Запобігання лептиновій резистентності шляхом блокування рецепторів ангіотензину II (AT 1) у кадрі

1 Від Інституту експериментальної та клінічної фармакології та токсикології Університету Любека Директор: проф. мед. Маркус Шванінгер Профілактика стійкості до лептину шляхом блокування рецепторів ангіотензину II (AT 1) у контексті ожиріння, викликаного дієтою у щурів. 2012 рік

резистентності

2-й репортер: проф. Д-р вип. нац. Вальтер Рааш 2-й репортер: проф. мед. Д. Людвіг 3. Доповідач: проф. Д-р. мед. П. Гольке День усного іспиту: Затверджено до друку: Любек, докторський комітет відділу медицини

3 - Для моїх дорогих батьків-

4 Зміст Зміст Зміст Вступ Інсулінорезистентність Ожиріння Ренін-ангіотензин-альдостеронова система (РААС) Матеріал та методи Протоколи випробувань Випробування тварин Вивчення чутливості до лептину за допомогою Телмісартану Дослідження толерантності до глюкози при тривалому годуванні з дієтою в їдальні Приготування розчинів Розчин інсуліну Розчин лептину або розчин телмісартану Речовини Внутрішньочеревне застосування Пероральне застосування Підшкірне застосування Екстракція матеріалу Антикоагулянти та стабілізатори Забір крові з хвоста Вбивство та видалення органів Функціональні тести Плетизмографічне вимірювання артеріального тиску Вимірювання активності Тест на стійкість до глюкози (OGTT)

5 Зміст Тест на толерантність до інсуліну (ITT) Біохімічні аналізи Радіоімунологічний аналіз (RIA) Підготовка гіпоталамів Екстракція синтезу кдна для квантування mrna mrna Кількісні ПЦР в режимі реального часу Розрахунки Вестерн-блот та статистичні методи Результати Встановлення тесту на лептинову стійкість Кінетика лептину після одноразового тесту на стійкість до лептину ) Вплив телмісартану на чутливість до лептину Вплив лікування телмісартаном на масу тіла та споживання енергії Вплив лікування телмісартаном на плазмалептин Вплив лікування телмісартаном на споживання енергії Вплив лікування телмісартаном на гемодинаміку Гіпоталамічні харчові пептиди під тестом на стійкість до лептисартану до лептину під телмісартаном Дослідження толерантності до глюкози при тривалому годуванні дієтою кафетерію Вплив дієти кафетерію на масу тіла Вживання їжі та води під дієтою кафетерію Вплив дієти кафетерію на масу тіла Фізична активність Вплив дієти їдальні на гемодинаміку Вплив дієти їдальні на основні метаболічні параметри Пероральний тест толерантності до глюкози (OGTT) Тест толерантності до інсуліну (ITT) Вплив дієти кафетерію на виживання

6 Зміст 4 Обговорення Вплив блокади AT 1 телмісартаном на чутливість до лептину Споживання та споживання енергії за КД Вплив КД на розвиток резистентності до інсуліну Вплив КД на смертність від SHR Перспектива Зміст Бібліографія Додаток Список рисунків Список таблиць Речовини та придбані розчини Рецепти розчинів Тестові набори Набори RIA Набори для визначення експресії генів Витратні матеріали Пристрої Список абревіатур Подяки Автобіография Публікації Плакат Публікації Призи та нагороди

22 Матеріал і методи heim, 8 мг/кг/день) або вода (H 2 O), оброблені як контролі. Всі щури могли вибирати між дієтою в їдальні та звичайною дієтою. Після десятиденної фази ознайомлення щурів рандомізували на чотири групи (n = 10): TEL/Lep SD (n = 10) TEL, оброблене SD (n = 26) TEL/NaCl, оброблене SD (n = 10) TEL SD, оброблений SD (n = 6): SD, оброблений H 2 O (n = 20) SD, оброблений Lep (n = 10) SD, оброблений H 2 O/NaCl (n = 10) Рис. 3: Схема лікування для визначення чутливості до лептину при застосуванні телмісартану (TEL) або контролю (H 2 O) з одночасним годуванням дієтою в їдальні. Під час остаточного тесту на стійкість до лептину щури Спраг-Доулі (SD) отримували або лептин (Lep), або фізіологічний розчин (NaCl), що вводили підшкірно. Завдяки комплексному тесту на стійкість до лептину в кінці дослідження, тварин доставляли переміщеними на один тиждень, так що лише 20 тварин були рандомізовані в чотири групи (n = 5), а протокол тестування можна було провести аналогічно, перемістивши на один тиждень (рис.4)

25 Матеріал та методи 2.2 Приготування розчинів Розчин інсуліну Людський інсулін (Insuman Rapid) у дозі 40 МО/мл розводили 1:80 0,9% NaCl, так що 0,5 МО/мл становить 0,5 МО/кг маси тіла внутрішньочеревно. Розчин лептину (R&D Systems, рекомбінантний лептин щурів, чистота> 97%) розчиняли в 20 мМ TRIS (трис (гідроксиметил) амінометан) буфері, рН 8 і розводили до концентрації 100 або 200 мкг/мл. Для цього спочатку використовувався буфер Tris. Відповідна кількість трису зважували у дистильованій воді розчиняють, буферизують до бажаного значення рН 5 N NaOH і розбавляють до необхідного об'єму дистильованою водою. заповнений. Готовий розчин стерильно фільтрували Розчин телмісартану Розчин телмісартану (Boehringer, Ingelheim) готували у концентрації 8 мг/мл. Інформація стосується 10 мл основного розчину. Порошок телмісартану зважували у відповідній кількості і повністю розчиняли у 2 мл 0,1 N розчину NaOH. 6 мл дистильованої води. додавали піпеткою і титрували 0,1 N HCl в діапазоні рН між 8,8 і 9,2. Нарешті, з аква дест. до 10 мл

26 Матеріал та методи 2.3 Застосування лікарських засобів або речовин Внутрішньочеревне застосування Інсулін вводили внутрішньочеревно (канюля 0,4 х 13 мм, BD Microlance) у дозі 0,5 МО/кг. Пероральне застосування Пероральне застосування рідин через глотку, яку вводили в стравохід після звикання тварин. 50% глюкози та телмісартану у дозі 8 мг/кг вводили перорально Підшкірне застосування Лептин вводили у дозі 100 та 200 мкг/кг у підшкірну жирову клітковину, медіально до лопатки, у шкірну складку, встановлену для цієї мети (канюля 0,4 х 13 мм)., BD Microlance). 2.4 Екстракція матеріалу Антикоагулянти та стабілізатори Параметри лептину, інсуліну, С-пептиду, глюкагону, адіпонектину та кортикостерону визначали з плазми в мікроветтах, покритих K-EDTA (Сарстедт). Розчин Na-EDTA з кінцевою концентрацією 12,1 мм додавали до забою крові для дослідження лептину в плазмі