Генотипування та аналіз лімфоїдних тканин, пов’язаних зі прямокишково-анальною слизовою для виявлення
Хронічна хвороба марнотратства (CWD) підтверджується при виявленні пріона CWD в тканині мозку або лімфоїдної тканини. Впевнені власники можуть вимагати від сторонніх лабораторій проведення аналізу лімфоїдних тканин, асоційованих із прямокишковою анальною слизовою, та/або генотипування їх шийки матки, що дозволить виявити потенційно інфікованих маточних ший і, таким чином, керувати стадами.
Як і у всіх тестах на CWD, аналіз лімфоїдної тканини, асоційованої зі прямокишково-анальною слизовою, надає обмежену інформацію. Список часто задаваних питань щодо аналізу цих тканин та генотипування представлений нижче; це може допомогти селекціонерам визначити, чи хочуть вони інтегрувати ці тести в управління своїми стадами.
Що таке аналіз лімфоїдних тканин, пов’язаних зі прямокишково-анальною слизовою?
Аналіз лімфоїдної тканини, пов’язаної з прямокишково-анальною слизовою, включає біопсію невеликої смужки лімфоїдної тканини, яка знаходиться безпосередньо в задньому проході живої шийки матки. Ця смуга тканини містить лімфоїдні фолікули, в яких може бути присутній прион, що спричиняє CWD, якщо шийка матки має це захворювання. Потім тканину фіксують і фарбують міченими антитілами до MDC, а ветеринарний патолог оглядає лімфоїдні фолікули, щоб перевірити, чи були вони забарвлені. Цей тест називається імуногістохімія (IHC). Принаймні шість лімфоїдних фолікулів повинні бути видимими, щоб результати були вагомими.
Що таке генотипування?
Генотипування також відоме як аналіз ДНК. Це процес визначення генетичного складу тварини шляхом дослідження послідовності ДНК. При генотипуванні схильності тварини до CWD, ДНК-аналіз визначає генетичні зміни гена, що кодує нормальний клітинний прионний білок. Перебіг ХБП у тварини може залежати від того, наскільки добре ген, що кодує нормальний білок, протистоїть зміні в аномальну форму, що викликає ХБН.
Як генотип впливає на схильність до СХУ?
Дослідження показали, що генетичні варіації не надають стійкості проти CWD, але можуть впливати на те, як швидко прогресує хвороба, коли тварина заражена. У тварин з генотипами, сприйнятливими до CWD, інкубаційний період короткий, і клінічні ознаки швидко прогресують. Власники оленів можуть використовувати цю інформацію під час заготівлі чи вибракування своїх стад.
Як види цервідів та генотип впливають на результати аналізу лімфоїдної тканини, пов’язаної зі слизовою прямокишково-анальної зони?
Тривалість часу між часом зараження та появою пріона, що викликає CWD, у лімфоїдних тканинах варіюється залежно від виду та генотипу шийки матки. Наприклад, сканування мозку деяких лосів, які ще не мають клінічних ознак, показує позитивні результати, але відсутність виявленої концентрації прионів, пов’язаних з CWD, у ретрофарингеальних лімфатичних вузлах. У такій ситуації аналіз лімфоїдної тканини, асоційованої зі прямокишково-анальною слизовою, може дати помилково негативний результат. Лось, який несе ген 132LL, вважається найтривалішим інкубаційним періодом. Таким чином, тварина може інфікуватися протягом тривалого часу до того, як пріон буде виявлений у лімфоїдній тканині, що також може призвести до хибнонегативного результату при аналізі лімфоїдної тканини, пов’язаної зі прямокишково-анальною слизовою.
Однак у білохвостих оленів пріони, що викликають CWD, накопичуються в черепно-мозковій тканині (наприклад, в ретрофарингеальному лімфатичному вузлі), перш ніж їх виявляють у мозку. Білохвості олені, що несуть ген 96GG - це ті, у яких захворювання з’являється найраніше після зараження; Отже, пріони можуть бути виявлені в лімфоїдній тканині незабаром після зараження. Аналіз лімфоїдної тканини, асоційованої зі прямокишково-анальною слизовою у зараженого оленя з цим генотипом, може дати позитивний результат.
Чи можна проводити аналіз лімфоїдних тканин, пов’язаних із прямокишково-анальною слизовою, без генотипування?
Як інструмент управління стадом, аналіз лімфоїдних тканин, пов’язаних зі прямокишково-анальною слизовою, є дуже корисним, коли також відомий генотип тварин у стаді. Наприклад, рекомендований часовий проміжок перед повторним тестуванням цих лімфоїдних тканин, що дозволить контролювати стан здоров’я стада після забою тварини з ХБП, залежить від генотипу тварин. Якщо аналіз лімфоїдних тканин, асоційованих із прямокишково-анальною слизовою, повторюється занадто рано у стаді з високою часткою стійких генотипів, можуть бути помилково негативні результати, коли стадо, по суті, уражене СХУ.
