Підготовка сперми до допоміжної репродукції
Сперма, що використовується для АРТ, готується з використанням декількох методів, кожна з яких має на меті відокремити сперму від насінної рідини та відібрати рухливу популяцію сперми еякуляту.
Цей препарат дозволений лише у затвердженій лабораторії.
1. Збір сперми:
1) Збір за допомогою мастурбації:
Забір проводиться в ізольованому приміщенні лабораторії і вимагає дотримання певних умов:
- утримання за 3 дні до збору (бажано не перевищувати 4 дні утримання),
- сувора гігієна: перед зразком помочіться та очистіть руки та головку.
Повна ідентифікація пацієнта (прізвище, ім'я, дата народження та номер файлу) відображається на посудині, що містить сперму.
Домашня колекція дозволена, але за строгих умов.
На поліпшення бактеріологічної якості сперми впливає багаторазове сечовипускання.
Ось приклад протоколу, реалізованого у французькому центрі ЕКО:
1. Проведіть еякуляцію за 2-3 дні до призначення, а потім утримайтеся, поки не візьмете пробу.
2. Випийте літр води на ніч перед тим, як взяти пробу між вечерею та сном, щоб добре помочитися.
3. Важливо, щоб пацієнт мочився безпосередньо перед забором, щоб "очистити уретру", щоб уникнути бактеріального забруднення.
Потім еякулят («свіжа сперма») збирається в стерильну банку, яку потрібно зберігати в духовці при температурі 37 ° C на час розрідження (30-45 хвилин). В цей час сперма підвішується в насінній рідині.
Потім потрібно буде виділити сперматозоїди з насінної рідини, в якій вони купаються.
Rem: Коли спонтанна еякуляція неможлива (параплегія, еректильна дисфункція), збір може бути здійснений шляхом еякуляції, спричиненої фізичним шляхом (вібромасажем, електростимуляцією) або фармакологічним.
Rem: У разі ретроградної еякуляції (у сечовому міхурі): сперма може збиратися в сечі ...
2) Розморожування замороженої сперми:
Здійснено розморожування сперми:
- коли сперма була заморожена до лікування (хіміотерапія тощо),
- коли проблема виникає в день зразка мастурбації та введена процедура самозбереження,
- під час ЕКО з донором сперми.
3) Хірургічний збір:
У разі обструктивної азооспермії (перешкоди еякуляції сперми) сперму можна збирати 2 методами:
- Пункція сім'явивідної протоки придатка яєчка (MESA).
- Біопсія яєчка (TESA).
Зібрані гамети не завжди є мобільними, що зменшує шанси на успіх ICSI.
Якщо вони виявляться якісними, сперма буде заморожена для подальшого ЕКО.
Операцію, заплановану заздалегідь, проводить уролог під загальним наркозом.
2. Приготування сперми:
1) Чому ?
- Сперма, що міститься в спермі, не все запліднює, і їх якість також нерівномірна.
- Насіннєва рідина, багата білками (а іноді і бактеріями), може бути причиною інфекцій або алергічних реакцій, якщо вона потрапляє у внутрішньоматкову порожнину під час запліднення та зменшує при ЕКО здатність розпізнавання між спермою та ооцитом.
Тому підготовка сперматозоїдів має дві цілі: зробити їх фертильними та відібрати найкращих.
2) Як ?
Аналіз спермограми проводитиметься до та після цієї підготовки.
Для розділення доступні дві методики, обидві з яких дозволяють відновити рухливу та нормальну сперму:
- Техніка висхідної міграції: сперматозоїди поміщають у послідовні середовища і на кожному етапі відновлюють супернатант. Оскільки лише рухомі сперматозоїди можуть підніматися на поверхню, ця методика виділяє найбільш рухливу сперму.
- Центрифугування з градієнтом щільності +++: дозволяє виділити сперматозоїди відповідно до їх щільності, а отже, і їх морфології. Найщільнішу фракцію, що містить структурно нормальну сперму, збирають, потім промивають центрифугуванням.
Після декількох промивань та проходів у центрифузі, елімінується насіннєва плазма, щоб відібрати найбільш рухливу сперму. Цей метод відтворює природний відбір, здійснений жіночими статевими шляхами, коли сперма проходить через цервікальний слиз.
Кілька досліджень продемонстрували перевагу методики градієнта щільності над міграцією вгору з точки зору прибутковості та сили запліднення сперматозоїдів.
Коли сперма має дуже низький вміст сперми, можна провести лише просте промивання шляхом центрифугування.
Існують також культурні засоби масової інформації для поліпшення рухливості сперми. Але ці методи мало використовуються в класичному ЕКО.
Rem: Для хірургічних зразків підготовка однакова.