Філіп П’єр Маркверт - Завантажити PDF безкоштовно
З Інституту вірусології Університету Генріха Гейне, Дюссельдорф Директор: ун-т-проф. Лікар. мед. Йорг Тімм Серологічне та молекулярне виявлення інфекцій поліомавірусами людини JC та BK у пацієнтів з прогресуючою мультифокальною лейкоенцефалопатією (ПМЛ) для здобуття наукового ступеня доктора медицини на медичному факультеті Університету Генріха Гейне в Дюссельдорфі, представленого Філіпом П'єром Марквертом 2018
Друкується як інавгураційна дисертація з дозволу медичного факультету Дюссельдорфського університету імені Генріха Гейне. за підписом: декан: ун-т-проф. Лікар. мед. Микола Клёкер Перший рецензент: проф. мед. Ортвін Адамс Другий рецензент: PD Dr. мед. Філіп Альбрехт
Частини цієї роботи були опубліковані: Індекс антитіл CSF JCV для діагностики ПМЛ, пов’язаного з наталізумабом. Warnke C, von Geldern G, Markwerth P, Dehmel T, Hoepner R, Gold R, Pawlita M, Kümpfel T, Mäurer M, Stangel M, Wegner F, Hohlfeld R, Straeten V, Limmroth V, Weber T, Hermsen D, Kleinschnitz C, Hartung HP, Wattjes MP, Svenningson A, Major E, Olsson T, Kieseier BC, Adams O. Annals of neurology 2014, груд. 76 (6): 792-801.
Список абревіатур 5HT2A 5-гідрокситриптаміновий рецептор 2A AI JCV AKT ANOVA ATP AU BKV BSA CCD CSF/сироватка антитіло-коефіцієнт JCV протеїнкіназа B Аналіз дисперсії Аденозин 5 трифосфат довільна одиниця BK Вірус бичачої сироватки альбумін з зарядом зв’язаний пристрій D DMSO Дезоксид Час вимірювання дезоксирибонуклеїнової кислоти DX1, час вимірювання часу вимірювання 2 DX2 3 E.coli, кишкової палички ЕДТА етилендіамінтетраоцтової кислоти ІФА ферментативна імуноферментний аналіз ELISA, імуноферментний аналіз FAM 6-карбокси-флуоресцеїн ВАРТ високоактивної антиретровірусної G lg-IgM-IgM-immunopropyl управління β-імуноглобуліну IgM-IgM-IgM-immunopropyl β-імуно-контроль IgM-IgM-immunopropyl β-імуноглобуліну G lg-імуноглобуліну G-β-імуно-контроль контроль IgM-immunopropyl IgM-IgM-immunopropyl терапії D-тіогалактопіранозид JCV JC вірус kbp кілобази пар KI довірчий інтервал LB лізогенний бульйон LPOS низький позитивний контроль MAPK мітоген-активована протеїнкіназа mirna мікро РНК мл мілілітри MPOS середовище управління mrna messenger РНК МРТ магнітно-резонансна томографія MRZ кір-краснуха-зостер реакція Середнє значення розсіяного склерозу РС середні значення NAT наталізумаб II
NCCR некодуючий контрольний регіон NEM N-этилмалеимид NF-1/X ядерний фактор-1 клас X NLS сигнал локалізації ядер нм нанометр OD X оптична щільність при x нм PBS фосфатно забуференний сольовий розчин pmal розчинений антиген PML прогресивна мультифокальна лейкоенцефалопатія PP2A білок фосфатаза 2A prb ретинобласта qpcr кількісна полімеразна ланцюгова реакція РНК рибонуклеїнова кислота SAPK активована стресом протеїнкіназа SEM стандартна помилка S-фаза фаза синтезу SMPB сукцинімідил 4- [п-алеймідофеніл] -бутират SV-40 вірус маймуна 40 TAMRA тетраметил-родамін T-антиген пухлина антиген U одиниці білок VP-1 вірус VP-1 вірус VP-1 Білок вірусу VP-3 3 ЦНС ЦНС III
Зміст 1 Вступ 1 1.1 Поліомавіруси. 1 1.1.1 Класифікація. 1 1.1.2 Морфологія. 2 1.2 Вірус JC. 4 1.2.1 Історія. 4 1.2.2 Морфологія та вірусні білки. 4 1.2.3 Геном. 6 1.2.4 Цикл реплікації. 6 1.2.5 Типи та підтипи. 8 1.2.6 Патогенез. 8 1.2.7 Епідеміологія. 10 1.2.8 Терапія. 10 1.3 Розсіяний склероз. 11 1.4 Наталізумаб. 12 1.5 Випуск. 13 2 Матеріал та методи 14 2.1 Матеріал пацієнта. 14 2.2 Рекомбінантний ІФА JCV-BKV-IgG. 15 2.2.1 Принцип. 15 2.2.2 Отримання рекомбінантного білка VP-1. 16 2.2.3 ІФА анти-JCV/Anti-BKV IgG. 18 2.2.4 Рекомбінантний JCV IgG, підклас ELISA. 21 2.2.5 Вимірювання спорідненості за допомогою рекомбінантного ІФА JCV IgG. 22 2.3 реакція MRZ/індекс Рейбера. 24 2.4 Визначення білка Бредфорда. 25 2.5 Кількісна ПЛР у реальному часі. 26 3 Оцінка 28 3.1 ІФА. 28 3.1.1 Анти-JCV IgG. 28 3.1.2 Анти-BKV IgG. 31 3.1.3 Коефіцієнт СЖК/сироватки. 33 3.1.4 Підкласи анти-JCV IgG. 35 3.1.5 Анти-JCV та анти-BKV IgM. 36 3.1.6 Спорідненість до IgG проти JCV. 40 3.2 Результати ПЛР. 41 3.2.1 Результати груп порівняння. 41 3.2.2 ДНК JCV. 43 3.2.3 BKV-ДНК. 44 IV
Зміст 4 Обговорення 45 4.1 JCV IgG. 45 4.2 BKV IgG. 47 4.3 коефіцієнт СМЖ/сироватки. 48 4.4 Підкласи JCV IgG. 49 4,5 JCV IgM. 50 4,6 BKV IgM. 51 4.7 Спорідненість до IgG проти JCV. 52 4.8 ПЛР-JCV. 53 4.9 ПЛР-BKV. 54 5 Висновок 55 6 Бібліографія 56 V
1 Вступ Рис. 1.1: Класифікація сімейства Polyomaviridae; Рис. Модифіковано з Дослідницької групи Polyomaviridae Міжнародного комітету з таксономії вірусів. 3
1 Вступ Розсіяний склероз (РС) з гуманізованим анти-альфа-4-інтегриновим антитілом наталізумабом (Tysabri) також може виникнути як серйозний побічний ефект ПМЛ. 12,22,50 Рис. 1.4: МРТ-зображення пацієнта з ПМЛ. Гіперінтенсивні мозкові вогнища показані в правій півкулі скронево-потиличної (червоні стрілки). Ілюстрацію люб’язно надав Priv.-Doz. Лікар. мед. Майкл Малл, Клініка діагностичної та інтервенційної нейрорадіології, Університетська клініка Аахена. 9