Як проводиться аналіз лімфоїдних тканин, пов’язаних зі прямокишково-анальною слизовою?
Техніка біопсії лімфоїдних тканин, пов’язана зі прямо-анальною слизовою, є складною. Це тому, що недосвідчений пробник може взяти шматочок тканини із заднього проходу замість лімфоїдної тканини, оскільки це тонка смужка тканини, розташована безпосередньо всередині заднього проходу. Крім того, зібрані тканини повинні містити достатню кількість лімфоїдних фолікулів (принаймні шість), щоб зразок був репрезентативним. Якщо взяти і протестувати занадто мало фолікулів, результати можуть бути помилково негативними. Крім того, оскільки кількість лімфоїдної тканини, пов’язаної зі прямокишково-анальною слизовою, обмежена, зразки слід збирати та обробляти обережно, оскільки не завжди можливо повторно взяти проби (порівняно з аналізами крові чи калу). Особа, яка отримує зразки для аналізу лімфоїдних тканин, асоційованих із прямо-анальною слизовою, повинна бути належним чином підготовлена.
Як робиться генотипування?
Генотипування можна зробити за зразком крові. Однак використання генотипу та аналізу лімфоїдних тканин, пов'язаних із прямокишково-анальною слизовою, як інструментів управління стадом вимагає певного рівня знань. Перед відбором проб стада необхідно скласти план тлумачення та застосування.
Чому CFIA не використовує аналіз лімфоїдних тканин, асоційованих з прямокишково-анальною слизовою, як тест на CWD у окремої тварини?
Тривалий інкубаційний період та мінливість у прогресуванні СХЗ між різними видами та генотипами, описаними вище, означають, що багато цервідів будуть негативними на ранніх стадіях захворювання. У деяких інфікованих шийках матки CWD не поширюється та не виявляється в лімфоїдних тканинах (наприклад, лімфоїдних тканинах, пов’язаних із прямо-анальною слизовою). З цієї причини відбір проб та аналіз лімфоїдних тканин, асоційованих із прямокишково-анальною слизовою, є більш придатним для скринінгу на CWD у стаді, ніж для скринінгу на наявність захворювання у окремої тварини. Негативний результат при аналізі лімфоїдних тканин, пов’язаних із прямокишково-анальною слизовою, не підтверджує, що тварина не має ХБН, але позитивний результат є значним.
Як CFIA реагуватиме на тварин, які мають позитивний тест на лімфоїдну тканину, пов’язану зі прямокишково-анальною слизовою?
Тварина, яка має позитивний результат на наявність лімфоїдної тканини, асоційованої із прямокишково-анальною слизовою, класифікується як підозрюваний щодо ХВН; про цей випадок необхідно повідомити CFIA відповідно до Закон про здоров’я тварин, тому що CWD - це хвороба, яку потрібно повідомити. Сертист класифікується як позитивний для CWD лише тоді, коли Канадська національна референтна лабораторія для CWD, розташована в Оттаві, повідомляє про позитивні результати для двох або більше тестів на CWD, затверджених CFIA.
Сторонній лабораторії, яка проводила аналіз лімфоїдних тканин, асоційованих із прямокишково-анальною слизовою, буде потрібно направити тканини в Канадську національну референтну лабораторію для ХВН в Оттаві для дослідження. Якщо Національна референтна лабораторія ХВН визначить, що результати тесту на лімфоїдну тканину є позитивними, CFIA розпорядиться утилізувати тварину з компенсацією, щоб можна було провести підтверджувальний постмортологічний тест на ХВЗ. Цей захід застосовується до будь-якого вирощуваного в організмі маторогові, який має позитивний результат на наявність лімфоїдної тканини, асоційованої із прямокишково-анальною слизовою, незалежно від того, чи стадо бере участь у Програмі добровільної сертифікації стада (ПВХ) для ХСН. Для отримання додаткової інформації про CFIA CWVP для CWD, будь ласка, відвідайте нашу сторінку сертифікації стада. Вирощувана зграя, в якій підтверджено CWD, перебуває під розслідуванням CFIA; якщо CFIA не розпоряджається вибраковувати це стадо, на нього можуть поширюватися вимоги провінційного контролю за захворюваннями.
CFIA не розпоряджається знищенням з компенсацією тварини з позитивним тестом RAMALT, якщо ця тварина є частиною стада, для якого вже було підтверджено, що заражене CWD.
Як отримати аналіз лімфоїдних тканин, пов’язаних із прямокишково-анальною слизовою та/або генотипуванням стада?
В даний час CFIA схвалено три незалежні лабораторії для проведення аналізів лімфоїдних тканин, асоційованих із прямокишковою анальною слизовою та/або генотипуванням цервікалів
Генотипування лосів
Генотипування білохвостих оленів