ПАМ’ЯТЬ UNIVERSITÉ DU QUÉBEC ПРЕЗЕНТОВАНА В UNIVERSITÉ DU QUÉBEC В РІМОУСЬКОМУ

UNIVERSITÉ DU QUÉBEC ЛОКАЛІЗАЦІЯ ІММУНОГІСТОХІМІЇ КЛІТИН, ІМУНЕРАКТИВНИХ ДО ДОПАМІНУ І НОРАДРЕНАЛІНУ В ГАНДЛІЯХ ДВОЙНОГО МОЛЮСКА: МАЯ АРЕНАРІЯ ТА ВПЛИВ СЕРОТОНІНУ АНТИКІЗОЛЬНИЙ КОЛЕКЦІЯ програма наук з океанографії СЕВЕРІН ЛУІ, грудень 2007 р

рімоуському

UNIVERSITÉ DU QUÉBEC À RIMOUSKI Попередження бібліотечної служби Ця дисертація або дисертація розповсюджується відповідно до прав її автора, який підписав форму "Дозвіл на відтворення та розповсюдження звіту, дисертації або дисертації". Підписуючи цю форму, автор надає Квебецькому університету в Римовському невиключну ліцензію на використання та публікацію всіх або значної частини своїх досліджень в освітніх та некомерційних цілях. Більш конкретно, автор уповноважує Університет Квебеку в Римуському відтворювати, розповсюджувати, позичати, розповсюджувати або продавати копії своїх дослідницьких робіт у некомерційних цілях на будь-якому носії, включаючи Інтернет. Ця ліцензія та це дозвіл не означають відмови автора від його моральних прав або прав інтелектуальної власності. Якщо не погоджено інше, автор зберігає свободу розповсюдження та збуту цієї роботи, копією якої він є власником.

ПОДЯКИ Перш за все я хотів би подякувати моєму керівнику досліджень, пані Джоселін Пеллерін, яка дозволила мені здійснити ступінь магістра в її лабораторії з захоплюючих предметів та багато чого навчитися в галузі екофізіології двостулкових молюсків. Крім того, робота в його лабораторії навчила мене декількох важливих концепцій, включаючи поняття проби/помилки, що буде дуже корисним для мене в майбутньому. Звичайно, це очевидно. Я дякую Флоренту Гарнеро, а точніше доктору Гарнеро, за допомогу, нагляд, навчання, поради та ремонт усіх видів ! Дуже дякую! Я також хотів би подякувати П'єру Блієру, який дозволив мені використовувати його спермограф для спостереження за рухливістю сперми M arenaria, а також його лабораторії та Джонатану Коте, який дав мені тренінги та поради щодо її використання. Я також хотів би подякувати Селін Аудет і Режану Трембла за їхні позики на обладнання та Гері Бернесу за допомогу в розробці мого протоколу для визначення рухливості сперми. також хотів би подякувати Жану-Клоду Бретесу за допомогу та підтримку протягом усього ступеня мого магістра, починаючи з самого початку (стажування в Коріолісі) і до кінця (отримання мого

IV з концентрацією серотоніну 10-4 та 10-5 M після найдовшого випробовуваного часу впливу, еквівалентного 180 хвилинам. Отже, це друге дослідження підтверджує, що синтезований в гангліях М аренарій серотонін направляється до гонад серотонінергічними волокнами, де бере участь у репродуктивних процесах. У цьому дослідженні було націлено на дві інші цілі. Перший стосувався аналізу впливу престероїдних препаратів (17р-естрадіолу, тестостерону та прогестерону) на вплив серотоніну в різних концентраціях на ШВБ ооцитів. Другий стосувався аналізу рухливості сперми за різних умов (часу, температури та додавання серотоніну до середовища). Однак, враховуючи труднощі отримання особин на поствітелогенній стадії в достатній кількості для самок та на зрілій стадії для чоловіків, можна створити лише протоколи, які можна знайти в додатку.

v СКОРОЧЕННЯ, ВИКОРИСТОВУВАНЕ у фігурі гр СА CG Д.А. DAB вьего DIF тра н Н.А. НЖК NIF PG VG коркові катехоламіни церебральний Ганглії допамін діамінобензідін допамін-Иммунореактивность CEIL допамін-Иммунореактивность волокна протектора м'язові нейропіля норадреналін noradrenoradrenal-нервові клітини імунореактивного Ganglea Ганглії-Імуно-нейронні волокна + норадреналін-імунореактивні стелі 0 дофамін-імунореактивні стелі

Vlll РОЗДІЛ 3: Індукція in vitro розпаду зародкових бульбашок в ооцитах молюска софтшелл, Mya arenaria. 75 РЕФЕРАТ. 76 3.1. Вступ. 77 3.2. Матеріал і методи. 81 3.2.1. Аналіз дозрівання яйцеклітин за допомогою 5-НТ. 81 3.2.2. Статистичний аналіз. 82 3.3. Результати. 84 3.4. Обговорення. 86 3.5. Подяки. 88 3.6. Список літератури. 89 ЗАГАЛЬНИЙ ВИСНОВОК. 93 ЛІТЕРАТУРА. 96 ДОДАТОК 1: Протокол, що дозволяє визначати рухливість сперматозоїдів Mya arenaria, їх вміст АТФ та їх ферментативну активність при різних температурах, а також демонструвати вплив серотоніну на їх рухливість. 111 ДОДАТОК 2: Протокол, що дозволяє продемонструвати вплив попередніх обробок стероїдами на розчинення зародкового міхура ооцитів, індукованих серотоніном у Mya arenaria. 117

