Аналіз білкової сполуки; Новини-Медичні

Застереження: Ця сторінка є автоматичним перекладом цієї сторінки спочатку англійською мовою. Зверніть увагу, оскільки переклади створюються машинно, не всі переклади будуть ідеальними. Цей веб-сайт та його веб-сторінки призначені для читання англійською мовою. Будь-який переклад цього веб-сайту та його веб-сторінок може бути неточним і неточним, повністю або частково. Цей переклад подано на практиці.

Білки, звані також поліпептидами, є полімерами амінокислот. Всього в білках існує двадцять мономерів, які називаються амінокислотами. Білки містяться в достатку і диференціюються між собою за кількістю, типом та розташуванням послідовних амінокислот, які складають основну основу поліпептидів.

З різних причин білок є головним будівельним елементом їжі, а також важливим джерелом для виробництва енергії. Білок зазвичай міститься в багатьох видах здорової їжі, таких як риба або м'ясо. Багато білків у їжі є ферментами, які можуть посилювати низку біохімічних реакцій. Наявність амінокислот у білках дуже важливо для здоров’я людей.

Методи, що беруть участь в аналізі білка

Різні білки мають різну молекулярну структуру, фізіохімічні властивості та харчові властивості. Три важливі етапи беруть участь в аналізі білка.

1. Поділ білка

Нижче наведено деякі класичні методи розділення білків:

З іншого боку, проте, білки різного розміру з однаковим значенням pi можуть бути покладені в одне і те ж місце. Часто для розділення білка або навіть для розділення пептидів використовують два хроматичні методи.

Методи (ВЕРХ) високоефективна рідинна хроматографія використовуються для відділення та очищення пептидів або білків на основі заряду, розміру або повної гідрофобності.
Тонкошарова хроматографія (ТШХ) також використовувався для розділення пептидів на основі їх споріднених властивостей.
Двосторонній гель-електрофорез (2D): Це потужна техніка, яка зазвичай використовується для аналізу складних зразків, але її не можна використовувати для кількох або конкретних білків, в інтересах характеристики всіх різновидів зразків білка. У цьому способі спочатку білок передається у вузькому контурі ізоелектричного гелю для націлювання. На основі ізоелектричної точки білок можна розділити.

Потім ізоелектричний гель, що позначає мішень, розташовується поверх гелю SDS-PAGE і діє в перпендикулярному напрямку. Білки функціонують як місця, і їхнє положення залежить від їх розміру та заряджених властивостей. Це забезпечує потужне розділення білків, використовуючи лише один із цих двох гелів, які є ізоелектричним або SDS-PAGE-фокусуванням.

2. Вестерн-блот

Імуноблот вважається найбільш загальною версією вестерн-блот і використовується в поєднанні з хроматографічними методами. Цей метод використовується для ідентифікації конкретних білків у певному шматочку тканинного екстракту або гомогенату. Зразок білка спочатку електрофорезували за допомогою сторінки SDS для поділу білка на основі молекулярної маси.

Після цього мокрий гель розміщують проти нітроцелюлозного листа і утримують у спеціальному електрофоретичному камери. Потім в гелі пропускається електричне поле, яке змушує білок виходити з гелю, а також на лист нітроцелюлози, в якому він сильно адсорбується. Далі лист нітроцелюлози з цим щільно зв’язаним білком може бути «зондований» або «промоканий» антитілами, особливо для націлювання на білок.

3. Ідентифікація білків

Якщо пляма або смужка білка були знайдені на гелі, наступним кроком є визначення їх молекулярної ідентичності. Два загальнодоступні для цього методу способи є наступними.

Деградація Едмана: Цей метод був розроблений Пер Едманом. Він використовував реагенти, звані ізотіоціанатами, для дії та реагування з N-кінцем пептиду або білка. За певних відповідних умов, самотня деградація Едмана "навколо" може розщепити амінокінцевий залишок з отриманням похідного амінокислоти на додаток до нового вільного N-кінця. Зрештою, амінокінець закінчується відокремленням від білка, не перериваючи зчеплення білків між іншими залишковими амінокислотами.
Мас-спектрометрія: Це найбільш підходящий метод для визначення точної молекулярної маси білка. Оскільки цей метод дуже чутливий і сприяє швидкій обробці кількох зразків, ця методика стала популярною для ідентифікації різних видів білків, які присутні в складній пробі. Отже, мас-спектрометрія може бути використана для визначення послідовності білка і, отже, ідентичності білка шляху, концептуально, як описано вище, на основі деградації Едмана.

Спостерігається BSC з Афсанех Хетрапал (кохані)