Визначення резус-фактора Синево

Загальна інформація

Індивід вважається резус-позитивним, якщо його еритроцити експресують антиген D, а термін резус-негативний означає відсутність антигену D. Відсутність антигену D виявляється у 15-17% осіб серед білої популяції і рідше зустрічається в інших популяціях. У білої популяції відсутність антигену D зумовлена делецією гена RHD, тоді як в азіатській та чорношкірій популяціях це пов’язано з інактивацією гена, а не з його делецією. .

Деякі еритроцити, що експресують антиген D, потребують тривалої інкубації з реагентом анти-D для аглютинації. Ці еритроцити вважаються D-позитивним антигеном і описуються як слабкі D, раніше звані D u (менш ніж в 1% випадків). Вважається, що слабкий фенотип D виникає через один із наступних трьох механізмів 5:

а) успадкування гена RHD, що кодує білок D з ослабленою антигенною експресією: він частіше зустрічається у популяції чорношкірих і асоціюється з гаплотипом Dce, а в білій популяції - з гаплотипом DCe або DcE.
б) взаємодія гена D з іншими генами: особини з геном D у перекладеній позиції щодо гена С (наприклад, Dce/Ce) виявляють ослаблену експресію гена D.

Особи зі слабким фенотипом D за одним із цих двох механізмів не утворюють аллоантитіл після впливу позитивних D еритроцитів.

в) успадкування гена, що кодує антигенний комплекс D, в якому відсутні деякі епітопи, також званий частковим D; ці особи можуть продукувати анти-D, якщо їм переливати D-позитивні еритроцити. З них D VI має найменшу кількість епітопів, і ці люди мають найвищий ризик імунізації, але значно нижчий, ніж негативні D-люди 3 .

Донорів із низьким вмістом D слід вважати резус-позитивними (D); важливо, щоб вони не позначалися як резус-негативні, оскільки слабкий антиген D може викликати імунну відповідь, якщо переливати резус-негативному індивідууму 1; 3; 5. Особам зі слабким D може бути перелита резус-позитивна кров (крім D VI), а вагітним жінкам не потрібна профілактика імуноглобуліну проти D 2; Якщо використовується відповідний анти-D моноклональний реагент, більшість антигенних детермінант, раніше класифікованих як D u, більше не слід відрізняти від D у звичайних умовах. .

Нульовий резус-фенотип виникає, коли еритроцити не експресують резус-антигени, принаймні за двома можливими механізмами: успадкування гена, що кодує аномальний Rh-асоційований глікопротеїн з нормальними генами RHD та RHCE, або успадкування мутації R-асоційованого гена RHCE. Резус-нульовий фенотип асоціюється із порушеннями структури еритроцитів зі стоматоцитозом та гемолізом. Ці особини утворюють аллоантитіла, які взаємодіють з усіма еритроцитами, крім резус-нуля 5 .

Антирезусні антитіла виникають шляхом аллоімунізації, після несумісних переливань у резус-систему або під час вагітності. Надзвичайно рідко природні антитіла можуть з'являтися в резус-системі без відомих антигенних подразників (анти-Е, анти-С w), в більшості випадків клінічно нерелевантні 1; 3. Також при гемолітичних імунних анеміях аутоантитіла часто мають анти-Rh 1 активність .

Більшість анти-Rh антитіл є IgG, особливо IgG1 та IgG3 (неповні агглютиніни), хоча деякі можуть бути IgM, і зазвичай не активують комплемент 5. IgM-подібні зв'язуючі антитіла, як правило, є тимчасовими і виникають на початку імунізації 1. Найпоширенішими є антитіла проти D, які можуть спричинити гемолітичну хворобу новонародженого та важкі реакції гемолітичного переливання. Їх частота суттєво зменшилась із застосуванням анти-D профілактики у резус-негативних вагітних із резус-позитивним плодом. Антитіла проти C, c, E, e пов'язані з гемолітичною хворобою новонародженого та легкими реакціями гемолітичного переливання крові 5 .

Rh-друк еритроцитів проводиться за допомогою моноклональних анти-D сироваток, які реагують у фізіологічному розчині і містять як IgM людини (який не визначає категорію D VI) 3, так і поліклональні антитіла IgG, останні також можуть бути використані в антиглобуліновому тесті на D слабкий 2. Людський або бичачий альбумін додають до препарату анти-резус-сироватки, який модифікує діелектричну проникність середовища та сприяє аглютинації резус-позитивних еритроцитів 1 .

Рекомендації щодо визначення резус-фактора

перед переливанням;
перед інвазивною чи хірургічною процедурою, потенційно пов'язаною з ускладненнями кровотечі, які можуть вимагати переливання;
передпологовий та післяпологовий імуногематологічний моніторинг матері та дитини;
донорам крові.

Плановий аналіз крові не вказує на визначення інших резус-антигенів, крім резус-фактора D. Визначення повного резус-фенотипу показано у донорів крові, слід враховувати при переливанні крові дівчатам та жінкам у менопаузі, хворим із хронічним переливанням крові та реципієнти з нерегулярними антиеритроцитарними антитілами 3 .

Навчання пацієнта - попередня підготовка не потрібна; корисна інформація про інфузійне лікування розчинами високомолекулярних розчинів, проведене до визначення, переливання крові за останні 120 днів 4 .

Зібраний зразок - а) капілярна кров з пульпи пальця; б) венозна кров 4 .

Збиральний контейнер - б) вакутейнер без добавок або активуючого гелю (червоний або безбарвний ковпачок); для автоматичного методу: 4 мл вакуатора, що містить ЕДТА (кришка темно-фіолетового кольору) 4 .

