Виробництво зерна на кефірі та демонстрація антимікробної активності - завантажити у форматі PDF безкоштовно
الجمهورية الجزائرية الديمقراطية الشعبية Алжирський Народної Демократичної Республіки وزارة التعليم العالي و البحث العلمي Міністерство освіти і наукових досліджень братів Університет Mentouri Костянтин факультет природничих наук і життя جامعة اإلخوة منتوري قسنطينة كلية علوم الطبيعة و الحياة قسم الميكروبيولوجيا Кафедра мікробіології Дисертація Представлено з метою до здобуття ступеня магістра Поле: Природні науки та науки Сектор: Біологічні науки Спеціальність: Біотехнологія грибів/бродіння та виробництво грибкових речовин Назва: Кефір: Виробництво зерен та виявлення антимікробної активності Представлено та підтримано: BRIHMETTE Radja 06 липня, 2017 CHAOUA Samah Defense журі Президент журі: пані MIHOUBI I. Науковий керівник: пан KACEM CHAOUCHE N. Експерт: пані CHERFIA R. Вихователь: пані BENHASSINE S. Професор UFM Constantine. Професор УФМ Костянтин. MAA.UFM Костянтин. Доктор УФМ Костянтин. 2016-2017 університетський рік
Присвяти Я присвячую цю роботу своїм дорогим батькам, моїй люблячій матері, яка не переставала мене підбадьорювати і молитися за мене, моєму коханому татові, який навчив мене бути впевненим у собі і який завжди штовхає мене йти вперед. Моїм дорогим братам, які були, які є і які завжди будуть поруч, щоб підтримати мене. Моїм прекрасним друзям Амірі, Аміні, Асії, Мерієм та Радії. Моїм колегам Хадіджі та Рокеї. Моєму нареченому та всім моїм сватам за їх заохочення та прихильність. Самах
Зміст 1-Вступ. 1 2- Бібліографічний огляд. 3 2.1- Загальна інформація про зерна кефіру. 3 2.2- Походження та історія розвитку кефіру. 3 2.3 - Статистика споживання кефіру. 4 2.4- Структура зерен кефіру. 5 2.5- Мікрофлора зерен кефіру. 6 2.5.1- Взаємозв’язки між мікроорганізмами в кефірі. 7 2.6- Формування та виробництво зерен кефіру. 8 2.7 - Якість зерен кефіру. 9 2.8- Виробничі процедури. 9 2.8.1 - Підготовка до материнської культури. 9 2.8.2 - Приготування з самого кефіру. 10 2.8.3- Промислове виробництво. 10 2.8.4- Збереження та обслуговування. 10 2.8.5- Спосіб приготування кефіру. 10 2.9- Склад кефіру. 11 2.9.1- Молоко. 11 2.9.2- Органічні кислоти. 11 2.9.3- Лактоза. 12 2.10 - Переваги кефіру. 12 2.11- Антибактеріальна активність. 13 2.11.1- кишкова паличка. 13
2.11.2 - Bacillus subtilis. 14 2.11.3- золотистий стафілокок. 14 2.11.4 - Candida albicans. 14 2.11.5 - Aspergillus flavus. 15 3-Матеріали та методи. 16 3.1 - Виділення кефірної мікрофлори та зерен кефіру. 16 3.1.1- Походження та обслуговування зерна кефіру ГК. 16 3.1.2- Виділення мікроорганізмів із ряжанки. 17 3.1.3- Виділення мікроорганізмів із зерен кефіру «ГК. 3.1.4 - Виділення мікрофлори кефіру, відтвореного “ГКС”. 18 3.1.5 - Спосіб щеплення з використанням молока та зерен кефіру. 19 3.1.6 - Очищення штамів. 20 3.2- Вивчення антимікробної активності. 20 3.2.1- Реактивація тестових штамів. 20 3.2.2 - Приготування зразків сироватки. 21 3.2.3 - Тест на антагонізм. 21 3.2.3.1 - Тест на антагонізм із використанням сироватки. 21 3.2.3.2 - Тест на антагонізм із використанням зерен кефіру. 22 3.2.3.3 - Тест на антагонізм із використанням штамів, виділених із ферментованого молока та зерен кефіру. 22 4- Результати. 23 4.1- Виділення кефірної мікрофлори та зерен кефіру. 23 4.2- Виробництво зерен кефіру. 28 4.3- Вивчення антимікробної активності. 28 4.3.1 - Тест на антагонізм із використанням сироватки. 29
