Випробування мікробіому кишечника - R

Цей тест був розроблений Даніелою спільно з лікарем і вченим Тетяною Міятович з лабораторій R.E.D. з Бельгії. Метою є повний та складний аналіз стану кишечника та мікроорганізмів, які його заселяють.

мікробіому
Тетяна Міятович має звання доктора філософії в галузі молекулярної біології. Він написав 50 публікацій у рецензованих журналах (21 як головний автор та 29 як співавтор) та має 2 патенти як перший автор. З 2011 року Тетяна Міятовіч є керівником проекту, керівником лабораторії та ОГС (головний науковий керівник) лабораторій R.E.D. R.E.D. лабораторії є біотехнологічною компанією з Бельгії, яка розробляє та проводить спеціалізовані тести для оцінки багатофакторних захворювань, таких як синдром хронічної втоми, хронічні імунні дисфункції, хронічні інфекції, дисфункції кишечника, аутизм тощо. Доктор Міятович працює в численних групах та міжнародних наукових мережах, що займаються біологічними маркерами аутизму. Раніше д-р Міятовіч був присутнім в якості менеджера проектів у галузі досліджень і розробок та керівника біології в біотехнологічній компанії, що спеціалізується на відкритті нових протиракових засобів, консультант-менеджер публікацій для фармацевтичних компаній та (iii) науковець з Вільного університету Брюсселя (ULB) у Бельгії.

Вся справа в кишечнику

  • MSA (дисбіоз)
  • Зонулін (проникний кишечник)
  • sIgA (кишковий імунітет/запалення кишечника)
  • EDN/EPX (хронічне запалення кишечника)
  • Запальні маркери кишечника (FOB, кальпротектин, трансферин, лактоферрин)
  • Інфекції (тести в 3-й колонці таблиці)
  • Ціна не включає витрати на доставку
  • Тести проводяться в Бельгії
  • Рекомендується як перший тест

Моніторинг кишечника

  • MSA (дисбіоз)
  • sIgA (кишковий імунітет/запалення кишечника)
  • Запальні маркери кишечника (FOB, кальпротектин, трансферин, лактоферрин)
  • Додайте, якщо вони були підняті під час першого аналізу:
  • Зонулін (проникний кишечник): +100 €
  • Інфекції: позитивні лише при першому аналізі (ціни див. Нижче)

інфекції

  • Cryptosporidium/Giardia Ag: 42 €
  • HPYL (Helicobacter Pylori Ag): 35 євро
  • САЛЬМО (сальмонела Spp. Ag): 35 євро
  • СПИСОК (Listeria monocitog. Ag): 35 євро
  • АДЕНОВ (аденовірус Ag): 35 євро
  • SHIG (Shigella spp. Ag): 35 євро
  • ENTEROV (Enterovirus Ag): 40 євро
  • HepA (вірус гепатиту А Ag): 40 євро
  • EntaHIST (Entamoeba histol Ag): 35 євро
  • CampBact (Campylobacter Ag): 35 євро
  • YERSI (Yersinia enteroc. Ag): 42 євро
  • ClostCOMBO (Clostridium difficile Ag GDH, токсин A + B): 60 євро

Опис аналізів

НОРМАЛЬНА ФУНКЦІЯ ШЛУНКОВО-кишкового тракту

Шлунково-кишковий тракт є одним з найбільших інтерфейсів між внутрішнім середовищем людини та зовнішнім світом. Його функція полягає в перетравленні та засвоєнні основних поживних речовин, що забезпечуються їжею. У той же час він забезпечує бар’єр, який заважає небезпечним для здоров’я молекулам проходити через слизову оболонку кишечника та потрапляти в системний кровообіг.

В даний час дисфункція кишечника вважається чинником, що сприяє багатьом хронічним захворюванням, таким як алергія, аутоімунні розлади, запальні розлади та дегенеративні захворювання.

Мікрофлора кишечника - це екосистема з високим ступенем складності. Мікрофлора не тільки відіграє важливу роль у перетравленні та засвоєнні поживних речовин, у синтезі вітамінів та жирних кислот, у детоксикації вживаних хімічних речовин, але також і в регуляції імунної системи. Отже, зміни в складі мікрофлори можуть мати серйозні наслідки для здоров’я господаря. Поширеним розладом функції кишечника є дисбіоз. Це поширення патогенних бактерій в кишечнику. Підраховано, що в кишковому тракті дорослої людини знаходиться до 50 різних родів бактерій, що представляють понад 500 різних видів.