Кількість зібраного - б) наскільки дозволяє вакуум 4 .

Причини відхилення доказів - сильно гемолізований зразок 4 .

Стабільність зразка - тест проводиться негайно, якщо це неможливо, зразок витримують протягом 48 годин при 2-8 ° C; для автоматичного методу зразок крові має стабільність 7 днів при 2-8 ° C 4 .

Необхідна обробка після збору врожаю - після повної коагуляції при кімнатній температурі сироватка і згусток видаляються. З решти еритроцитів готують 40% суспензію у власній плазмі або у фізіологічному розчині. Для методу картовної аглютинації суспензію з 5% еритроцитів готують у спеціальному суспензійному середовищі 1; Для автоматичного методу пробу крові центрифугують для отримання плазми і вставляють в аналізатор (плазма залишається над еритроцитами) 4 .

Метод визначення - у лабораторіях Synevo виконуються такі методи:

- гемаглютинація на тарілці з анти-D IgM моноклональним реагентом 4. Визначення проводиться за допомогою двох різних типів моноклональних антитіл, а тест включає аутологічний контроль (альбуміновий контроль - еритроцити пацієнта досліджують із середовищем, в якому містяться моноклональні Ac), а також еритроцити контрольної групи O, резус-позитивний та резус-негативний 1; 3 .

- аглютинація та гель-фільтрація на картках з мікротрубками, що містять гель, просочений специфічним реагентом еритроцитарного антигену (мишачий або моноклональний антитіла людини) - прямий тест групи АВО та визначення Ag RH1 (D) та Ag RH 1,2,3 (DCE).

Відома контрольна група та резус-кров використовуються при кожному дослідженні зразків 4 .

- автоматичний метод гемаглютинації на пластинах свердловин (в Центральній лабораторії Синево)

Робочі пластини (Еритип S) містять 12 тест-смужок з 8 лунками в кожній (1 смужка = повний тест АВО та резус-фактор). Для визначення Rh використовуються 2 сухі моноклональні сироватки проти D IgM, що вистилають дві лунки смуги 4. .

Інтерпретація результатів

Для пластинкового методу гемаглютинації

Реципієнти крові та новонароджені:

Rh (D) позитивний, якщо однозначно позитивні результати (> = 2 +) отримані як з тест-сироватками проти D, так і контроль автомобіля негативний;
Rh (D) негативний, якщо явно негативні результати отримані з обома тестовими сироватками проти D, незалежно від результату тестування автомобіля.

Якщо отримані погані результати, потрібно додаткове тестування (3 .

У донорів, якщо початковий тест на D негативний, слід провести другий тест для виявлення слабкого D (це не потрібно у реципієнтів крові, яким слід переливати резус-негативну кров). Також визначення наявності слабкого D у вагітних усуває непотрібне лікування анти-D імуноглобуліном. Перш ніж позначати пацієнта слабким D, ми повинні переконатися, що йому нещодавно не переливали резус-позитивні еритроцити 2 .

Для методу картональної аглютинації позитивна реакція підтверджується лише в тому випадку, якщо контрольна мікропробірка є негативною. Позитивну реакцію оцінюють залежно від дисперсії аглютинатів у мікропробірці від + до ++++, наступним чином: - позитивний результат (++++); - слабкий позитивний результат (від + до +++); - негативний результат (-).

Інтерпретація результату в мікротрубці RH1 (D)

Позитивний результат у мікротрубці RH1 (D) свідчить про наявність антигену RH1 (D) на поверхні досліджуваних еритроцитів. Картки ABO/RH, що використовуються в лабораторії, не дозволяють виявити ні слабко імуногенні антигени D, ні частково фенотип RH1 категорії VI (D VI)

Необхідно провести додаткові тести на ці конкретні антигени.

Інтерпретація результату в мікротрубці RH1,2,3 (DCE)

Позитивний результат у пробірці RH1,2,3 (DCE) свідчить про наявність антигену RH1 (D) та/або RH2 (C) та/або RH3 (E) на поверхні еритроцитів, що підлягають тестуванню. .

Після того, як відбулася реакція аглютинації, кожна лунка робочої смуги аналізується і автоматично фотографується аналізатором, результати інтерпретуються наступним чином:

Позитивна реакція - наявність аглютинації (інтенсивність оцінюється від 1+ - 4+)
Негативна реакція - відсутність аглютинації
Нерезультативна реакція - реакція +/- буде інтерпретована лікарем

Всі отримані зображення та результати перевіряються та підтверджуються лікарем 4 .

Межі та перешкоди

Помилково позитивні реакції (позитивний білковий контроль) 1

еритроцити в рулонах/рулонах (мієлома, макроглобулінемія Вальденстрема) - визначення відновлюється після промивання еритроцитів;
поліаглютинарна область;
гемолітичні анемії з гарячими аутоантитілами (наявність антитіл IgG на поверхні еритроцитів) - група відновлюється за допомогою реагенту, з якого видаляється альбумін, який містить анти-D-зв’язуючі речовини, здатні аглютинувати еритроцити у суспензії фізіологічного розчину (анти-D сольовий розчин).

гемолітична анемія новонародженого (блокування антигенних D-ділянок материнськими антитілами) 1;
особа зі слабким резус-D - можлива слабка та пізня аглютинація; ці випадки направляються до спеціалізованої служби, де слабке визначення D проводиться за допомогою непрямого антиглобулінового тесту з анти-D IgG (неповний поліклональний) 1; 3 .