4.3.2 - Тест на антагонізм із використанням зерен кефіру. 30 4.3.3 - Тест на антагонізм із використанням штамів, виділених з кефіру та із зерен кефіру ГК. 31 4.3.4 - Тест на антагонізм із використанням штамів, виділених із кефіру та із зерен кефіру ГКС. 33 5-Дискусія. 35 6-Висновок. 45 7-Резюме. 47 9-бібліографічних посилань. 49 10- Додаток
Список скорочень APM: пероксидант ацетобактерного середовища BK: кефірний бульйон ECEH: Escherichia coli ентерогеморагічний EPS: екзополічний сахарид GK: кефірні зерна GKS: пакетикові кефірні зерна LB: лактобактерії LS: сироватка LSS: мішок сироватки MRS: Шар агар, PCA кількість агарових пластин HUS: гемолітично-уремічний синдром SNLS: супернатант сироватки SNLSS: мішок сироватки супернатанту STEC: Escherichia coli, що продукує шига-токсини ВІЛ: вірус імунодефіциту людини YPG: дріжджі, пептон, глюкоза
Список таблиць Таблиця 1: Умови культури, що застосовуються для виділення та перерахування мікробних груп із зерна. Таблиця 2: Таблиця, що представляє деякі морфологічні аспекти колоній, розроблених на вибраних селективних середовищах, виділених із зразків кисломолочного зерна кефірних зерен. Таблиця 3: Таблиця, що визначає штами, виділені з різних зразків. 26 Таблиця 4: Результати тесту на антагонізм сироватки для зерен GK та GKS для вибраних тест-штамів. 29 Таблиця 5: Результати тесту на антагонізм зерна GK та GKS на вибраних тестових штамах. Таблиця 6: результати тесту на антагонізм штамів, виділених з кефіру та з зерен кефіру GK на досліджуваних мікроорганізмах. 32 Таблиця 7: результати тесту на антагонізм штамів, виділених з кефіру та із зерен кефіру GKS на досліджуваних мікроорганізмах. 34
Перелік рисунків Рисунок 1 показує структуру зерен кефіру. 5 Рисунок 2 Ілюстрація кефірного зерна при збільшенні 7000X. 17 Рисунок 3 Кефірне зерно (GK). 16 Рисунок 4 Кефір ферментований. 16 Рисунок 5 Зразки, приготовані з ряжанки. 17 Рисунок 6 Відновлення зерен кефіру. 18 Рисунок 7 Дезінфіковані зерна кефіру. 18 Рисунок 8 Процес виробництва зерна на кефірі. 18 Рисунок 9 Посів зерна кефіру Г.К. 19 Рисунок 10 Приготування зразка сироватки. 21 Рисунок 11 Збір зерен кефіру, вироблених ГКС. 28
Введення для розробки нових протимікробних сполук, крім антибіотиків, в даному випадку пробіотиків. Отже, пошук антибактеріальної та протигрибкової активності кефіру та кефірного зерна поставив метою нашої роботи, для цього націлено кілька осей, а саме: виділення мікробних груп із зерен кефіру та кефіру. Виробництво зерен кефіру в лабораторії. Демонстрація антимікробної активності кефіру та його походження. 2
Системний бібліографічний огляд і ми говоримо про кандидемію. Кандидемія характеризується смертністю близько 40%. C. albicans також може спричинити безліч інших інфекцій, оскільки є дуже універсальним умовно-патогенним мікроорганізмом: він може бути причиною поверхневої шкірної інфекції, викликати пелюшковий висип у новонароджених, бронхопневмонію та, або пневмонію, вагініт, баланіт або бути відповідальним за глибокі інфекції (Dromer, 2013). 2.11.5 - Aspergillus flavus - вид аскоміцетного гриба, космополіт, A. flavus може колонізувати багато субстратів (Abdul et al., 1979). Aspergillus flavus є основним продуцентом афлатоксинів B1 (найважливіших), B2, G1 та G2 . В даний час афлатоксин В1 вважається найважливішим відомим в природі канцерогеном. Виробляються інші мікотоксини: пергілієва кислота, койєва кислота (дуже токсична для тварин), флавіцин, флавіцидин, гранегілін, оризазин, флавіцидова кислота (фітотоксична), β-пропіонова кислота, реморгенна речовина (Bennett, 2010). 15
Матеріал і методи
