Діагностика та щеплення мікориз - жардин де Франс

Марі-Лайн Хаймет

Мікориза: Переваги діагнозу

Відомі в основному своєю користю для рослин (поліпшення мінерального та водного живлення, стимулювання природного захисту тощо), мікоризні гриби також відіграють важливу роль у якості ґрунту, сприяючи збільшенню їх структури та стабільності. Встановлення функціонального мікоризного симбіозу також супроводжується збільшенням ризосферної мікрофлори, стимульованої якістю та кількістю синтезованих ексудатів коренів. Ці спостереження роблять мікоризні гриби хорошим показником якості та біологічного здоров’я ґрунтів. Діагностика популяції мікоризних грибів, проведена спеціалізованою лабораторією, є важливим інструментом для кращого управління та орієнтування культурних практик, сприятливих для підземного життя мікробів.

Основні методи контролю

Які аналітичні методи використовувати для виявлення, кількісної оцінки та ідентифікації мікоризної флори ?

Оцінка рівня колонізації коренів

Аналіз стосується спостереження за репрезентативною зразком коріння, яке залежно від типу досліджуваних мікориз (екто або ендомікориза) буде попередньо промито (Garbaye, 1990), проріджене, забарвлене (Phillips and Haymann, 1970), після чого спостерігається під бінокулярною лупою або мікроскопом. Коріння ектомікоризу розгалужені, оточені грибною мантією і позбавлені кореневих волосків, тоді як для ендомікоризних грибів ВА коріння мікоризу мають типові внутрішні структури (арбускули, везикули, грибковий міцелій).

Частота мікоризації є найбільш часто використовуваною кінцевою точкою. Це дозволяє швидко оцінити відсоток мікоризних коренів, присутніх у зразку, але не враховує інтенсивність мікоризування коренів. Швидкість мікоризації оцінити відсоток довжин ендомікоризних коренів. Колонізацію корінців грибом можна оцінити методом перетину ліній, розробленим Джованетті та Моссе. За допомогою лічильної сітки буде визначено близько 100 точок спостереження та відмічено наявність або відсутність грибкових структур у коренях. Цей діагноз стосується зразків коренів з польових культур або без ґрунтових культур на субстраті, щепленому мікоризними грибами. Цей аналіз демонструє наявність інфекційних пропагул мікоризних грибів у живильному середовищі. Це також дозволяє оцінити, чи умови вирощування (склад опори, практики вирощування тощо) сприятливі для правильного розвитку симбіозу.

Перерахування спор

Для ендомікоризних грибів підрахунок спор можна проводити на зразках ґрунтів, посівних культуральних середовищах, мікробних посівах або будь-яких інших продуктах, збагачених спорами (добрива, доповнення).

Проводиться вологе віджимання з подальшим просіюванням. Відмови в ситі від 40 до 250 мкм спостерігаються під бінокулярною лупою і підраховують спори. Ідентифікація родів грибів на основі морфологічних критеріїв може завершити перелік. Також можна перевірити життєздатність ізольованих спор, а також їх здатність проростати.

Тест MPN (найбільш вірогідне число)

Цей тест зазвичай використовується для кількісної оцінки мікробних популяцій (бактерії, сапрофітні гриби). Він пристосований до ендомікоризних грибів (Gianinazzi-Pearson et al, 1985) і дає можливість кількісно визначити кількість інфекційних пропагул у зразку. Він базується на послідовних розведеннях зразка, що підраховується, а потім на вирощуванні в контрольованих умовах рослин-господарів, щеплених при кожному розведенні. В кінці культури моніторинг мікоризації рослин дає змогу оцінити кількість життєздатних та інфекційних мікоризних пропагул, присутніх у вихідній пробі. Цей тест можна проводити на зразку ґрунту, щепленому поживному середовищі або мікоризному посіві. Тест MPN та швидкість або частота мікоризації є додатковим аналізом, який допомагає фермеру визначати культурні практики, що сприяють збільшенню мікоризного потенціалу його ділянки та розвитку усталеного симбіозу мікоризу.

