Від медичної клініки та поліклініки II - Гросхадерн

Від медичної клініки та поліклініки II - Гросхадерн університету Людвіга-Максиміліана-Мюнхена Комм. Директор: проф. мед. A. L. Gerbes ефект сильного зниження ваги (дієта проти шлунка) на запалення та метаболізм глюкози у хворих на ожиріння із цукровим діабетом 2 типу Дисертація на здобуття ступеня доктора медицини на медичному факультеті Університету Людвіга Максиміліана в Мюнхені, представлена Катрін Відинскі з Мюнхена 2015

З дозволу медичного факультету Мюнхенського університету Доповідач: проф. мед. Клаус Г. Пархофер Співдоповідач: Priv. Доз. Лікар. Максиміліан Білогубі Проф. Крістін Мейзінгер Співробітник доктора філософії: д-р мед. Бенедикт Аулінгер Декан: проф. мед. вм'ятина. Рейнгард Хікель День усного іспиту: 19 листопада 2015 р

Свідчуючи, я замість присяги заявляю, що написав цю дисертацію на тему впливу сильної втрати ваги (дієта проти шлунка) на запалення та метаболізм глюкози у пацієнтів із ожирінням, що страждають ожирінням на цукровий діабет 2 типу, що я не використовував жодних інших допоміжних засобів, крім наданих, і що я зробив усі результати які були взяті з літератури повністю або приблизно, позначені як такі та ідентифіковані індивідуально відповідно до їх походження, назвавши джерело. Я також заявляю, що представлена тут дисертація не була подана в тій самій чи подібній формі до іншої установи з метою здобуття наукового ступеня. Місце, дата Підпис кандидата докторських наук

Зміст Вступ. 1 I Ожиріння, діабет та атеросклероз. 1 II запалення. 1 III Важливі пептиди у генезі діабету та атеросклерозу. 4 IV Терапевтичні варіанти. 8 1 Консервативні варіанти лікування. 8 2 Варіанти хірургічного лікування. 8 2.1 Обмежувальні процедури. 9 2.2 Обмежувальні процедури з мальабсорбційними компонентами. 9 2.3 Мальабсорбційні процедури з обмежувальним компонентом. 9 V Питання та цілі. 11 Б Матеріал та методи. 12 I матеріал. 12 II методи. 17 1 Клініко-експериментальна частина. 17 1.1 Дизайн дослідження та учасники. 17 1.2 Процедура та відвідування. 18 1.3 Хірургія шлунка на рукавах та дієта. 19 1.3.1 Група шлункових рукавів. 19 1.3.2 Дієтна група. 20 1.4 Гіперглікемічний та гіперінсулінемічний - еуглікемічний затискач. 20 1.4.1 Гіперглікемічний затискач. 21 1.4.2 Гіперинсулінемія - еуглікемічний затискач з біопсією жирової тканини. 22 2-а частина лабораторного експерименту. 23 2.1 Еліса та фотометричний метод вимірювання. 23 2.2 Полімеразна ланцюгова реакція. 23 2.2.1 Вилучення РНК, включаючи перетравлення ДНКази. 23 2.2.2 Зворотна транскрипція - ПЛР (RT - ПЛР). 24 2.2.3 Якісна ПЛР. 25 2.2.4 кількісна ПЛР у реальному часі (qrt-PCR). 26 І.

3 гістологія. 28 4 статистична оцінка результатів. Результати 28 С. 29 I Основні дані учасників дослідження. 29 II Енергопостачання та склад продуктів харчування. 30 III Розвиток ІМТ та зміна окружності талії. 32 IV зміна рівня цукру в крові натще, HbA1c та ліків. 33 V Оцінка затискачів як основи для визначення резистентності до інсуліну. 36 VI Зміна чутливості до інсуліну. 37 VII Зміна параметрів запалення. 40 VIII Гістологічний аналіз жирової тканини. 51 D Обговорення. 53 I Споживання енергії та втрата ваги. 53 II Поліпшення метаболізму глюкози. 54 III Зміна запалення. 56 IV Зміна NT-ProBNP. 59 V Альтернативні пояснення для поліпшення метаболізму глюкози. 60 VI Обмеження дослідження. 61 E резюме. 63 F Список скорочень. 68 G Список малюнків. 70 Н Список таблиць. 72 I Бібліографія. 73 J Подяка. 83 II

Низький рестриктивний компонент, який в основному застосовується у пацієнтів з ІМТ> 50 кг/м 2 (1, 75). Для всіх описаних лапароскопічних процедур періопераційна смертність становить менше 1%, і вибір втручання залежить від багатьох факторів (наприклад, ІМТ, віку, супутніх захворювань) (1). Спільним для всіх процедур є важливість ретельного післяопераційного догляду для забезпечення постійної втрати ваги та запобігання симптомів дефіциту (1, 75). Рис. 2a: Шлункова смужка, взята з (1) Рис. 2b: Рукавний шлунок, взята з (1) Рис. 3a: Шлунковий шунтування Roux-en-Y, взята з (1) Рис. 3b: Біліопанкреатична диверсія з дуоденальним перемикачем, знята з (1) 10

