Лабораторна діагностика вагітності
Діагноз вагітності в лабораторії заснований на виявленні в крові або сечі вагітної жінки хоріонічного гонадотропного гормону (ХГЧ), що виділяється трофобластом.
Це виявляється при імплантації.
Час його подвоєння в плазмі становить в середньому 1,4 дня.
Його максимальний рівень досягається через 8 тижнів (90 000 МО/л у плазмі).
1. Загальний принцип:
З робіт Асгейма та Зондека в 1928 р. Були розроблені біологічні аналізи, принцип яких полягає у визнанні біологічного ефекту ХГЧ у лабораторних тварин (миші або селезінка, опушені, кролики та ін.).
Ці методи були замінені імунологічними дослідженнями, заснованими на антигенних характеристиках HCG та реакції Антиген-Антитіло на антитіло HCG.
Через структурні взаємозв'язки між ХГЧ і ЛГ не вдалося виявити дуже низькі кількості ХГЛ і, отже, поставити дуже ранній діагноз. Тому в більшості запропонованих тестів використовуються специфічні до HCG антитіла до HCG ß.
2. Якісні методи (сеча):
1) Принцип:
Проводяться тести на вагітність на сечі і які використовують реакції інгібування аглютинації або в лабораторії, або в аптечних тестах, що продаються без рецепта. Вони визначають загальний вміст ХГЧ з певного порогу.
Отже, існує ризик помилково негативного негативного впливу, якщо кількість ХГЧ нижче порога виявлення.
У цих методах використовуються реакції, що пригнічують аглютинацію еритроцитів або частинок латексу, до яких раніше приєднувався ХГЧ і які контактували з антисироваткою проти HCG.
Якщо антисироватка вже вступила в реакцію з HCG, який присутній у досліджуваному зразку сечі, вона не може згодом реагувати з HCG, закріпленим на опорі (еритроцити або латекс), і аглютинація більше не відбуватиметься; це призведе до осідання еритроцитів на дні трубки в характерному кільці або для латексу відсутність утворення скупчень на предметному склі.
2) Значення результату:
Це означає, що у досліджуваному зразку присутній HCG у концентрації, що перевищує поріг чутливості методу; цей поріг повинен бути відомим і нижчим при "ß-тестах", які використовують β-антисироватку анти-HCG (25 МО/літр).
Це означає, що відсутній HCG при концентрації вище порогу чутливості, але не дозволяє стверджувати, що в досліджуваному зразку відсутній HCG і, отже, формально усунути ранню вагітність.
- Помилкові позитивні результати можна побачити:
. якщо не використовується специфічна β-антисироватка проти HCG, через перехресну реакцію з LH,
. у присутності гемоглобіну або еритроцитів, значної протеїнурії, бактеріурії або миючих засобів, що використовуються для миття контейнерів,
. в лабораторії у разі недостатнього очищення пробірок, що містили ХГЧ.
3) Показання якісних методів:
Вони дозволяють проводити діагностику вагітності на сечі просто, швидко, недорого, практично скрізь, включаючи саму пацієнтку (тести на вагітність вільно продаються в аптеках або супермаркетах).
Не забувайте, що:
- якщо результат позитивний, ймовірність вагітності,
- якщо результат негативний, тест необхідно повторити через кілька днів, щоб розпізнати вагітність, яка занадто молода, щоб її можна було виявити за допомогою використовуваного методу.
Цінність цих тестів менша, якщо ми підозрюємо позаматкову вагітність, при якій рівні секретованого ХГЧ можуть бути низькими і, отже, нижче порогового значення, і вимагають використання кількісного методу або принаймні ультрачутливого якісного методу на зразку крові.
3. Кількісні методи (плазма):
Ці методи забезпечують точний рівень ХГЧ у плазмі крові, проте невеликий (немає помилково негативного). Вони дуже чутливі і дозволяють діагностувати вагітність відразу після їх імплантації, тобто з 10-го дня після овуляції, дати виявлення ХГЧ у плазмі, тобто до будь-якої затримки менструації.
Аналіз заснований на імунологічних методах для ХГЧ та радіоімунологічних або ферментно-імунологічних для бета-субодиниці.
1) Прийоми:
в) Методи за конкурсом:
HCG, що підлягає аналізу, конкурує з HCG, позначеним як антитіло до HCG; чим вища кількість ХГЧ у середовищі, тим більше залишається незв'язаного міченого ХГЧ, що можна кількісно визначити.
б) Методи сендвіч:
Використовуються два реактивні антитіла:
- перший, закріплений на твердій опорі, вводиться в контакт із HCG, який слід визначити,
- друге антитіло, мічене, спрямоване проти іншого антигенного ділянки HCG (β-ланцюга), вводиться в середовище; кількість мітки, яка зв'язується з твердим носієм, прямо пропорційна кількості HCG, приєднаного до першого антитіла.
