Група крові OAB - Синево

Повідомтеţii загальний

У людини виявлено 26 систем груп крові з 228 антигенами; система груп крові складається з одного або декількох антигенів, які регулюються одним геном або комплексом двох або більше тісно пов'язаних генів. Були також визначені інші антигени, які не були віднесені до встановлених систем. Антигени еритроцитів можуть бути білками, глікопротеїнами або гліколіпідами. Більшість із них синтезуються еритроцитами, проте деякі антигени, такі як ті, що належать до системи Льюїса, адсорбуються з плазми на мембрані еритроцитів. Деякі антигени специфічні для еритроцитів, а інші знаходяться в інших клітинах організму. Знання груп крові є важливим для трансфузійної терапії. Таким чином, особи, які не мають певних еритроцитарних антигенів, можуть виробляти аллоантитіла під впливом крові, що містить ці антигени, при переливанні крові або під час вагітності. Антитіла, які взаємодіють з антигенами еритроцитів, викликають негайні або уповільнені реакції гемолітичного переливання крові та гемолітичну хворобу новонародженого 4 .

Система груп крові АВО є найважливішою системою груп крові, оскільки: коли антигени не експресуються на поверхні еритроцитів, відповідні антитіла завжди присутні в плазмі, стимули для вироблення антитіл представлені різними факторами навколишнього середовища, такими як бактерії (наприклад, кишкова паличка), які експресують на поверхні структури майже ідентичні вуглеводам АВО; утворені антитіла являють собою суміш IgM (переважно) та IgG, активні при 37ºC і здатні активувати комплемент, а висока щільність антигенних ділянок на мембрані еритроцитів дозволяє зв’язувати велику кількість антитіл, що ведуть у разі несумісного переливання крові в систему АВО., при гострих реакціях гемолітичного переливання 2; 4 .

Усі імунокомпетентні особи виробляють природні антитіла (ізоаглютиніни або ізогемолізини) до відсутніх антигенів групи ABO (H). Зазвичай анти-А та анти-В можна виявити через 3-6 місяців після народження, а у віці 5 років титр антитіл досягає свого максимуму і зберігається протягом усього дорослого віку. Титр антитіл IgM може поступово зменшуватися з похилим віком. Анти-А та анти-В антитіла також є у тих, хто має слабкі варіанти А або В. У новонароджених дітей зазвичай немає значної кількості анти-А та анти-В у плазмі, за винятком тих, що народилися у аллоімунізованих матерів, у яких можуть бути антитіла IgG від матері, які перетнули плаценту. АНО антитіла не є основною причиною гемолітичної хвороби у новонародженого через пригнічення антитіл розчинними речовинами А та/або В, присутніми в крові, а також антигенами А або В, присутніми в клітинах, крім еритроцитів; також спорідненість зв'язування антитіл з молекулами цукру слабкіша, ніж спорідненість антитіл з молекулами білка, наприклад антигеном D 4. Гемоліз більш вірогідний, якщо мати - група O, а дитина - група A 2 .

Рекомендації щодо визначення групи крові АВО 2

перед переливанням;
перед інвазивною чи хірургічною процедурою, потенційно пов'язаною з ускладненнями кровотечі, які можуть вимагати переливання;
передпологовий та післяпологовий імуногематологічний моніторинг матері та дитини;
донорам крові;
щодо сумісності груп АВО при трансплантації нирок та серця.

Навчання пацієнта - попередня підготовка не потрібна; корисна інформація про інфузійне лікування макромолекулярними розчинами, проведене до визначення, переливання крові за останні 120 днів, інфекційні захворювання з грамнегативними мікробами з/без сепсису, злоякісні захворювання (карцинома, лімфома, мієлома) 3 .

Зібраний зразок - а) капілярна кров з пульпи пальця; б) венозна кров 3 .

Збиральний контейнер - б) вакутейнер без добавок або активуючого гелю (червоний або безбарвний ковпачок); для автоматичного методу: 4 мл вакуунера, що містить ЕДТА (темно-фіолетова кришка) 3 .

Кількість зібраного - б) наскільки дозволяє вакуум 3 .

Причини відхилення доказів - сильно гемолізований зразок 3 .

Стабільність зразка - тест проводиться негайно, якщо це неможливо, зразок витримують протягом 48 годин при 2-8 ° C; для автоматичного методу зразок крові має стабільність 7 днів при 2-8 ° C 3 .

Необхідна обробка після збору врожаю - після повної коагуляції при кімнатній температурі сироватка і згусток видаляються. З решти еритроцитів готують 10% суспензію у власній плазмі або у фізіологічному розчині 1; 3. Для методу карткової аглютинації готують суспензію 5% еритроцитів у спеціальному суспензійному середовищі. Для автоматичного методу зразок крові центрифугують для отримання плазми і вводять в аналізатор (плазма залишається над еритроцитами) 3 .

Методи визначення - Лабораторії Синево виконують:

a. Прямий/глобулярний метод (Бет-Вінсент) для визначення групи крові АВО з використанням анти-А, анти-В та анти-АВ сироватки, з наступними варіантами:

- гемаглютинація на тарілці 3. Використовуються два засоби контролю: контроль АВ (еритроцити пацієнта з сироваткою АВ) та автоматичний контроль (еритроцити та власна сироватка) 1 .

