Файл архіву демонстраційного середовища в Інтернеті - Настанова 67548EWG щодо наближення законодавчих та
В.32. 1-й спосіб
В.32. 1.1. вступ
Див. Загальну вступну частину B
В.32. 1.2. Визначення
Див. Загальну вступну частину B
В.32. 1.3. Референтні речовини
В.32. 1.4. Принцип методу
Зазвичай досліджувану речовину вводять групам досліджуваних тварин 7 днів на тиждень протягом більшої частини життєвого циклу, використовуючи відповідний шлях введення, одна доза на групу. Під час та після опромінення досліджуваних тварин щодня спостерігають на предмет ознак інтоксикації, зокрема щодо розвитку пухлин
В.32. 1.5. Критерії якості
В.32. 1.6. Опис методу
Перед початком експерименту тварини акліматизуються протягом принаймні 5 днів в умовах експериментального утримання та годівлі. Перед початком експерименту здорових молодих тварин рандомізують і розподіляють до необхідної кількості лікувальних та контрольних груп.
Переважним експериментальним твариною є щур. Однак інші види тварин (гризуни або негризуни) можуть бути використані за результатами попередніх досліджень. Випробування слід проводити з молодими здоровими тваринами із звичайних лабораторних штамів тварин; введення досліджуваної речовини слід починати через відповідний період після відлучення від матері.
На початку експерименту мінливість маси тіла тварин не повинна бути більше ± 20% від середнього значення. Якщо визначення субхронічної пероральної токсичності передує довгостроковому дослідженню, в обох випадках слід використовувати однакові види тварин або штами досліджуваних тварин.
Кількість і стать
У гризунів для кожної дози та відповідної контрольної групи слід використовувати щонайменше 100 тварин (50 самок та 50 самців). Самки не повинні мати сміття, ні бути вагітними. Якщо в процесі експерименту потрібно вбивати тварин, загальна кількість тварин повинна бути збільшена на кількість тварин, яких потрібно вбити до кінця експерименту.
Дозування та частота впливу
Слід використовувати принаймні три групи доз та додаткову контрольну групу. Найвищу дозу слід вибирати таким чином, щоб виникали лише незначні симптоми інтоксикації, такі як уповільнене збільшення маси тіла (менше 10%). Однак на нормальну тривалість життя тварин не повинні впливати будь-які наслідки, крім наслідків, пов'язаних з пухлиною.
Найменша доза не повинна впливати на нормальний хід росту і розвитку чи тривалість життя тварин і не повинна викликати жодних ознак токсичної дії. Зазвичай вона повинна становити не менше 10 відсотків найвищої дози.
Середня доза становить від найвищої до найнижчої.
При виборі дозувань слід враховувати дані попередніх експериментів.
Вплив, як правило, щоденний. Якщо речовина вводять у питну воду або змішують із кормом, вода або корм повинні бути доступні тваринам постійно.
За винятком впливу досліджуваної речовини, контрольна група повинна відповідати експериментальним групам тварин у всіх відношеннях.
За особливих умов, наприклад, при використанні аерозолю в інгаляційних дослідженнях або емульгатора з невідомими біологічними ефектами при оральних дослідженнях токсичності, ми рекомендуємо використовувати додаткову необроблену контрольну групу, якій не можна вводити транспортний засіб.
В основному застосовують пероральне, шкірне та інгаляційне введення. Вибір способу введення залежить від фізичних та хімічних властивостей досліджуваної речовини та типу впливу людини.
Якщо досліджувана речовина всмоктується із шлунково-кишкового тракту і можливий вплив на організм людини пероральним шляхом, слід вибрати пероральний спосіб введення за умови відсутності протипоказань. Випробовувану речовину слід вводити тваринам у кормі, розчиненому у питній воді або в капсулах.
Щоденне введення протягом 7 днів тижня бажане, оскільки при п’ятиденному ритмі протягом періоду без введення можливе відновлення або зменшення симптомів інтоксикації, що може вплинути на результат та оцінку. Однак з практичних міркувань п'ятиденний цикл прийому вважається прийнятним.
