Вплив рафінозної дієти та варених насіння бобових на деякі процеси в товстій кишці
Документи
Розшифровка впливу рафінозної дієти та варених насіння бобових на деякі процеси в товстій кишці.
The Food 31 (1987) 10,971-980
Інститут продуктів харчування та харчування (директор: проф. Д-р мед. В. Б. sZOSTAK), warSZaWa, ВР Польща
Вплив рафіозного раціону та варених насіння бобових на деякі процеси в товстій кишці щурів B. JAC
Досліджено зміни значення рН, активності ферментів та мікрофлори у вмісті товстої кишки щурів після згодовування рафінозного гнилу та зварених насіння бобових (соя, горох, квасоля). Як годування дієтою, що містить 12% рафінози, так і годування насінням легурозу призвели до зниження значення рН; Однак, коли застосовувались деякі інші дієти (наприклад, сухе молоко або сира перлова крупа), спостерігалося зниження значення рН. Визначну активність α-галактозидази після легумінозу було виявлено в товстій кишці щурів, але не в тонкій кишці. Джерелом активності галактозидази, ймовірно, є бактерії з вмістом товстої кишки (Lactobacillus sp., Enterococncr, Escherichia colq. Не вдається встановити взаємозв'язок між типом дієти та ізольованою мікрофлорою.
Передбачається, що сахариди сімейства рафінозових (рафіноза, стахіоза, вербаскоза) є одними з факторів, що знижують харчову цінність насіння бобових. Оскільки в травній системі не вистачає ферментів, які розщеплюють a-галактосахариди, вони не можуть бути засвоєні ні людиною, ні багатьма тваринами [1-31.
Коли щури протягом кількох днів їдять варене насіння сої, гороху та квасолі, у фекаліях тварин міститься кількість галактосахаридів, що навряд чи становить 2-5% від кількості, введеної під час дієти [4]. Розщеплення цих сахаридів може відбуватися в товстій кишці під впливом ферментів кишкової флори. Це створює багато газів, особливо водню та вуглекислого газу [наприклад Б. 5-71. Кількість водню, що виділяється під час «газоутворюючого процесу», що утворюється після прийому бобових, свідчить про позитивну кореляцію з кількістю введених у раціон галактосахаридів [8,9].
КРИСТОФАРО та ін. [Ло] звернув увагу на зміну рН у товстій кишці щура під час перетравлення соєвого шроту. Вони побачили це явище у зв'язку з утворенням газів після споживання борошна. Дієта на казеїні або м’ясі не призвела до утворення газів або зниження рН у товстій кишці. Автори виявили зниження рН у товстому кишечнику щурів, навіть коли 1-3% вербаскози вводили разом з дієтою, але вони не досліджували вплив інших галактосахаридів.
Мета роботи: Поглиблення знань з біохімічного та мікробіологічного
972 The Food 31 (1987) 10
Процеси, що відбуваються в організмі після споживання насіння бобових. Ця проблема є продовженням попередніх досліджень [4] і пов’язана із підвищеним інтересом, який виявляється в Польщі в останні роки до збільшення частки насіння бобових у харчуванні людей та тварин.
Дослідні тварини урид Плурі біологічних досліджень
Для досліджень були використані близько 6 місяців білі самці щурів Вістар (безплідних) вагою (350-10) г від нашої власної породи. У період між евакуацією щурів і початком експериментів тварин годували промислово виготовленим племінним снуром «Мурігран». Під час досліджень щурів утримували індивідуально в клітинах з метаболізмом; кожна тварина отримувала свій експериментальний сміття і воду (ad libitum ), де перевірялася кількість спожитої їжі та визначався приріст ваги Тривалість обстежень: 96 год. План обстеження наведено у таблиці.
Таблиця 1 Графік біологічних досліджень (кількість щурів, обстежених у дужках)
Тип дієти Тривалість обстеження [год]
Випускник селекції Мурігран (контрольний випускник I) PH (12) E (5) B (5)
Випускник селекції Мурігран + 4 "/, рафіноз Випускник Селекції Мурігран + 8"; Дієта для розведення рафінозів Мурігран + 12 дюймів, соя, зварена рафінозом
Крупа ячна (сира) Пластівці вівсяні Пшеничні булочки з борошном Варена картопля Сухе незбиране молоко Казеїнова крохмальна дієта без RaEnose PH (6) (контрольна дієта 11) E (3)
B (6) Казеїнова крохмальна дієта + 4? O Рафінозна казеїнова крохмальна дієта + 8 4; Рафінозна казеїнова крохмальна дієта + рафіноза 12? С
pH - визначення значення pH, E - визначення ферменту, B
РЗИНСЬКИЙ: Дієта від рафінозу 973
Перед хімічним, ферментативним та бактеріологічним визначенням тварин відсікали голову між 8 і 9 годиною ранку, а вміст товстої кишки кожного щура відбирали для себе. Крім того, рН вмісту кишечника визначали у 21 щура після введення зондом 300 мг рафінози (2 мл 15% розчину). Зміни рН вмісту товстої кишки випробовували у 160 із 200 випробуваних тварин. Додаткову активність ферментів визначали приблизно у 30 щурів, у яких визначали рН вмісту товстої кишки. Якщо слід було визначити активність ферменту в тонкому кишечнику, слизову оболонку видаляли з внутрішнього епітелію ділянки кишки, яка знаходилась приблизно на 20 см від товстої кишки. Додатково до визначення рН вмісту товстої кишки проводили бактеріологічні дослідження приблизно у 45 щурів.
