ДНК Chlamydia pneumoniae; Центральний військовий університетський госпіталь невідкладної допомоги Dr.
ДНК Chlamydia pneumoniae
Загальна інформація
Хламідіоз - це невеликий внутрішньоклітинний зв’язуючий прокаріотичний паразит (0,2-1 мкм), який має як бактеріальні характеристики (синтезує РНК і ДНК, має стінку і клітинну мембрану, подібну до грамнегативних бактерій, чутливий до антибіотиків циклінного типу), і вірус (розмножується лише в живих еукаріотичних клітинах, не може синтезувати АТФ, який забезпечується клітинами-господарями).
Однак він відрізняється від усіх мікроорганізмів певним циклом росту, що характеризується 2 різними формами:
• елементарне тіло (ЕК), пристосоване до позаклітинного існування;
• сітчасте тіло (CR), адаптоване до внутрішньоклітинного середовища (внутрішньоцитоплазматичне).
Елементарні тільця дуже інфекційні і, потрапляючи в організм, вони прикріплюються до клітинної мембрани, будучи ендоцитозованими. Внутрішньоклітинно ендосома не зливається з лізосомами, як це зазвичай буває з будь-яким інтерналізованим матеріалом, при цьому хламідії залишаються у фагоцитованій пухирці протягом усього свого життєвого циклу. Незабаром після потрапляння в клітину ЕК перетворюється на КР, яка більша, не може інфікувати інші клітини, і бінарні діляться всередині вакуолей («інтрацитоплазматичні хламідійні включення»). Приблизно через 36 годин CR реорганізується в CE, так що через 48-72 години вся цитоплазма клітини може бути замінена включеннями, що містять сотні/тисячі CE. Хоча цитоплазма клітини майже повністю зайнята ЕК, функція клітини мінімально впливає. Вивільнення елементарних тільців може відбуватися шляхом екзоцитозу включень або лізису клітин господаря. ЕК здатні заражати нові клітини або в межах одного організму, або в новому хазяїні. Таким чином, життєвий цикл C. pneumoniae розподілений між елементарними тільцями, які здатні заражати нових господарів, але не можуть розмножуватися, та сітчастими тільцями, які розмножуються, але не здатні викликати нову інфекцію.
Нещодавні класифікації поділяють хламідії на 4 сім’ї, з яких найважливішою в патології людини є сім’я. Chlamydiaceae, що містить два роди:
• рід хламідій - найважливішим представником є C. trachomatis;
• рід Chlamydophila - C. pneumoniae, C. psittaci, C. pecorum, C. abortus тощо.
Пневмонія та бронхіт - найпоширеніші захворювання, пов’язані з C. pneumoniae. У серії клінічних випробувань 10% випадків пневмонії та приблизно 5% випадків бронхіту та синуситу у дорослих були віднесені до мікроорганізму.
Симптоми інфекції C. pneumoniae не відрізняються від інших причин пневмонії, і вони включають закладеність носа, кашель, лихоманку та задишку. Більшість випадків пневмонії відносно легкі і не потребують госпіталізації. Однак навіть у легких випадках повне одужання відбувається повільно, незважаючи на адекватну антибіотикотерапію, і кашель та нездужання можуть зберігатися протягом декількох тижнів від початку захворювання.
Кілька хронічних захворювань також були пов'язані з інфекцією C. pneumoniae. У пацієнтів з респіраторними інфекціями з C. pneumoniae в анамнезі частіше розвивається астматичний бронхіт, що припускає, що ці мікроорганізми можуть бути важливим фактором розвитку астми або загострень астми.
Культурні методи виділення мікроорганізму трудомісткі та трудомісткі; Молекулярне тестування - це швидкий спосіб виявлення ДНК на C. pneumoniae у різних дихальних секретах, що сприяє ранньому встановленню відповідної антибіотикотерапії. В недавньому дослідженні у дітей з респіраторними інфекціями чутливість та специфічність ПЛР-тесту до діагнозу гострої інфекції становили 63,6% та 100% відповідно.
Рекомендації щодо визначення хламідіозу - ДНК - виявлення легеневих інфекцій.
Навчання пацієнта - це не потрібно.
Зібраний зразок - а) глотковий або носоглотковий ексудат; б) рідина, отримана промиванням бронхів або бронхо-альвеолярним промиванням, аспірацією трахеї або бронхів, мокротою.
Збиральний контейнер - а) сухий буфер (без транспортного середовища); б) стерильна тара.
Кількість зібраного - б) мінімум 2 мл.
Необхідна обробка після збору врожаю - це не потрібно.
Причини відхилення доказів - недостатня кількість для аналізу; забруднення зразка; зразки занадто старі.
Перевірка стійкості - зразки стабільні протягом 48 годин при 2-4 ° С перед екстракцією нуклеїнових кислот.
Метод та інтерпретація результатів
Метод - ПЛР в режимі реального часу Light-Cycler: ланцюгова реакція полімеризації з виявленням накопиченого ПЛР-продукту в реальному часі шляхом вимірювання випромінюваної флуоресценції (якісний тест).
Довідкові значення - Хламідіоз - ДНК, що не виявляється.
Межа виявлення - 200 дітей/мл.
Інтерпретація результатів
Виявлення хламідіозу - ДНК у респіраторних секретах передбачає клінічний діагноз інфекції Chlamydia pneumoniae.
Межі та перешкоди
Хоча ПЛР - це метод, який забезпечує швидку та надійну діагностику, в зразках, що містять дуже мало мікроорганізмів, можуть спостерігатися помилкові негативні результати.