Фосфо-Smad2 (Ser465467) Smad3 (Ser423425) (D27F4) Кролячий mAb

Вестерн-блот-аналіз екстрактів з клітин HaCaT, необроблених (-) або оброблених hTGF-β3 # 8425 (+) у відсутність або в присутності інгібітора TGFR SB 431542, з використанням Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Кролячий mAb (верхній) або Smad2/3 (D7G7) XP ® Кроличий mAb # 8685 (нижній).

Фосфо-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Кролячий mAb 8828

ser423425

Вестерн-блот-аналіз екстрактів з клітин HaCaT, необроблених (-) або оброблених hTGF-β3 # 8425 (+) у відсутність або в присутності інгібітора TGFR SB 431542, з використанням Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Кролячий mAb (верхній) або Smad2/3 (D7G7) XP ® Кроличий mAb # 8685 (нижній).

  • Ваш місцевий представник
  • Ваша інформація про місцеві покупки
  • Гарантія антитіл
  • FAQ
  • Технічна підтримка
  • Сертифікат аналізу
  • Додаткові дані
  • Супутні товари
  • Використання продукту
  • Протоколи
  • Передумови
  • Шляхи та білки
  • Цитати та відгуки

Додаткові дані

РЕАКТИВНІСТЬ H M R Mk
ЧУТЛИВІСТЬ Ендогенні
МВт (кДа) 52, 60
Джерело/Ізотип Кролячий IgG

Ключ програми:

  • В.-Західний фільм
  • IP-Імунопреципітація
  • IHC-Імуногістохімія
  • Чіп-Імунопреципітація хроматину
  • ЯКЩО-Імунофлюоресценція
  • Ф.-Проточна цитометрія
  • E-P-ІФА-пептиди

Ключ перехресної реактивності виду:

  • H-Людина
  • М.-Миша
  • Р.-порада
  • Хм-хом'як
  • Mk-Мавпа
  • Ср-Норка
  • C.-Курка
  • Дм-D. melanogaster
  • X-Ксенопус
  • Z-Данио
  • B.-Бичачий
  • Dg-Пес
  • Стор-Свиня
  • Доктор-S. cerevisiae
  • Се-C. elegans
  • Містер-Кінь
  • Аллес-Всі види очікувані
Smad2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb # 8685
Антитіло Smad2/3 # 3102
Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb # 5339
Антитіло Smad2/3 # 5678
Phospho-Smad3 (Ser423/425) (C25A9) Кролячий mAb # 9520
Phospho-Smad1 (Ser463/465)/Smad5 (Ser463/465)/Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb # 13820
Phospho-Smad2 (Ser465/467) (138D4) Кролячий mAb # 3108
Smad3 (C67H9) Кролячий mAb # 9523
Фосфо-Смад 1/5 (Ser463/465) (41D10) Кролячий mAb # 9516
Фосфо-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Кролячий mAb # 18338

Інформація про використання продукту

Зберігання

Поставляється в 10 мМ HEPES натрію (рН 7,5), 150 мМ NaCl, 100 мкг/мл BSA, 50% гліцерину та менше 0,02% азиду натрію. Зберігати при -20 ° C. Не аліквотуйте антитіло.

Протокол

Вестерн-протокол промокання

Для вестерн-блоттингу інкубуйте мембрану з розведеним первинним антитілом у 5% мас./Об. BSA, 1X TBS, 0,1% Tween® 20 при 4 ° C з легким струшуванням протягом ночі.

КЛАС: Будь ласка, зверніться до веб-сторінки первинного продукту антитіл щодо рекомендованого розведення антитіл.

А. Розчини та реагенти

Від підготовки зразка до виявлення, реагенти, необхідні для вашого Western Blot, тепер знаходяться в одному зручному наборі: # 12957 Western Blotting Application Solutions Kit

КЛАС: Приготуйте розчини з деіонізованою зворотним осмосом (RODI) або рівноцінною водою.

B. Білкові промокання

Загальний протокол підготовки зразків.

  1. Обробляйте клітини, додаючи свіжий носій, що містить регулятор протягом бажаного часу.
  2. Аспіратні засоби масової інформації з культур; промити клітини 1X PBS; аспірувати.
  3. Лізують клітини шляхом додавання 1X буфера зразка SDS (100 мкл на лунку 6-лункової пластини або 500 мкл для пластини діаметром 10 см). Негайно зішкребіть клітини з пластини і перенесіть екстракт у пробірку для мікроцентрифуги. Тримайся на льоду.
  4. Ультразвук протягом 10-15 секунд для завершення лізису клітин та зсуву ДНК (для зменшення в’язкості зразка).
  5. Нагрійте 20 мкл зразка до 95-100 ° C протягом 5 хв; прохолодно на льоду.
  6. Мікроцентрифуга протягом 5 хв.