Власне біологічним експериментам передували попередні експерименти приблизно на 40 інших щурах; Також було визначено, якою мірою тварини приймали дієту (включаючи чисту глюкозу, галактозу, сахарозу, лактозу та рафінозу).
Були призначені такі дієти: 1. Казеїнова крохмальна дієта (без рафінози) за даними HEDIN та ін. [Я використовував у попередніх розслідуваннях
був, була. [4] Він містив: 18% казеїну, 8% соєвої олії, 5% суміші мінеральних солей, 14% целюлози, 1% вітамінної суміші, 54 7; Крохмаль пшеничний. Ця дієта була однією з двох контрольних дієт.
2. Казеїнові крохмальні дієти з 4, 8 і 12% рафінози. У цих дієтах частина пшеничного крохмалю (4, 8 та 12%) була замінена рафінозою. Використовували D (+) - рафінозу (пентагідрат) від Sigma.
3. Промислово підготовлений селекційний сорт Мурігран (як контрольний сорт) 4. Племінний сорт Мурігран з 4, 8 та 12% штанами на плоту. 5. Варені насіння сої, гороху та квасолі, використовувані в попередніх дослідженнях-
рен [4]. Соя (сорт Аджа) містить, замочену, відварену та попередньо висушену (43,4% білка; 5,9 йо розчинний пиловодник). Горох, що міститься, замочується, відварюється та висушується (22,6 білка; 3,4% розчинних сахаридів). Біла квасоля, замочена, варена та попередньо висушена (23,8% білка; 3,3% розчинних сахаридів).
6. Для визначення рН вмісту товстої кишки тварин годували також іншими комерційними продуктами: ячмінною манною крупою, вівсяними пластівцями, пшеничним хлібом, вареною картоплею та сухим молоком.
МЕТОДИ I. РН вмісту кишечника вимірювали за допомогою РН-метра Радіометра (з двома склянками та двома
Каломелеві електроди) з точністю до 0,05 (середні значення з 3 визначень кожного, які проводили паралельно на одному кишковому вмісті однієї тварини).
2. Оскільки стандарт α-галактозидази нам був недоступний, фактичним дослідженням передували вступні методичні експерименти: вони включали виробництво неочищеного ферментного препарату з пивних дріжджів, визначення оптимальних умов для ферментативного гідролізу in vitro для рафінози та порівняння ефекту отриманого дріжджового препарату з ферментативним ефектом вмісту товстої кишки щура.
Зрештою, оптимальним для ферментативного гідролізу рафіну (in vitro) вважали: pH = 6,0 (буферна суміш лимонної кислоти: 9,5 мл 0,1 М лимонної кислоти (21,0 г/л) + 4,5 мл 0,1 М цитрату натрію C., H, 0, Na3 x 2H, O (29,41 г/л), доповнений H, O до 100 мл); концентрація ферменту, що відповідає 2 мл препарату (або 40 мг вмісту кишечника), концентрація сахаридів у зразку 0,2 г; температура випробування 37 "С протягом 2,5 годин.
За заявлених умов 30 мкл зразка було помічено на промокальному папері; це дало хорошу хроматографічну картину сахаридів, отриманих гідролізом рафінози, як із застосуванням дріжджового препарату, так і ферментів вмісту товстої кишки щура.
Сахариди ідентифікували за допомогою паперової хроматографії. Умови: Хребет розвитку Хропа, низхідний; Суміш розчинників: етилацетат - оцтова кислота - вода 3: 1: 3; Папір для ватману No3; Розробка 48 год при 18 "C; техніка занурення в розчин реагенту за ТРЕВЕЛЯНОМ [12].
Прийнято, що кількість галактози є значенням активності ор-галактозидази, яка під час ферментативного гідролізу рафінози опускається нижче 0. a. Умови стають вільними. Кількість сахаридів (продуктів розпаду рафінози) визначали опосередковано (як площа плями, спричинену Ex-
914 The Food 31 (1987) 10
Криву щільності визначали безпосередньо на хроматографічному папері за допомогою денситометричного методу 1131).
3. З технічних причин бактеріологічні дослідження обмежувались визначенням аеробних бактерій у товстій кишці тварин. Під час бактеріологічних досліджень тварини отримували різні пробні дієти (споживання