ДНК вірусу Епштейна-Барра (EBV) у крові (кількісна) - Synevo
Загальна інформація
Вірус Епштейна-Барра (EBV) асоціюється з широким спектром доброякісних та злоякісних захворювань, включаючи: інфекційний мононуклеоз, лімфому, посттрансплантаційний лімфопроліферативний синдром та карциному носоглотки.
Визначення вірусного геному EBV-ДНК все частіше використовується в клінічних лабораторіях для діагностики та моніторингу захворювань, викликаних цією інфекцією 6 .
EBV-інфекції широко поширені, так що до 35-40 років 95% дорослих контактували з цим вірусом. Багато дітей заражаються інфекцією на ранніх стадіях життя, але в більшості випадків вона протікає безсимптомно або розвивається як легка інфекція верхніх дихальних шляхів 7. У підлітків та молодих людей первинна інфекція EBV може спричинити в 35-50% випадків інфекційний мононуклеоз - доброякісний лімфопроліферативний стан, що характеризується лихоманкою, фізичною астенією, фарингітом та поліаденопатією.
Первинні інфекції характеризуються підвищеною вірусемією, яка зменшується до невизначуваних значень, оскільки імунна система розпізнає та контролює інфекцію. Як і інші віруси герпесу, EBV може залишатися в організмі у сплячому стані роками (прихована інфекція). Періодичні реактивації супроводжуються тимчасовою віремією. У деяких пацієнтів пізніше розвиваються новоутворення, пов'язані з EBV-інфекцією, і вони мають дуже високий рівень віремії як визначальну ознаку. Таким чином, кількісне визначення EBV-ДНК не тільки виявляє активну інфекцію, але також є "маркером пухлини" для певних типів злоякісних процесів 2; 3; 4; 9 .
Пухлини, пов’язані з EBV, - це лімфопроліферативні синдроми після трансплантації, карцинома носоглотки, лімфоми, пов’язані з синдромом набутого імунодефіциту (СНІД), та лімфома Буркітта. .
Клітиною-мішенню для зараження EBV є лімфоцити групи В. Хворі з ослабленим імунітетом, які не мають анти-EBV-антитіл (частіше діти), мають ризик розвитку гострої інфекції EBV, яка може спричинити лімфопроліферативні синдроми; до них належать посттрансплантаційні лімфопроліферативні синдроми та лімфоми, пов’язані із синдромом набутого імунодефіциту (СНІД) 5. Частота посттрансплантаційних лімфопроліферативних синдромів коливається від 1% у пацієнтів з трансплантацією нирки до 9% у пацієнтів з трансплантацією серця/легенів і 12% у пацієнтів із трансплантацією підшлункової залози 7 .
Рекомендації щодо кількісного визначення EBV-ДНК
Серологічна діагностика рідко корисна для оцінки інфекції у пацієнтів із ослабленим імунітетом та для моніторингу EBV-індукованих пухлин, особливо після трансплантації. Оскільки культура вірусу недоступна для клінічної лабораторії, вважається, що EBV-ДНК може служити "маркером пухлини" при оцінці лімфопроліферативних захворювань та карциноми носоглотки 2. Рівень ДНК у крові (кількісно визначений за допомогою кількісної ПЛР) починає зростати за кілька місяців до початку лімфопроліферативної хвороби та зменшується після початку терапії. З цієї причини визначення EBV-ДНК у крові може бути прогностичним маркером у сприйнятливих пацієнтів, що дозволяє оцінити ризик розвитку лімфопроліферативних синдромів після трансплантації протягом наступних 3-4 місяців залежно від значень віремії. Крім того, серійні визначення EBV-ДНК корисні для оцінки відповіді на лікування пацієнтів з лімфопроліферативними захворюваннями 6 .
У носоглоткової карциноми віремія є високою на початку, зменшується під час променевої терапії, стає не виявленою після отримання ремісії, але зберігається при рецидивах 1; 4 .
Навчання пацієнта - не потрібно 6 .