КИШКОВА ПРОСТОЙЛИВІСТЬ: ПРОСТОЙНИЙ СИНДРОМ КІШКІВ

Здорова слизова кишечника, як правило, поглинає дрібні молекули, які є результатом повного травлення. Клітини кишечника містять спеціалізовані транспортні білки, які несуть поживні речовини через стінки кишечника та потрапляють у кров. Більші молекули не будуть транспортуватися цими системами і зазвичай зберігаються всередині кишечника, оскільки клітини слизової оболонки кишечника згруповані між собою. Синдром проникної кишки (LGS) - це стан, при якому здатність кишкової стінки утримувати великі та небажані молекули в нестачі знижується. Коли проміжки між клітинами кишкової стінки розширяться, макромолекули, антигени та токсини потраплять у кров.

Велика кількість факторів може призвести до проникності кишечника:

  • Компоненти їжі: бродіння певних компонентів їжі (білків, рафінованих вуглеводів) призводить до потенційно шкідливих готових продуктів: аміаку, амінів, фенолів, сульфідів ... ці сполуки зменшують життя клітин слизової. Харчові добавки, алкоголь, кофеїн подразнюють кишкову стінку.
  • Дисбактеріоз кишечника: вироблення токсичних сполук ферментацією також залежить від виду бактерій, що знаходяться в кишечнику. У разі дисбіозу негабаритні патогенні бактерії виробляють токсини та сполуки, які дуже шкідливі для клітин кишечника. Наприклад, відновлюючі сульфатні бактерії виробляють токсичний сірководень.
  • Харчова алергія та непереносимість: непереносимість певних продуктів (лактоза ...) може призвести до шкідливого запалення кишечника.
  • Хронічний стрес: крім сприяння дисбактеріозу, стрес зменшує приплив крові до кишечника, внаслідок чого він не може відновлюватися. Стрес також призводить до скорочення клітин кишечника, що призводить до збільшення простору між клітинами.

Наслідки проникності кишечника

Модифікована проникність кишкової стінки може мати дуже шкідливий вплив, включаючи:

СИНДРОМ ДРАБУЮЧОГО КОЛОНУ (SCI)

Серед патологій, що розвиваються внаслідок дисбактеріозу кишечника та проникної кишки, найпоширенішим є, мабуть, синдром подразненого кишечника (СРК). ІМП характеризується болем у животі або дискомфортом, поряд з ознаками дисфункції кишечника, найчастіше діареєю та/або запорами. Сучасні цифри свідчать про те, що 10-20% населення може страждати цією хворобою. ВЗМ вважається результатом неправильної та хронічної активації імунної системи слизової. Причини цієї активації незрозумілі, захворювання, ймовірно, багатофакторне. Фактори, які можуть зіграти певну роль у SCI, включають:

Регуляція імунної функції в кишечнику:

  • 80% наших імунних клітин знаходиться в кишечнику
  • Лімфоїдна тканина, пов’язана зі шлунково-кишковим трактом (GALT), поширюється вздовж слизової оболонки кишечника (бляшки Пеєра в тонкому кишечнику, лімфоїдні фолікули в товстій кишці) і містять 80% імунних клітин організму.
  • Ці імунні клітини постійно взаємодіють з мікроорганізмами, пов’язаними зі слизовою (бактерії, віруси…)
  • Дотримується делікатний баланс між толерантністю до кишкових антигенів (зменшення запалення…) та захистом від патогенних мікроорганізмів (вироблення дефензинів…).

Кишковий імунний дисбаланс впливає на весь організм:

  • Цілісність кишкового бар’єру має важливе значення: підвищена проникність слизової викликає системну ендотоксемію (хронічне низьке запалення) та аномальні імунні реакції на кишкові антигени.
  • Взаємодія флори господаря/кишки: мікробна флора кишечника відіграє важливу роль у підтримці здоров’я господаря, але на це може вплинути аномальна робота імунітету господаря.

В даний час зміни в флорі кишечника вважаються чинниками багатьох хронічних захворювань, таких як алергія, аутоімунні та запальні розлади або дегенеративні захворювання.

Ряд факторів, таких як вживання антибіотиків, стрес, певні компоненти дієти, можуть згубно впливати на мікрофлору кишечника. Надлишок патогенних бактерій призводить до утворення токсичних бактеріальних сполук (таких як ендотоксини), які всмоктуються в кров і викликають аномальну імунну активацію.

Запалення кишечника, яке може виникнути внаслідок непереносимості їжі або алергії, призводить до збільшення проникності стінок кишечника («проникний кишечник»), полегшуючи проходження бактеріальних сполук у кров.

Аутизм та запалення шлунково-кишкового тракту:

  • Декілька звітів вказують на високу поширеність шлунково-кишкових симптомів, запалення та дисфункції у дітей з аутизмом (огляд Horvath and Perman, Curr Gastroenterol Rep 2002).
  • Легкий та середній ступінь запалення спостерігався як у верхніх, так і в нижніх відділах кишкового тракту. У дітей з розладами аутичного спектру наявність дисфункції шлунково-кишкового тракту часто асоціюється із підвищеною дратівливістю, нападами гніву, агресивною поведінкою та розладами сну (огляд Critchfield et al., Gastroenterol Res Pract. 2011).