IX СПИСОК ФІГУР РОЗДІЛ 2 Рисунок 2.1 Рисунок 2.2 Рисунок 2.3 Допамін та норадреналін-подібна імунореактивність у вісцеральних гангліях Mya arenaria. 50 Імуногістохімічна хімія, забарвлена ​​допаміном та норадреналіном, на вісцеральних, педальних та мозкових гангліях у Mya arenaria. 54 Допамін та норадреналін-подібна імунореактивність у педальному ганглії Mya arenaria. 56 Рисунок 2.4 Допаміноподібна імунореактивність у мозкових гангліях Mya arenaria. 6 1 РОЗДІЛ 3 Рисунок 3.1: Рисунок 3.2: Сферичний ооцит M-аренарій у GVBD із вільним ядром у цитоплазмі, спостерігається за допомогою світлового мікроскопа. 83 Дозрівання яйцеклітин у М-аренаріях, індуковане 5-НТ, з різними концентраціями та у різний час (60, 90, 120 та 180 хвилин). 85 ДОДАТОК 1 Рисунок 4.1: Представлення зразків, що вивчаються системою аналізу зображень CASA. 115

x СПИСОК ТАБЛИЦ ГЛАВА 1 Таблиця 1.1 Визначення катехоламінів (DA та NA) у двостулкових молюсків. 8-11 Таблиця 1.2 Індукція GVBD у двостулкових молюсків серотоніном. 22-23 РОЗДІЛ 3 Таблиця 3.1 Індукція серотоніну GVBD у двостулкових молюсків. 79-80 ДОДАТОК 1 Таблиця 4.1 Налаштування параметрів для виявлення сперми M. arenaria за допомогою системи CASA. I13

3 Проведено кілька досліджень цього оргазму, але для того, щоб дозволити його масштабне комерційне виробництво, необхідно краще контролювати нейрофізіологічні та ендокринні механізми, які контролюють усі його фізіологічні процеси, такі як розмноження.

5 крапель раптово перед розмноженням сперматогонії та оогоми (Illanes-Bücher and Lubet, 1980). Крім того, секреторний матеріал, накопичений в ЦНС під час гаметогенезу, вимивається, коли гамети стають повністю зрілими (Lubet, 1955 та 1959). Природа цих виділень буває двох типів: аммергія (катехоламіни та індоламіни) та пептидергічна (Lubet та Mathieu, 1990). Амінергічні клітини присутні у всіх типах гангліїв, а серед індоламінів серотонін (5-гідрокситриптамін або 5-НТ) був вперше продемонстрований Уелшем та Мурхедом у 1960 р. У безхребетних, а також дофамін (DA), що належить до катехоламінів . Навпаки, норадреналін (NA), який також називають норадреналіном, вперше був відкритий Котреллом в 1967 р. У голкошкірих, молюсків та ракоподібних.

6 1.2. Катехоламіни: дофамін та норадреналін 1.2.1. Синтези, аналізи та розташування дофаміну та норадреналіну у двостулкових молюсків. Дофамін є першим представником сімейства катехоламінів, що з’являється на шляху їх біосинтезу. Він синтезується з тирозину (Tyr) в катехоламінергічних нейронах та його гідроксилювання дофаміном-

-гідроксилаза призводить до утворення норадреналіну. Lacoste et al., 2001a, також продемонстрували їх синтез хромаффінними клітинами серця у C. gigas. Ці катехоламіни визначались, головним чином, методами високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ) у нервовій системі та периферичних тканинах численних двостулкових молюсків (табл. 1.1). Однак їх точне розташування в нервовій системі та в периферичних тканинах двостулкових молюсків обмежується результатами кількох досліджень на Anondata piscinalis, Mytilus edulis, Patinopecten yessoensis, Placopecten magellanicus і Sphaerium sulcatum (Dahl et al., 1966; Sweeney, 1968; Stefano and Aiello, 1975; Matsutani and Nomura, 1984; Smith et al., 1998) і одночасно локалізують дофамін і норадреналін. Дослідження Dahl et al., 1966, Stefano and Aiello, 1975, Matsutani and Nomura, 1984, виявляють розсіяні катехоламінергічні нейрони та велику кількість нервових волокон у нейропілах всіх центральних гангліїв A. piscinalis, M edulis та P. yessoensis потім

8 Таблиця 1.1 Визначення катехоламінів (DA та NA) у двостулкових молюсків. Легенда: D: прісноводні види, M: морські види, Ge: мозкові ганглії, GV: вісцеральні ганглії, GP ганглії стопи, SN всі ганглії. "

"вказує візуально визначені значення на графіках цитованих статей. Види Aequipecten irradians Тип М Автори Суїні, 1963 Техніка Флюорометрія Тканини Ганглії Концентрації дофаміну (DA) 74

lglg концентрації норадреналіну (NA) Anodonta piscinalis Clinocardium nuttallii M M Dahl et al., 1966 Сміт, 1982 ВЕРХ спектрофторометрія GC II, 6

г/г GY GP 1,5 ± 0,23 нмоль/мг губних пальп стор

. 1,4 ± 0,3 8 нмоль/мг B ranc h les t ". _--------- с