Зібраний зразок - кров прийде 6 .
Збиральний контейнер - вакутейнер, що містить ЕДТА як антикоагулянт 6 .
Кількість зібраного - стільки, скільки дозволяє вакуум 6 .
Необхідна обробка після збору врожаю - тест ні буде центрифуговано 6 .
Причини відхилення доказів - старі, коагульовані, гемолізовані зразки; використання гепарину як антикоагулянта 6 .
Перевірка стійкості - зразки крові стабільні протягом 3 днів при 2-8 ° C. Зразки не заморожують! 6 .
Метод - ПЛР у реальному часі: реакція ланцюгової полімеризації з виявленням накопиченого ПЛР-продукту в реальному часі шляхом вимірювання випромінюваної флуоресценції 6 .
Межа виявлення - Межа виявлення робочого методу в діапазоні лінійності (вимірювана) становить 2415 МО/мл. Аналітична чутливість становить 1800 МО/мл. 1 МО/мл = 0,61 копії/мл 6 .
Інтерпретація результатів
Значення віремії, які поступово зростають при серійних визначеннях, свідчать про посттрансплантаційні лімфопроліферативні синдроми.
Пацієнти з ослабленим імунітетом, які мають реактивацію інфекції, але не розвивають лімфопроліферативні синдроми, зазвичай мають низький рівень віремії.
У деяких ситуаціях аналізатор може вказувати значення нижче межі виявлення методу. Про них повідомляється із зазначенням: «Результат може бути не відтворюваний через невелику кількість копій вірусного геному» 8 .
Межі та перешкоди
Серійні визначення EBV-ДНК набагато корисніші для оцінки ризику посттрансплантаційного лімфопроліферативного синдрому, ніж ізольована віремія 8 .
1. Чан AT, Lo YM, Zee B, Chan LY, Ma BB, Leung SF, Mo F, Lai M, Ho S, Huang DP, Johnson PJ. ДНК вірусу Епштейна-Барра плазми та залишкові захворювання після променевої терапії недиференційованої карциноми носоглотки. In J Natl Cancer Inst, 2002; 94: 1614-1619.
2. Девід Х. Персінг, Томас Ф. Сміт, Фред С. Теновер. ПЛР-виявлення та типізація вірусу Епштейна-Барра. В діагностичній молекулярній мікробіології. 1993. 344-355
3. Вентилятор H, Gulley ML. Вимірювання вірусного навантаження Епштейна-Барра як маркер захворювання, пов'язаного з EBV. У Mol Diagn. 2001; 6: 279-289.
4. Гуллі М.Л., Танг В. Лабораторні дослідження на вірусні захворювання Епштейна-Барра. У J Molec Diagn, 2008; 10: 279-292.
5. Гай Бойвін. Діагностика герпесвірусної інфекції центральної нервової системи. In Herpes 11. Supplement 2004; 2, 49-54.
6. Синевська лабораторія. Конкретні посилання на використовувану технологію роботи. 2015. Тип посилання: Каталог.
7. Людерер Ріанн та ін. ПЛР вірусу Епштейна-Барра в режимі реального часу для діагностики первинних інфекцій EBV та реактивації EB. В “Молекулярна діагностика”, 2005; 9 (4): 195-200.
8. Клініка Майо/Медичні лабораторії Майо Тестові каталоги та путівники. Виявлення ДНК вірусу Епштейна-Барра (EBV) методом ПЛР, кількісне, кров. www.mayomedicallaboratories.com. Тип посилання: Інтернет-спілкування.
9. Райан Дж. Л., Фан Н, Свіннен ЛЖ, Шихман С.А., Рааб-Трауб Н, Ковінгтон М., Елмор С., Гуллі М.Л. ДНК вірусу Епштейна-Барра (EBV) у плазмі не інкапсидується у пацієнтів із злоякісними пухлинами, пов’язаними з EBV. У Diagn Mol Pathol. 2004; 13: 61-68.