- аглютинація та гель-фільтрація на картках з мікротрубками, що містять гель, просочений специфічним реагентом еритроцитарного антигену (мишачий або моноклональний антитіла людини) - прямий тест групи АВО та визначення Ag RH1 (D) та Ag RH 1,2,3 (DCE).

Для методу картональної аглютинації позитивна реакція підтверджується лише в тому випадку, якщо контрольна мікропробірка є негативною. Позитивна реакція оцінюється в залежності від розміру аглютинатів від + до ++++.

У кожному дослідженні зразків використовують відому групу та контрольну кров Rh3 .

b. автоматичний метод гемаглютинації на пластинах свердловин (в Центральній лабораторії Синево)

Стільниці (Erytype S) містять 12 тест-смужок з 8 лунками в кожній (1 смужка = повний тест ABO та резус-фактор).

Групу крові визначатимуть як прямим глобулярним методом (Бет - Вінсент), який виділяє антигени еритроцитів за допомогою тест-сироватки (сухі моноклональні сироватки, які вистилають частину реакційних ям), так і непрямим плазмовим методом (Симонін Вінсент). ), де висвітлюються антитіла в плазмі, проаналізовані за допомогою тестових еритроцитів, аглютинація протікає в незастелених лунках робочої смужки. Свердловина на смузі включає негативний контроль реакції.

Реакція аглютинації еритроцитів у прямому методі посилюється використанням бромелаїну (протеолітичного ферменту, який розщеплює поліпептидні ланцюги на поверхні еритроцитів, зменшуючи тим самим негативне навантаження клітин; отже, збільшить силу притягання між еритроцитами у присутності відповідного антитіла).

На завершальному етапі кожна лунка робочої смуги автоматично оцінюється та фотографується аналізатором, результати інтерпретуються наступним чином:

Позитивна реакція - наявність аглютинації (інтенсивність оцінюється від 1+ - 4+)
Негативна реакція - відсутність аглютинації
Нерезультативна реакція - реакція +/- буде інтерпретована лікарем

Всі отримані зображення та результати перевіряє та підтверджує лікар 3 .

Межі та перешкоди

Результат визначення групи крові слід прочитати двом людям і врешті підтвердити на другому зразку крові 1; .

Помилки читання через технічні помилки:

- брудний скляний посуд; бактеріальне забруднення;

- наявність мікротегів (помилкова аглютинація);

- не спостерігається: пропорції еритроцитів/сироватки, порядок крапельного аналізу крові (суперечлива аглютинація), час читання - пізнє читання: сухі краї (помилкова аглютинація), раннє читання (відсутність аглютинації або погана аглютинація).

Помилки через еритроцити

а) Наявність рулонів (псевдоаглютинація): використання макромолекулярних розчинів (декстран, ГЕС), порушення згортання крові, неповністю коагульовані зразки крові, гіперфібриногенемія, продукти розпаду фібрину, фібринолітичні агенти, диспротеїнемія, парапротеїнемія, крезогулін, ліки (високі дози гепарину, протаміну сульфату), ревматоїдні фактори, підвищений холестерин, білірубін, лейкоцитоз, лейкоцитарні ферменти 2. Контроль АВ позитивний; ерадикація еритроцитів дозволяє правильно виконувати сферичну пробу 1 .

Наявність холодних агглютинінів (світло автомобіля позитивне). Зразок крові та реактиви попередньо інкубують при температурі 37 ° C, а тест проводять гарячим 2 .
Червоні кров’яні клітини, покриті алоантитілами: новонароджене від несумісної вагітності (в системі Rh, ABO), пацієнт, перелитий несумісною кров’ю.
Визначення групи крові на крові, зібраній з пуповини: желатин Wharton, високомолекулярна речовина, яка оточує еритроцити, надає вигляду псевдоаглютинатів. Для його видалення необхідно промити еритроцити принаймні 6 разів, перш ніж визначити 1 .
Наявність лікарських імунних комплексів.

При септицемії з грамнегативними паличками криптоантигени (Т) піддаються ферментативній дії бактеріальних агентів, розпізнаних антитілами (анти-Т), присутніми в більшості сироватки 2 людини. Контроль AB позитивний 1 .

Відсутні або слабкі аглютинації або подвійний вигляд популяції: аглютинація не тотальна, при наявності вільних еритроцитів (аглютинати з’являються на рожевому фоні) 1; 2:

стара кров;
слабкі антигени: новонароджені, недоношені;
слабкі підгрупи А або В;
загасання антигену (при лейкозах, лімфомах, хворобі Ходжкіна);
пацієнт групи А або групи В, перелитий крові групи О, крововилив матері та плода;
наявність у плазмі великої кількості речовини А або В (рак шлунка, підшлункової залози), який нейтралізує досліджувані антитіла (для їх видалення необхідно промити еритроцити);
наявність химери або мозаїки (виключно, наприклад, після трансплантації кісткового мозку).