Ключовою функцією sIgA є зв’язування з інвазивними мікроорганізмами та токсинами та захоплення їх у слизовому шарі або епітеліальних клітинах, таким чином інгібуючи рухливість мікробів, аглютинуючи організми та нейтралізуючи їх екзотоксини, а потім допомагаючи їх нешкідливо виводити з організму з калом. SIgA також «позначає» їжу прийнятною, тому низький рівень sIgA призводить до підвищеної чутливості їжі.

Концентрація sIgA дає нам інформацію про імунний захист кишечника:

Відсутність sIgA свідчить про зниження активності кишкової імунної системи

Підвищений рівень sIgA свідчить про запалення кишечника.

Гемоглобін: евакуюється з калом при шлунково-кишкових геморагічних захворюваннях

трансферин: компонент, отриманий з крові; хороший маркер для шлунково-кишкових кровотеч

кальпротектин: нейтрофільний цитозольний білок з антимікробними властивостями, який присутній у високій концентрації в калі під час запалення кишечника

лактоферин: глікопротеїновий компонент нейтрофільних вторинних гранул, що виділяються з лейкоцитів калу; може служити маркером запалення в кишечнику.

Цей імунохроматографічний тест проводиться на фекаліях та забезпечує якісну відповідь (позитивну/негативну).

Зона є "шлюзом" для проникної кишки. Зонін відкриває простори між клітинами кишкової оболонки. Зазвичай це відбувається, коли поживні речовини та інші молекули потрапляють і виходять з кишечника. Однак, коли присутня проникна кишка, простір між клітинами відкривається занадто сильно, що дозволяє більшим молекулам білка потрапляти в кров, де може відбутися імунна реакція. Це також може призвести до проникнення вмісту кишечника, наприклад бактерій, в імунну систему, викликаючи запалення. Зі збільшенням рівня зонуліну ущільнення між клітинами кишечника зменшується, відкриваючи проміжки між клітинами, що дозволяють проникати всередину всередину. Це називається «проникною кишкою». Зонулін - єдиний фізіологічний модулятор щільних міжклітинних зв’язків, описаний до цього часу, який бере участь у торгівлі макромолекулами і, отже, в балансі толерантності/імунної відповіді.

Аналіз ІФА EPX/EDN у зразках фекалій (EPX/EDN)

Накопичення в кишечнику нейротоксину, отриманого еозинофілами (EDN), пов’язане із запаленням та пошкодженням тканин. Вимірювання EDN в калі може служити об’єктивним параметром для хронічного клінічного або субклінічного запалення, що спостерігається в області шлунково-кишкового тракту.

Фекальний ЕДН вважається найкращим із цитотоксичних гранульованих білків для оцінки запалення кишечника, оскільки він найкраще відображає клінічні, ендоскопічні та гістологічні показники активності захворювання та ураження слизової.

Підвищений рівень EDN в калі пов’язаний з декількома запальними станами, такими як харчова алергія/чутливість, патогенні інфекції (C. difficile та H. pylori), СРК, еозинофільні шлунково-кишкові розлади.

Оцінка інфекцій у зразках фекалій

Імунохроматографічні тести засновані на імунологічному поглинанні забарвленого колоїду під час його проходження через мембрану. На цій мембрані було іммобілізовано антитіло або антиген. Виявлення можливої ​​інфекції відбувається швидко і просто, оскільки воно не передбачає культивування стільця. Доступні наступні аналізи:

  • C/PARAS Cryptosporidium/Giardia Ag
  • HPYL Helicobacter Pylori Ag
  • SHIG Shigella spp
  • АДЕНОВ Аденовірус Ag
  • PSALM Salmonella Spp. Ag
  • СПИСОК Listeria monocytogenes Ag
  • ЕНТЕРОВ Ентеровірус Ag
  • HepA Вірус гепатиту А Ag
  • EntaHIST Entamoeba histolytica
  • CampBact Campylobacter Ag
  • YERSI Yersinia enterocolitica
  • CLOSTRICombo Clostridium difficile 3 токсини
  • ТУЛЬНА туляремія (Francisella tularensis)

Мікрофлору кишечника (мікробіом кишечника) можна вважати постнатальним набутим органом. Складається з найрізноманітніших бактеріальних клітин, він виконує різні функції для господаря. Мікрофлора відіграє значну роль у дозріванні кишечника, цілісності кишечника, запобіганні патогенної та умовно-патогенної колонізації бактерій, ... Вона також модулює імунну систему. Мікрофлора також бере участь у синтезі вітамінів, виробленні коротколанцюгових жирних кислот та метаболізмі канцерогенів.

