій (1,6% спирт.)
як кольоровий індикатор у 100 мл дистильованої води. Доводили pH до 7,2 за допомогою NaOH.
Висівання мікробів у кожну пробірку проводили рівномірно по краплі з піпетки об’ємом 1 мл із 6-годинних бульйонних культур, які були посіяні речовиною. Ріст мікробів або пригнічення зародків відчитувались від зміни кольору через 24 години пілінгу. Розрідження, при якому не відбулася зміна кольору в трьох паралельних рядах розведення, вважалося значенням інгібування.
З усіх розведень проводили мазки на ґрунті ендо та агару, щоб перевірити чистоту культур один раз і на
I) Диметилформамід має інгібуючу дію на ріст бактерій аж до розведення 1: 100. У цій схемі випробувань ця концентрація опускається нижче 2-3 (0,5 O/o диметилформамід).
інші, щоб мати можливість вирішити, чи і до якої концентрації препарату був присутній бактерицидний чи лише бактеріостатичний ефект.
Три штами (№ 11, 12 та нещодавно виділений штам 99) були використані для спровокування резистентності. Бактерії культивували у концентрації препарату, яка просто дозволяла мікробам розмножуватися, та у більш високій концентрації. Якщо мікроби добре росли протягом 24-годинних пасажів, для подальшого розведення використовували відповідно нижчі розведення. Для цих експериментів фуразолідон дозволялося розчиняти лише в 0,4 мл диметилформаміду. Потрібно прийняти неповне рішення препарату (див. Розділ 1).
Контроль за ростом провокаційних ходів, встановлених з бактеріями, які стали стійкими, показав, чи не виникає звичка в сенсі стимуляції росту.
Після 30 провокаційних пасажів (8 пасажів дигідрострептоміцину) мікроби подавали в простому поживному розчині кожні 24 години протягом ще 30 пасажів, а їх чутливість до препарату час від часу перевіряли в тесті на розрідження труб.
Мікроби, які стали нечутливими до одного препарату, тестували на перехресну стійкість до інших препаратів.
У таблиці 1 наведено інгібуючі концентрації фуразолідону, гостацикліну, левоміцетину та дигідрострептоміцину, визначені in vitro для 24 випробуваних лососів. вказані штами пуллорна. У таблиці також вказані концентрації, при яких препарати мали бактерицидну дію.
Перш за все стійкі штами Salm. pullorum не вдалося знайти ні в якому разі. На відміну від цього, існували відмінності в чутливості між окремими штамами для гостацикліну, левоміцетину та стрептоміцину, 3 рівні розведення та 4 для фуразолідону, 4 рівні розведення. Виражена в одиницях маси на мл живильного середовища, чутливість до фуразолідону коливалась від 6,25 до 0,39 у; з гостацикліном та левоміцетином від 0,78 до 0,095 і з дигідрострептоміцином від 250 до 3 1,25 року.
Гостациклін мав найкращі інгібуючі показники - за ним слідкував хлорамфенікол. Фуразолідон потрібно було дозувати в середньому майже в десять разів, а дигідрострептоміцин - у 300 разів вище, щоб досягти такого самого інгібуючого ефекту in vitro. Але навіть доза гостацикліну в 100 мл (2 4 = найвища концентрація тесту) призвела лише до бактеріостазу; адже бактерії, здатні до розмноження, можна було легко виявити за допомогою витончення, при якому зміна кольору не вказувала на зростання мікробів. У випадку левоміцетину 5 становило 0 років і 2 5;
/ д для визначення бактерицидного ефекту. Фуразолідон та стрептоміцин мали бактерицидну дію (фуразолідон 12,5 7; дигідрострептоміцин 250 7), навіть коли концентрація була збільшена вдвічі або чотири рази, виміряно щодо доз, необхідних для інгібування мікробів. Широкий діапазон між інгібуючими концентраціями та концентраціями з бактерицидними властивостями у випадку левоміцетину та особливо гостацикліну вже був очевидним при оцінці серії розведень більш-менш плавними переходами у зміні кольору, тоді як кольорові показання для дигідрострептоміцину та Фуразолідон різко намальований.
Вплив фуразолідону, гостацикліну тощо 3uf Salmonella pullorum 97
T a b e l l e I H m m w e r t e u n d K o n z e n t r a t i o n m i t b a k t e r i z i d e r W i r k u n g v o n F u r a z o l i d o n, H o s t a c y c l i n, C h l o r a m p h e n i c o -
с т р е п т о м и ц і н г е г е н і я б е р 2 4 С а л м. п у л л о р у м - С т а р н м е н
Фуразолідон Гостациклін Хлор- Дигідро- амфенікол стрептоміцин л) штам Wacfis- віск - попереджувальний віск-
інгібувати. інгібувати. інгібувати. hemrng. поворот- бактерицид поворот- бактерицид тум- бактерицид тум- бактерізи,