Шкірний вплив шляхом нанесення на шкіру можна обрати для імітації одного з основних способів впливу на людину; він також служить моделлю для стимулювання шкірних змін.
Оскільки дослідження щодо застосування інгаляцій створюють більші технічні проблеми порівняно з іншими шляхами введення, тут слід дати більш детальні інструкції. Слід зазначити, що інтратрахеальна інстиляція є вагомою альтернативою в особливих випадках.
У разі тривалого впливу зазвичай за основу береться передбачуваний вплив людини, після чого тварини піддаються впливу 6 годин на день протягом 5 днів при рівномірній концентрації тестової камери (періодичне опромінення). Або передбачається можливий вплив навколишнього середовища, коли тварини піддаються дії досліджуваної речовини протягом 22 - 24 годин протягом 7 днів (безперервна експозиція), і одна година на день забезпечується одночасно для годівлі та обслуговування камери. В обох випадках тварини зазвичай зазнають фіксованої концентрації досліджуваної речовини. Основна різниця, яку слід враховувати між періодичним та постійним впливом, полягає в тому, що в першому випадку тварини можуть оговтатися від наслідків щоденного опромінення протягом 17-18-годинного періоду без опромінення та більш тривалого періоду вихідних.
Яка з двох форм впливу буде обрана, залежить від цілей досліджуваного дослідження та від стану людини, яку слід імітувати за допомогою тесту. Однак слід враховувати деякі технічні труднощі. Наприклад, користь від постійного впливу при імітації умов навколишнього середовища, ймовірно, компенсується необхідністю забезпечити тварин водою та кормами, а також потребою в більш складних (і більш надійних) аерозольних та парових технологіях виробництва та контролю.
Для експериментів на тваринах слід використовувати інгаляційну систему, яка забезпечує динамічну швидкість повітря із швидкістю обміну повітря щонайменше дванадцять разів на годину, щоб забезпечити адекватний вміст кисню та рівномірний розподіл досліджуваної речовини в атмосфері. Тестові камери для контролю, а також для досліджуваних тварин повинні бути однаковими за конструкцією та конструкцією, щоб створити порівнянні умови в усіх відношеннях - за винятком впливу досліджуваної речовини.
У тест-камері зазвичай створюється невеликий негативний тиск, щоб запобігти виходу досліджуваної речовини з камери. Тестові камери повинні забезпечувати якнайменше стискання досліджуваних тварин. Для забезпечення стабільності атмосфери в інгаляційній камері загальний об'єм досліджуваних тварин не повинен перевищувати 5% від об'єму камери.
Необхідно провести такі вимірювання або контроль:
Під час щоденного спостереження за тваринами особливу увагу слід приділяти змінам шкіри, шерсті, очей, слизових оболонок, дихальної та кровоносної систем, вегетативної та центральної нервової систем, а також соматомоторних та поведінкових моделей.
Необхідно регулярне спостереження за тваринами, щоб забезпечити, наскільки це можливо, кількість тварин не зменшується під час дослідження через канібалізм, аутоліз тканин або помилки при переміщенні тварин. Загиблих тварин слід виділяти, вбивати та розтинати.
Для кожної тварини слід реєструвати клінічні симптоми та летальність. За розвитком пухлин слід стежити з особливою увагою, і слід реєструвати час утворення, локалізацію, ступінь, появу та прогресування кожної чітко видимої або пальпується пухлини.
Споживання їжі (та споживання води, якщо досліджувану речовину вводять разом з питною водою), слід визначати щотижня протягом перших 13 тижнів дослідження, а потім з інтервалом у три місяці, якщо стан здоров'я тварин або маса тіла не вимагають інших заходів.
Масу тіла кожної тварини слід реєструвати один раз на тиждень протягом перших тринадцяти тижнів тесту і не рідше одного разу на чотири тижні після цього.
Якщо спостереження за тваринами свідчить про погіршення самопочуття в процесі дослідження, необхідно взяти диференціальний аналіз крові хворих тварин.
Через 12 місяців, 18 місяців і до жертвоприношення з усіх тварин готують мазок крові. Диференціальний аналіз крові беруть у тварин групи найвищої дози та контрольної групи. Якщо результати цього, але особливо останнього аналізу, проведеного перед вбивством, або дані патологічних досліджень свідчать про це, слід також зробити диференціальний аналіз крові для наступних нижчих груп (груп).