Мікробіом сприяє переробці та метаболізму їжі:

- перетравлення та засвоєння поживних речовин

- коротколанцюговий синтез жирних кислот (наприклад, синтез бутирату Faecalibacterium, розубурія ... важливий для здоров'я товстої кишки ... але дає багато енергії -> ожиріння)

- синтез амінокислот і вітамінів (вітамін В12, вітамін В9, вітамін К)

- детоксикація забруднюючих речовин та токсичних молекул, що присутні в їжі

Хоча кишкова флора з часом є досить стабільною, ряд факторів може порушити нормальний баланс і, таким чином, призвести до дисбактеріозу кишечника. Мікрофлора кишечника може змінюватися імунними механізмами господаря, окислювально-відновним станом, функцією надниркових залоз, рН кишечника, дієтою господаря, віком господаря, ліками, екзогенними організмами та емоційним стресом.
Дисбактеріоз кишечника може спостерігатися при ряді хронічних захворювань, таких як хвороба Крона, ІХС, CFS, і може бути пов’язаний з атопічними та порушеннями розвитку, такими як аутизм та СДУГ.

Донедавна дослідження складу мікробіоти базувалися майже виключно на культурі, незважаючи на те, що:

  • Не можна культивувати від 40 до 80% кишкових бактерій
  • Визначення колоній може бути важким
  • Бактерії повинні бути живими: вивчення анаеробних збудників є дуже складним, великі втрати під час збору та обробки зразків
  • Культурний підхід дозволяє проаналізувати лише незначну частину всіх видів бактерій (10%?)
  • coli, який вважався домінуючим видом, є другорядним членом ...

Кишкова флора та шлунково-кишковий статус у дітей з аутизмом корелюють з тяжкістю аутизму:

  • Адамс та ін. (BMC Gastroenterology 2011) повідомляло, що шлунково-кишкові симптоми сильно корелювали з тяжкістю аутизму. З чотирьох досліджених типів корисних бактерій діти з аутизмом мали значно нижчий рівень Bifidobacterium (-45%), трохи нижчий рівень Enterococcus (-16%) та набагато вищий рівень Lactobacillus (+ 100%).
  • Finegold та ін. (Anaerobe 2010) повідомляє, що у фекальних речовинах у контрольних дітей Firmicutes був присутній у 63,6% загальної флори, але лише в 38-39% фекальної флори у дітей з аутизмом. Бактероїди становили 30% контрольної флори калу та 51% флори калу у дітей з аутизмом. Актинобактерії становили 1,8% фекальної флори у контрольних дітей та від 0,4 до 0,7% флори дітей з аутизмом. Протеобактерії становили 0,5% флори дітей, що контролювали дітей, і від 2,3 до 3,1% флори дітей з аутизмом. На закінчення слід сказати, що калова флора дітей з аутизмом статистично суттєво відрізнялася від флори здорових дітей.

Дисбіоз при синдромі хронічної втоми (CFS):

  • Поширеним розладом функції кишечника є дисбіоз, який є розмноженням патогенних бактерій в кишечнику.
  • Кілька опублікованих досліджень свідчать про те, що CFS асоціюється з дисбіозом
    • Культурний аналіз виявив підвищений рівень Streptococcus та Enterococcus spp. У зразках фекалій у пацієнтів з ME/CFS [Sheedy et al., In Vivo 2009]
    • Пробіотичні добавки (L. casei в одному дослідженні, L. paracasei + L. acidophilus + B. lactis в іншому дослідженні) призвели до поліпшення емоційних симптомів та нейрокогнітивних функцій [Rao et al., Gut Pathog 2009; Салліван та ін., Nutr J 2009].

У лабораторіях R.E.D. ми розробили нову процедуру аналізу бактеріальних культур у зразку стільця (опубліковано Fremont et al., Anaerobe 2013). Ця сучасна процедура заснована на 16-секундній ампліфікації ПЛР з подальшим високошвидкісним секвенуванням. Він надає вичерпний огляд усіх видів бактерій, включаючи ті, які неможливо проаналізувати за допомогою традиційних методів вирощування культури.

Наш метагеномний аналіз калу дає повну картину бактеріальних популяцій, наявних у зразку стільця, включаючи аероби, анаероби та види бактерій, які неможливо проаналізувати традиційними культуральними методами.

Інтерес та можливі додатки:

  • Проста процедура збору, зразки можуть бути стабілізовані: легкий доступ до пацієнтів
  • Велика кількість застосувань: аутизм, хронічні інфекції, CFS, різні кишкові захворювання, ожиріння, алергія, рак ...
  • Можуть слідувати терапевтичні втручання: попередні або пробіотики, антибіотики, рослинні екстракти, зміни дієти ...