Завантажувальний буфер ДНК 6x 10мМ трис (ph 7,6), 0,03% (мас./Об.) Бромофеноловий синій, 0,03% (мас./Об.) Ксилолціанол, 60% (об. ph 7,4) 1,37 М NaCl, 26,8 мм KCl, 81 мм Na 2 HPO 4, PBS 1x (ph 7,4) розчинник реагенту (ph 7,4) TAE 1x TAE 50x гелі агарозний гель (1 %) 14,7 мм KH 2 PO 4 10% (v/v) PBS (10x) 10% (v/v) PBS (10%), 1% (w/v) BSA 2% (v/v) TAE (50x) 2 М Трис, 1 М крижана оцтова кислота, 0,05 М EDTA агароза LE в TAE 1x, набори броміду етидію Для використовуваних наборів розчини та буфери використовували відповідно до протоколу виробника. Без набору ДНКази без РНКази Qiagen, Hilden, Німеччина RNeasy Mini Kit Qiagen, Hilden, Німеччина SuperScript III System of First-Strand Synthesis System Invitrogen, Karlsruhe, Germany Enzyme При використанні ферментів використовувались розчини та буфери, рекомендовані та поставлені виробником. AmliTaq Gold DNA Polymerase Applied Biosystems, Карлсбад, США (5U/мкл) Дезоксирибонуклеаза I, Ампліфікація Invitrogen, Карлсруе, Німеччина Клас (1U/мкл) Taq ДНК-полімераза, рекомбінантний Invitrogen, Карлсруе, Німеччина (5 U/µl) PCR Eurofins MWG Operon, Ebersberg) Послідовність праймерів (5-3) GAPDH (hm) вперед agggctgcttttaactctggt GAPDH (hm) зворотний ccccacttgattttggaggga 13

Аналізи експресії генів TaqMan (Applied Biosystems, Карлсбад, США) Референтна послідовність цільового гена (людини) Номер замовлення TNF alpha NM_000594.2 Hs00174128_m1 MCP-1 NM_002982.3 Hs00234140_m1 IL-6 NM_000600.3 Hs00985639_m77 NM11100700700700700 FN1 фибронектина NM_002026.2 Hs00365052_m1 Адипонектин NM_001177800.1 Hs00605917_m1 RBP4 NM_006744.3 Hs00198830_m1 Vaspin (Serpina12) NM_173850.2 Hs005451801_m1 посилання NM73850.2 Hs005451801 посилання NM7451801, США номер посилання, системи NM7Bsequenzin, номер посилання був призначений на LightCycler-Bsequenzin, USA_genieds101, США, NM7Bsequenzin вимірюється в клінічній хімії в лікарні. Набори Elisa для зразків плазми людини використовувались завжди. Параметр Виробник Номер замовлення TNF-ультрачутливий НДДКВ квантикін KHC3014 Лептин НДДКВ квантикін DLE00 MCP-1/CCL2 НДД квантикін DCP00 Адипонектин НДДКВ Квантікін DRP300 Резистин НДДКВ Квантікін DRSN00 Фібронектин AB-AB50-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABN-ABB-ABN-ABN НДДКВ Квантікін HS600B 14

2.2.2 Зворотна транскрипція - ПЛР (RT - PCR) Оскільки РНК не може функціонувати як шаблон для ДНК-полімерази, її спочатку слід транскрибувати в кДНК (копіювати ДНК) (зворотна транскрипція). Це було зроблено за допомогою системи синтезу першого ланцюга SuperScript III для RT-PCR від виробника Invitrogen. Звернену транскрипцію поєднували з ПЛР для посилення кДНК. Підхід 1 був використаний для денатурації РНК і показаний у таблиці 2. Оскільки концентрація виділеної РНК із біопсійного жиру була дуже низькою, 8 мкл відповідало максимальній доступній кількості РНК. Після інкубації протягом 5 хвилин при 65 ° С та охолодження протягом 1 хвилини на льоду додавали другу партію, компоненти якої наведені в таблиці 3. Потім було запущено програму RHRT PCR, як зазначено в таблиці 4. Таблиця 2: Реакційна суміш (проста) для денатурації РНК зразком ДНКази, розщепленої ДНКазою 8 мкл Випадковий праймер Гексамера 1 мкл dntp s (10 мм) 1 мкл 10 мкл Таблиця 3: Реакційна суміш (проста) для суміші для синтезу кДНК 10 х RT буфер 2 мкл MgCl 2 (25 мМ) 4 мкл DTT (0,1 М) 2 мкл RNaseOUT 1 мкл SuperScript III RT 0,5 мкл води, обробленої DEPC, 0,5 мкл 10 мкл 24

Таблиця 4: Програма ПЛР зворотної транскрипції в термоциклері ПЛР Температура Тривалість Крок 25 C 10 хв. Відпал 50 C 50 хв. Синтез Cdna 85 C 5 хв. Припинення 4 C кінець 2.2.3 Якісна ПЛР Для підтвердження успішної транскрипції розщепленої ДНКази Проведена якісна ПЛР для РНК в кдн. В якості еталону вказували людський GAPDH (гліцеральдегід-3-фосфатдегідрогеназа). Використовували ДНК-полімеразу Taq (рекомбінантну, 5U/мкл) від Invitrogen та реагенти, що містяться в наборі (табл. 5). Програма ПЛР проводилася в термоциклері PXE 0.2 (Thermo Electron Corporation) і може бути представлена в таблиці 6. Таблиця 5: Реакційна суміш (проста) для стандартної ПЛР (контрольна GAPDH) 10x буфер ПЛР 2 мкл dntp суміші (10 мМ) 0,4 мкл MgCl 2 (50 мМ) 0,6 мкл праймера для 1 мкл праймера rev 1 мкл шаблону кдн 1 мкл Taq ДНК-полімерази (5U/мкл) 0,2 мкл ddh 2 O 14 мкл 20 мкл 25