Матеріали та методи. Потім 1 г зерен додавали до 9 мл фізіологічної води для приготування розчину (кефірний відвар) “BK”; Пробірку перемішували за допомогою вихру. (Simova et al., 2002) Посів проводився таким же чином, як пояснюється в розділі (3.2). З іншого боку, кількість зерен зберігалася при -4 С у сухому молоці для подальшого використання. Рисунок 6 Відновлення зерен кефіру Рисунок 7 Продезінфікованих зерен кефіру 3.1.4 - Виділення мікрофлори кефіру, відтвореного "ГКС". Дотримуючись найбільш традиційної процедури, була створена спроба вирощування зерен шляхом введення шматочків телячого сичуга ( 3%) (Beijerinck, 1889), промивають і прополіскують у стерильній дистильованій воді в шкірний мішок, що містить 3 літри сирого молока. Потім мішок витримували при кімнатній температурі, час від часу перемішуючи, і половину кількості молока поновлювали лише один раз між двома 72-годинними бродіннями (Ot-es та Cagindi, 2003). Рисунок 8 Процес виробництва зерна на кефірі 18
Матеріали та методи Після закінчення часу інкубації мішок добре струшували, перед тим як кількість молока виливали в стерильну чашку Петрі і з якої дозу 1 мл розводили у 9 мл пробірці. Фізіологічна вода, десяткові розведення 10-1 Потім таким же чином проводили до 10-3 початкової суспензії (стандарт NF ISO 7218). Цю саму процедуру повторювали для другої кількості молока, вилитого після другого перемішування мішка. 3.1.5 - Спосіб інокуляції з молока та кефірних зерен Передбачувані мікробні групи виділяли з молока, а також з кефірного бульйону "BK" шляхом розкладання на чашки Петрі на середовищі селективної культури агару (Додаток 1) та в умовах інкубації описано в таблиці 2 (Ninane, 2008). Інокуляцію проводили або на поверхні в аеробних умовах, забираючи 0,1 мл досліджуваного розчину, або масою, відбираючи 1 мл в анаеробних умовах (Bonnefoy et al., 2002) . Що стосується щеплення зерен "ГК" і "ГКС", то воно здійснювалось шляхом осадження кількох фрагментів зерен на чашки Петрі, що містять ті самі селективні культуральні середовища. Рисунок 9 Посів зерна кефіру GK 19
Результати Таблиця 2: Таблиця, що представляє деякі морфологічні аспекти колоній, розвинених на вибраних селективних середовищах, виділених із зразків кисломолочного зерна кефірних зерен. Середні колонії розвинені Середні колонії розвинені MRS MRS + ATB Mayeux PCA APM MRS YGC “дезінфіковані зерна” 25
Результати Таблиця 3: Таблиця, що визначає штами, виділені з різних проб по зернах GS по зернах GK. GK. 2 L 10-2 Кисломолочне MRS 08 GS2 MS Зерно, що виробляється MRS 14 S10-3 MY Молоко з мішка Mayeux MS зернами GS GK. 3 S110-3 MS GS Молоко з мішка MRS 09 GS1 ATB Зерно виробництва MRS + ATB 15 S10-2 MY Молоко з мішка Mayeux 4 S210-3 Молоко з мішка MRS 10 GS2 ATB Зерно, вироблене MRS + ATB2 16 GKMY Grains de Kefir Mayeux MS GS GK 5 S310-3 Молоко з мішка MRS 11 L1MY Молоко, ферментоване Mayeux 17 L1PC Кисломолочне зерно PCA MS GK зернами GK. 6 GK MS Kefir зерна GK MRS 12 L 2MY Молоко, зброджене зернами GK. Mayeux 18 S110-3 PC Молоко з мішка PCA 26
Результати N Код Походження * Середній * N Код Походження * Середній * N Код Походження * Середній * 19 S2 PC Молоко з мішка PCA 24 BKPM Бульйон від APM 28 S2 (10-3) YG Молоко з мішка YGC Кефірні зерна BK 20 L110 - 2 PM GK зерновий кисломолочний APM 25 L1 YG GK зерновий кисломолочний 21 L2PM APM зерновий ферментований 26 L2YG GK зерновий кисломолочний GK. YGC 29 BK1YG Бульйон із зерен кефіру YGC BK YGC 30 BK2YG Бульйон із зерен кефіру YGC BK 22 S10-3 PM Молоко з мішка APM 27 S110-3 YG Молоко з мішка YGC 31 L2 PC Молоко, ферментоване PCA зернами GK 23 S10 -1 PM Молоко з мішка APM Середнє *: Ізоляційне середовище. Походження *: Інокульований зразок 27