Стаття додатка - Указ від 21 жовтня 1987 року про офіційний спосіб дозування вітамінів

Останнє оновлення даних для цього тексту: 04 лютого 1999 р

додатка

  • Згорнути додатки (стаття додатка)
    • Розгорніть Офіційний метод визначення вітаміну B 1: (тіаміну) у дієті та дієтичних продуктах. (Стаття у додатку)

    Додаток

    Скасовано Указом 1999-01-12 ст. 2 JORF 4 лютого 1999 р

    1. Визначення та сфера застосування.

    Вміст вітаміну B 1 (тіаміну) у дієтах та дієтичних продуктах є результатом, отриманим із застосуванням методу, описаного нижче.

    Екстракція тіаміну кислотним та ферментативним гідролізом. Потім окислення тіаміну до тіохромного фериціанідом калію. Визначення тіохрому методом флуорометрії після виділення цього з'єднання за допомогою високоефективної рідинної хроматографії з зворотною фазою.

    Реагенти повинні бути аналітичного класу. Використовувана вода - це дистильована вода або вода принаймні еквівалентної чистоти.

    3.1. Приблизно 0,1 М розчин соляної кислоти.

    3.2. 2,5 М розчин ацетату натрію.

    3.5. 1 р розчину. 100 (м/об) фериціаніду калію (зберігання протягом одного тижня при + 4 ° C).

    3.6. 15% розчин. 100 (м/об) гідроксиду натрію.

    3.7. Окислювальний розчин (готувати негайно): додайте 1 мл розчину фериціаніду калію (3.5) до 24 мл розчину гідроксиду натрію (3.6) (ці пропорції можуть бути необов’язково модифіковані за необхідності).

    3.8. Метанол (сорт для хроматографії).

    3.9. 0,05 М розчин ацетату натрію.

    3.10. Рухлива фаза: 30-70 (об/об) суміші метанолу (3.8) та ацетату натрію (3.9).

    3.11. Елююючий розчин: 70/30 (об./Об.) Суміш метанолу (3.8) і води.

    3.12. Вітамін B 1 (тіамін).

    3.13. Основний стандартний розчин вітаміну B 1 (1 мг/мл). Зважте рівно близько 50 мг вітаміну B 1 (3.12) у склянці та додайте 40 мл води. Перекладіть у мірну колбу об’ємом 50 мл і залийте водою.

    Лабораторне обладнання, а зокрема:

    4.4. Піч при 37 7 1 ° C.

    4.5. Картридж Sep Pak C 18 або еквівалент.

    4.6. 0,2 мм мембрана ацетату целюлози.

    4.7. Високоефективний апарат для рідинної хроматографії з флуорометричним детектором.

    4.8. Колона, що містить прищеплену зворотну фазу типу октадецилсилану (довжина 30 см і внутрішній діаметр 4 мм).

    5. Порядок дій.

    5.1. Підготовка дослідної проби:

    Гомогенізуйте зразок після тонкого та швидкого його подрібнення (за необхідності). Зважте рівно близько М грамів цього зразка у 250-мл колбу Ерленмейера (М порядку 5 грам для зразка, що містить приблизно 0,8 мг вітаміну В 1 на сто грамів). Додайте 65 мл розчину соляної кислоти (3.1) і поставте на водяну баню при температурі 100 ° C на тридцять хвилин. Охолодити та довести рН до 4,5 додаванням ацетату натрію (3,2). Потім додайте 50 мг b-амілази та 500 мг такадіатази з невеликою кількістю води. Струси. Помістіть у піч при температурі 37 ° C на ніч. Кількісно переносять у мірну колбу об'ємом 125 мл і доливають водою. Фільтрують супернатант.

    Помістіть 1 мл отриманого фільтрату в склянку об’ємом 15 мл. Додайте 3 мл окисного розчину (3.7). Струсіть, а потім залиште стояти рівно одну хвилину. Пропустіть цей розчин, а також промивну воду через картридж Sep Pak C 18 (кондиціонуючи, пропустивши 2 мл 3,8-метанолу та 5 мл води). Промийте картридж двічі 5 мл ацетату натрію (3.9), потім елююйте 8 мл розчину (3.11). Додайте цим же розчином до 10 мл і процідіть через мембрану ацетату целюлози (розчин зразка, який вводять у хроматограф).

    5.2. Підготовка стандартів:

    Зробіть 1/500 розведення водою зі стандартного розчину (3.13). Візьміть рівно 0,1, 0,3 та 0,5 мл отриманого розчину та помістіть їх у мензурки об’ємом 15 мл. Додайте до кожного склянки 3 мл окисного розчину (3.7). Струсіть, а потім залиште стояти рівно одну хвилину. Пропустіть ці розчини, а також промивну воду через кондиціоновані картриджі Sep Pak C 18.

    Промийте картриджі двічі 5 мл ацетату натрію (3.9), потім елююйте 8 мл розчину (3.11). Додайте цим самим розчином до 10 мл і фільтруйте кожен стандартний розчин через мембрану ацетату целюлози (стандартні розчини, що вводяться в хроматограф, містять відповідно 0,02, 0,06 та 0,10 мг вітаміну В 1 на мл).

    5.3. Хроматографічні умови:

    Швидкість потоку рухомої фази: 1 мл на хвилину.

    Виявлення флуоресценції: довжина хвилі збудження:

    366 нм; Довжина хвилі випромінювання: 435 нм.

    Об’єм введення: 20 мл.

    6. Вираження результатів.

    6.1. Метод і формула розрахунку:

    Нехай х - кількість вітаміну В 1 (виражена в мг), що міститься в 1 мл розчину, що вводиться в хроматограф (значення, отримане за допомогою калібрувальної кривої).

    Вміст вітаміну B 1 (тіаміну гідрохлориду) у досліджуваній пробі (виражене в мг на сто грамів) визначається співвідношенням: 125 X M.

    Різниця між результатами двох визначень, проведених одночасно або послідовно одним і тим же аналітиком, не повинна перевищувати 0,03 мг/100 г, коли вміст вітаміну В 1 у досліджуваній пробі наближається до 0,60 мг на сто грамів. Для продуктів, багатих на вітамін В 1 (вміст близько 4 мг на сто грамів), ця різниця може досягати 0,15 мг/100 г.