Повна аутопсія проводиться усім тваринам, включаючи тих, які загинули під час експерименту або були вбиті з причин хвороби. Усі впізнавані пухлини або тканини з підозрілими змінами повинні бути збережені.
Наступні органи та тканини слід зберігати у відповідному середовищі для подальшого гістопатологічного дослідження: всі помітні зміни, мозок - включаючи ділянки тканин довгастого мозку/мозку, кори мозочка та мозку, гіпофіза, щитовидної/паращитовидної залози, тканини тимусу, трахеї та легенів, серця, Аорта, слинні залози, печінка, селезінка, нирки, наднирники, підшлункова залоза, статеві залози, матка, інші статеві органи, шкіра, стравохід, шлунок, дванадцятипала кишка, тонка кишка, клубова кишка, сліпа кишка, товста кишка, пряма кишка, сечовий міхур, представницькі лімфатичні вузли, жіноча молочна залоза, м’язи стегна, Нерви периферичної системи, грудина з кістковим мозком, стегнова кістка - включаючи суглобову поверхню, хребет, шию, грудну клітку та поперекову область, очі.
Закапування легенів та сечового міхура фіксуючим розчином представляє оптимальне збереження цих тканин; В інгаляційних дослідженнях такий спосіб фіксації легенів є необхідною умовою оптимального гістопатологічного дослідження. При проведенні інгаляційних досліджень необхідно зберегти весь дихальний тракт, включаючи ніс, глотку та гортань.
- Органи всіх тварин, які гинуть або гинуть під час випробування, а також усіх тварин контрольних груп та груп із високими дозами піддають повному гістопатологічному дослідженню;
- всі пухлини або підозрілі зміни у всіх групах;
- Якщо існує суттєва різниця у частоті новоутворень змін між групою, що отримує найвищу дозу, та контрольною групою, відповідний орган або тканину також слід піддати гістопатологічному дослідженню в інших групах дози;
- якщо рівень виживання у групі з найвищою дозою значно нижчий, ніж у групі контролю, слід повністю обстежити наступну групу з нижчою дозою;
- Якщо токсичні ефекти можуть бути продемонстровані в групі з найвищою дозою, яка може вплинути на розвиток пухлини, слід повністю дослідити наступну групу з нижчою дозою.
В.32. 2. Дані
Дані узагальнюються у табличній формі. Тут повинна бути вказана наступна інформація для кожної досліджуваної групи: кількість тварин на початку тесту, кількість тварин з пухлинами, виявленими під час тесту, час виявлення та кількість тварин, у яких пухлина була виявлена після розтину. Результати слід оцінювати за допомогою відповідного статистичного методу. Для цього може бути використаний визнаний статистичний метод.
В.32. 3. Підсумковий звіт
В.32. 3.1. доповідь
Якщо можливо, у звіті про випробування має бути зазначено наступне:
- Види тварин, штам тварин, походження. Житлові умови, годування.
- Умови випробування:
Опис експозиційного апарату
включаючи конструкцію, тип, розміри, джерело повітря, систему для вироблення частинок та аерозолю, систему кондиціонування, обробку відпрацьованого повітря та тип розміщення тварин у випробувальній камері під час виконання випробувань. Повинні бути описані прилади для вимірювання температури, вологості та, якщо це можливо, стабільності концентрації аерозолю або розміру частинок.
Ці дані повинні бути зведені у табличній формі із зазначенням середніх значень та врахуванням коливань (наприклад, стандартне відхилення). Вони повинні містити наступну інформацію:
В.32. 3.2. інтерпретація
Див. Загальну вступну частину B; G
В.32. 4. Література
Див. Загальну вступну частину B; H
середовище-Інтернет - демо-версія
Всі повна Тексти в поточній версії в річній підписці
Плата за користування: 90.- € нетто (базова ліцензія)
(в даний час приблизно 7200 назв див. огляд - відсутність поділу на предметні області)
Ціни та замовлення
Код доступу буде надіслано в короткі терміни