Білковий тег - Біологія

Коли Білковий день, Тег спорідненості або тег епітопу. День "маркування", "мітка" або "мітка") використовуються в біохімії для опису різних, переважно коротких, амінокислотних послідовностей, які можна використовувати для маркування білків. Позначені білки належать до злитих білків.

білкової мітки

Програми

Різні маркування по-різному підходять для різних цілей. Вони використовуються в процесі проектування білків у виробництві рекомбінантних білків або їх очищенні та виявленні за допомогою афінної хроматографії, аналізів випадіння, вестерн-блот, імуногістохімії, флуоресцентної мікроскопії або живої візуалізації.

Для генерування білкової мітки кодуюча послідовність ДНК білкової мітки вставляється в кодуючу послідовність ДНК злитого білка за стартовим кодоном або перед стоп-кодоном, зберігаючи при цьому рамку зчитування. Це створює N-кінцеву або C-кінцеву білкову мітку на білку під час трансляції.

Іноді білкову мітку потрібно видаляти з білка після очищення, наприклад Б. може бути досягнутий за допомогою ділянки розщеплення протеази або індуцибельного інтеіну. Підхід, заснований на протеолізі, використовує протеази з довшою послідовністю розпізнавання, які вирізаються лише на межі білкової мітки, наприклад Б. TEV-Протеаза. [1] Інтеїни можуть бути викликані тіолами або зниженням значення рН. [2] [3] [4]

Деякі теги мають інші функції, крім зв'язування антитіла або імунокон'югату, такі як:

  • Імуноаффінна хроматографічна очистка (все з відповідними антитілами)
  • Виявлення на основі антитіл (для всіх, наприклад, вестерн-блот, імуногістохімія або імунофлуоресценція)
  • Афінна хроматографія на основі спорідненості до іншого партнера по зв'язуванню (наприклад, мітка CaM, мітка CBP, мітка GST, мітка MBP)
  • Місця біотинілювання для очищення стрептавідином (наприклад, Avi-Tag, BCCP-Tag, Strep-Tag)
  • Комплексне утворення з двовалентними іонами нікелю та модифікованою нітрилотріоцтовою кислотою та зшитою агарозою або декстраном (наприклад, His-Tag)
  • Флуоресценція (наприклад, GFP або флеш-мітка)
  • Більш легке розділення в ВЕРХ завдяки збільшеній полярності (наприклад, His-Tag, FLAG-Tag, Xpress-Tag)
  • Цистеїни як реакційноздатні групи (наприклад, GST-мітка, оснастка, тіоредоксинова мітка)
  • Збільшення розчинності Інклюзійні органи, з більшими тегами (наприклад, тегом GST, тегом MBP)
  • Поліпшення згортання білка Інклюзійні органи або через неправильно зв’язані дисульфідні містки (наприклад, тіоредоксинова мітка, полі (NANP) мітка)
  • індуцибельні реакції опадів [5] [6]