в) Використані маркери:
- Радіоактивний йод: радіоімунологічний метод,
- фермент: ферментно-імунологічний метод,
- флуоресцентна молекула: імуно-флуорометричний метод.
2) Референтні значення плазмового ХГЧ:
Ця крива чітко демонструє швидке підвищення рівня ХГЛ до максимуму, розташованого на 9-му ВА, потім їх швидке зниження до плато, яке буде зберігатися до кінця вагітності.
Ми краще розуміємо, що недостатньо чутливі тести, проведені у 2-му або 3-му триместрі вагітності, можуть бути негативними.
Кажуть, що площа від 95-го до 5-го процентиля (LN) є нормальною.
Нижче LI - область недостатності.
У картриджі показано в логарифмічному масштабі з 10-го по 20-й день після запліднення еволюція рівнів ХГЧ, швидкість подвоєння яких становить 1,4 дня в середньому з екстремумами від 1 до 2,1 дня.
3) Позначення кількісних методів:
Вони дають змогу виявляти дуже низькі рівні ХГЛ та контролювати еволюцію рівнів ХГЛ під час послідовних аналізів. При нормальній вагітності дозування ХГЛ не приносить користі.
в) Рання діагностика вагітності:
Вагітність можна діагностувати дуже чутливим методом відразу після імплантації, тобто з 10-го дня після передбачуваної дати овуляції (до будь-якого пізнього періоду).
Цей метод може бути корисним для:
- виявити невизнане дострокове переривання вагітності у безплідних жінок,
- розпізнати вагітність на ранніх термінах після лікування стерильності (наприклад, після ЕКЗ або після запліднення).
Рівень 10 мМО/мл є значним. У цьому випадку підтвердження вагітності робиться:
. або через 48 годин новою дозою (подвоїти першу),
. або негайно в дозі ß-HCG.
Перевага цих ультраранніх доз полягає у диференціації безпліддя шляхом зачаття від безпліддя шляхом дуже раннього аборту.
б) Прогноз аборту:
Низький рівень ХГЛ у віці вагітності або особливо недостатній ріст при декількох послідовних дозуваннях дозволяє передбачити аборт, який відбудеться лише через кілька днів або кілька тижнів.
Однак, за відсутності точних знань про термін вагітності та на дату, коли УЗД ще не забезпечує власних прогностичних елементів, ці результати слід розглядати з обережністю, побоюючись ігнорувати більш тривалу вагітність. Молода, але нормальної еволюції.
Буде розміщено паралельно:
- зміни рівня ХГЧ (дотримуйтесь показника подвоєння),
- поява чи відсутність ультразвукових ознак ембріональної життєвості.
проти) Діагностика позаматкової вагітності:
При позаматковій вагітності рівні ХГЧ часто низькі (менше 800 мМО/мл у 50% випадків):
- якщо в екстрених випадках негативний якісний тест за умови достатньої чутливості спочатку дозволяє уникнути лапароскопії (за умови, що клінічна картина не вимагає іншого),
- кількісний тест є важливим для розпізнавання дуже низьких рівнів ХГЛ та встановлення більш точної кореляції з гестаційним віком та клінічними та ультразвуковими даними.
Рівень ХГЧ у плазмі крові понад 3500 мМО/мл завжди супроводжується гестаційним мішком, добре помітним на УЗД черевної порожнини, 1300 мМО/мл на вагінальному УЗД.
Слід зазначити, що моніторинг зростання рівня ХГЛ не дає аргументу для позаматкової ділянки вагітності:
. нормальний нахил не виключає діагнозу ГЕУ, тим більше, що вагітність молода,
. повільний ріст - це елемент поганого життєвого тонусу, не передбачаючи розташування яйцеклітини.
Швидке зниження рівня ХГЛ у рідкісних випадках може дати надію на спонтанне відновлення передбачуваної позаматкової вагітності; Тому дуже важливо продовжувати біологічний моніторинг до тих пір, поки рівень ХГЧ не буде негативним.
г) Діагностика та моніторинг трофобластичних захворювань:
Діагноз родимої родимки базується на поєднанні аналізів ультразвуку та ХГЧ.
Рівні ХГЧ надзвичайно високі (понад 100000 МО/л).
Після евакуації молярної вагітності необхідно буде спостерігати зменшення, а потім зникнення ХГЧ.
У разі недостатнього зниження або повторного підвищення рівня ХГЛ слід побоюватися хоріокарциноми.
У цьому випадку ефективність хіміотерапії оцінюється регулярним і тривалим спостереженням рівнів ХГЛ.
д) Відбір популяції з ризиком хромосомних аномалій:
Недавні дослідження повідомляли про користь дозування ХГЛ між 16-м і 18-м тижнями очевидно нормальної вагітності; виявлення рівнів ХГЧ, що перевищують рівні, які зазвичай зустрічаються в цей термін вагітності, може бути пов'язане з трисомією 21.