Молекулярна ідентифікація

Гриби-показники якості ґрунту

Технології виробництва мікоризних інокулянтів

Багато комерційних інокулятів, вироблених в Європейському Союзі або за його межами, доступні на ринку Франції та Європи. Більшість із них схвалено у Франції або в процесі затвердження, більшість із них є ендомікоризними інокулянтами. Спосіб виробництва відрізняється залежно від сімейства грибів (ектомікоризних або ендомікоризних). Виробництво інокулятів з ектомікоризних грибів, як правило, проводиться в аксенних умовах, без рослини-хазяїна, в рідкій культурі або на твердій підлозі. Інокулюм складається з грибкового міцелію, приготовленого або у вигляді рідкої суспензії, або у вигляді гранульованого або порошкоподібного твердого посіву. Ендомікоризні гриби - це суворі обов’язкові симбіонти, тобто залежать від присутності рослини-господаря для розвитку та розмноження. Потім виробник інокуляту повинен спільно культивувати комплекс "гриб-рослина-господар". На сьогоднішній день найчастіше використовуються дві технології виробництва:

так званий загальноприйнятий спосіб, що полягає у розмноженні ендомікоризних грибів на коренях цілої рослини-хазяїна, культивованих у контрольованих умовах в теплиці або в культурній камері.
метод "in vitro", що полягає у розмноженні ендомікоризного гриба на коренях, вирощуваних на синтетичному середовищі в стерильних умовах.

Інокулюм у твердому вигляді або у рідкій суспензії може складатися з різних типів пропагул: спор, грибкового міцелію, фрагментів мікоризних коренів. Один або кілька типів пропагул можуть бути складені в одному і тому ж ендомікоризному посіві. Крім того, інокуляти ектомікоризних або ендомікоризних грибів можуть містити один або кілька змішаних видів грибів. Багатовидові продукти ближчі до природних умов, оскільки в екосистемах рідко можна зустріти лише один вид мікоризного гриба. Наявність кількох видів грибів дозволяє інокулюму реагувати на більшу різноманітність умов культури.

Якість щеплення

Що стосується якості наявної інокуляції, необхідно взяти до уваги кілька критеріїв, зазначених на упаковці:

доза застосування, яка надає інформацію про мінімальну дозу посівного матеріалу, необхідну для гарантування мікоризації рослини або рослинного покриву,
кількість пропагул/одиниця ваги або обсягу продукту, що вказує на мінімальну насиченість інокуляту, гарантовану виробником.

Рекомендована доза та багатство пропагул пов’язані. Однак кількість пропагул на одиницю інокуляту недостатня для оцінки якості щеплення. Найточніший критерій якості заснований на переліку ефективно життєздатних та інфекційних пропагул. У цьому випадку необхідно провести метод із використанням біологічного тесту на рослинах, тобто випробування типу MPN. Термін зберігання (DLUO), а також оптимальні умови зберігання інокулята зазначені на упаковці. Термін придатності буде визначений, беручи до уваги кількість життєздатних та інфекційних пропагул, що знаходяться в інокулюмі наприкінці життя. Таким чином, дуже важливо, щоб користувач мав на увазі, що інокулят - це продукт, що складається з живих мікроорганізмів, і що він дотримується умов використання та зберігання, передбачених постачальником.

Як керуватися вибором продукту ?

Залежно від передбаченого способу застосування, користувач повинен буде вибрати форму щеплення, яка найбільш відповідає його потребам. В даний час можна знайти мікоризний щеплення у вигляді гранул, порошку, таблеток, праліну або рідких суспензій:

Мікро гранули, між 1 і 4 мм, легко змішуються з рослинними середовищами для виробництва мікоризних рослин або вносяться в посадкову яму якомога ближче до коріння.
Порошки дуже дрібні (частинки

Одна думка на тему “Мікориза: діагностика та щеплення”

Ми хотіли б знати, чи включають Ваші послуги вилучення ДНК з органо-мінеральних середовищ та ампліфікації ПЛР, можливо з подальшим секвенуванням та біоінформативним аналізом.

Ми працюємо в рамках дослідницького проекту щодо зелених дахів, зокрема над підкладкою, що складається з пуццолани та зеленого компосту. Ми хотіли б вилучення загальної ДНК з цього субстрату та демонстрацію присутності різних таксонів грибів, зокрема гломероміцетів.

Дякуємо за увагу до нашого запиту,

Лоран Палка та Ів Берто
кафедра екології та управління біорізноманіттям
UMR 7204 CESCO
43, rue Buffon PO Box 135
75005 Париж