Завантажте 20 мкл на гель SDS-PAGE (10 см x 10 см).

СОРТ: Рекомендується завантаження попередньо фарбованих маркерів молекулярної маси (# 13953, 5 мкл/смуга) для перевірки електротрансферу та біотинільованих білкових драбин (# 7727, 10 мкл/смуга) для визначення молекулярних ваг.

  • Електротрансфер на нітроцелюлозну мембрану (# 12369).

    • C. Блокування мембрани та інкубації антитіл

    КЛАС: Обсяги для 10 см х 10 см (100 см 2) мембрани; для мембран різного розміру відповідно регулюйте гучність.

    I. Блокування мембрани

    1. (Необов’язково) Після перенесення промийте нітроцелюлозну мембрану 25 мл TBS протягом 5 хв при кімнатній температурі.
    2. Інкубуйте мембрану в 25 мл блокуючого буфера протягом 1 години при кімнатній температурі.
    3. Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.

    II. Первинна інкубація антитіл

    1. Інкубуйте мембрану та первинне антитіло (при відповідному розведенні та розчиннику, як рекомендовано на веб-сторінці продукту) у 10 мл первинного буфера для розведення антитіл, обережно перемішуючи протягом ночі при 4 ° C.
    2. Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.
    3. Інкубуйте мембрану з анти-кролячим IgG, зв'язаним з HRP антитілом (# 7074 на 1: 2000) та антибіотином, зв'язаним з HRP-антитілом (# 7075 на 1: 1000–1: 3000) для виявлення біотинільованих білкових маркерів у 10 мл блокуючий буфер з легким перемішуванням протягом 1 години при кімнатній температурі.
    4. Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.
    5. Продовжуйте виявлення (Розділ D).

    D. Виявлення білків

    Вказівки щодо використання:

    1. Промийте зв’язаний з мембраною HRP (кон’югат антитіл) тричі протягом 5 хвилин у TBST.
    2. Приготуйте 1X реагенту SignalFire ™ ECL (# 6883), розбавивши одну частину 2X реагенту A та одну частину 2X реагенту B (наприклад, для 10 мл додайте 5 мл реагенту A та 5 мл реагенту B). Добре перемішати.
    3. Інкубуйте субстрат з мембраною протягом 1 хвилини, видаліть надлишок розчину (мембрана залишається вологою), оберніть пластиком і піддайте рентгенівській плівці.

    * Уникайте повторного впливу на шкіру.

    розміщено в червні 2005 року

    переглянуто в червні 2020 року

    Специфічність/Чутливість

    Фосфо-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Кролячий mAb розпізнає ендогенні рівні білка Smad2 при фосфорилюванні на Ser465 та Ser467. Це антитіло також розпізнає ендогенні рівні білка Smad3, коли фосфорилюється лише Ser422 або як Ser423, так і Ser425.

    Видова реактивність:

    Людина, миша, щур, мавпа

    Джерело/Очищення

    Моноклональні антитіла отримують імунізацією тварин синтетичним пептидом, що відповідає залишкам, що оточують Ser465/467 людського білка Smad2.

    Передумови

    Члени сімейства молекул Smad, що передають молекули, є компонентами критичного внутрішньоклітинного шляху, який передає сигнали TGF-β з поверхні клітини в ядро. Визначено три окремі класи Smads: рецептори Smads (R-Smads), які включають Smad1, 2, 3, 5 та 8; спільний посередник Smad (co-Smad), Smad4; та антагоністичні або інгібуючі Smads (I-Smads), Smad6 та 7 (1-5). Активовані рецептори типу I асоціюються зі специфічними R-Smads і фосфорилюють їх на збереженому карбокси-кінцевому мотиві SSXS. Фосфорильований R-Smad дисоціює від рецептора і утворює гетеромерний комплекс із co-Smad (Smad4), дозволяючи транслокацію комплексу до ядра. Потрапляючи в ядро, Smads може націлювати різноманітні білки, що зв’язують ДНК, для регулювання транскрипційних реакцій (6-8).

    Шляхи та білки

    Дослідіть шляхи + білки, пов’язані з цим продуктом.