Кафедра фізіології харчування - Завантажити PDF безкоштовно
Кафедра харчової фізіології Вплив ізофлавоноїдів геністеїну та дайдзеїну на протеоми ендотеліальних клітин людини in vitro та одноядерних клітин крові in vivo в контексті їх постульованої антиатерогенної активності Отримання ступеня доктора наук, затвердженої дисертацією. Голова: ун-т-проф. Лікар. вип. нац. Майкл Шеманн Експерт дисертації: 1. ун-т проф. Лікар. вип. нац. Ханнелор Даніель 2-й ун-т-проф. Лікар. вип. нац. Джеральд Рімбах, Christian-Albrechts-Universität zu Kiel Дисертація була подана до Мюнхенського технічного університету 6 квітня 2006 р. І прийнята Науковим центром продовольства, землекористування та навколишнього середовища Вайхенштефана 19 червня 2006 р.
Зміст iii 10.6 Використовувані грунтовки. 142 10.7 Хімічні речовини та витратні матеріали. 143 10.8 Пристрої. 146 10.9 Буфери та рішення. 147 10.10 Подяки. 152 10.11 Біографія. 153
1 Вступ 5 Процес, регульований оксистеролами та цитокінами, визначально визначає стабільність нальоту (Lusis AJ, 2000). Рис. 1.2 Схематичне зображення ранніх фаз атерогенезу. Ендотеліальний шар пошкоджений: ЛПНЩ проникає в інтиму, де окисно змінюється. Моноцити потрапляють у стінку судини і поглинають окислені частинки ЛПНЩ, завдяки чому утворюються пінні клітини (Стипанук М.Х., 2000). ММ-ЛПНЩ, злегка окислений ЛПНЩ; ox-ldl, окислений LDL; M-CSF, стимулюючий фактор колонії макрофагів; MCP-1, хемотаксичний білок моноцитів.
1 Вступ 7 Рис. 1.4 Метаболізм гомоцистеїну (модифікований за Biesalski HK & Grimm P., 2004) Генетична основа гіпергомоцистеїнемії Гіпергомоцистеїнемія (HHcy), яка спричинена дефектом генетичного ферменту або через недостатній запас одного або декількох вітамінів, що беруть участь в метаболізмі гомоцистеїну. є важливим незалежним фактором ризику розвитку атеросклерозу (Clarke R et al., 1991; McCully KS, 1996; Selhub J, 1999; Ueland PM et al., 2000). HHcy можна розділити на три різні ступені тяжкості. Легка форма, яка вражає 5-7% населення, має рівень плазми вище 10 мкмоль/л Hcy. Рівень плазми у пацієнтів з помірним рівнем HHcy становить понад 30 мкмоль/л, а у важкому варіанті - понад 100 мкмоль/л (Brattstrom L & Wilcken DEL, 2000). Навіть при помірному рівні HHcy ризик розвитку атеросклерозу підвищується (Lawrence de Koning AB et al., 2003), причому зв'язок із смертністю є найвищим при рівні плазми вище 15 мкмоль/л (Nygard O et al., 1997). HHcy може бути обумовлений різними генетичними дефектами, які впливають на ферменти цистатіонін-β-синтазу, метилентетрагідрофолатредуктазу (MTHFR) та метіонінсинтазу (Medina MA & Amores-Sánchez MI, 2000). Актуальність цих ферментних дефектів пояснюється в наступних розділах. Найбільш поширеною причиною важкого ступеня HHcy або гомоцистинурії є аутосомно-рецесивний, гомозиготний дефіцит цистатіонін-β-синтази. Описано понад 60 різних мутацій гена з обміном
1 Вступ 13 Фосфогліцериди знижуються. Ефіри холестерину, утворені LCAT, осідають усередині ЛПВЩ. Таким чином, холестерин, що походить з мембран позапечінкової тканини, може, таким чином, зв'язуватися з поверхнею ЛПВЩ, що призводить до утворення фракції ЛПВЩ 3. Реакції, що каталізуються LCAT, і поглинання речовин (фосфоліпідів, аполіпопротеїнів С і Е), які виділяються під час розпаду ЛПНЩ, призводять до ЛПВЩ 2 і ЛПВЩ 1, які остаточно розщеплюються в печінці (див. Рис. 1.5) (Löffler G & Petrides PE, 2003). Рис. 1.5 Обмін ліпідів після їжі. Обмін ліпідів після їжі поділяється на екзогенний, ендогенний та зворотний перенесення ліпідів. (CETP, білок, що переносить ефір холестерину) (Deetjen et al., 2004).
1 Вступ 18 Агоністи BAX і BCL-X базуються на вивільненні проапоптотичних факторів, особливо цитохрому С, з мітохондрій. Через зв'язування з фактором-1 і каспазою-9, пов'язаним з апоптозом, цитохром С утворює так звану апоптосому, яка активує каспазу-3 і таким чином приводить в рух апоптоз. Концентрація антиапоптотичних представників сімейства Bcl-2, які інгібують вивільнення цитохрому С з мітохондрій, знижується за допомогою ox-ldl (Metzler B et al., 2000; Napoli C et al., 2000). Крім того, ox-ldl збільшує експресію цитокінів, таких як IL-1, TNF та PDGF, які, в свою чергу, активують SAPK/JNK (Metzler B et al., 2000). Через процес, у якому беруть участь лізосоми та лізосомальні протеази, ox-ldl може також викликати апоптоз відносно незалежно від каспаз (Salvayre R et al. 2002).
4 Результати 38 Рис. 4.2 Репрезентативна 2D-PAGE білків з HUVEC, які культивували з 5 мкг/мл ox-ldl у відсутність та присутність 2,5 мкм або 25 мкм геністеїну. Номери спотів ідентичні даним у таблиці 10.2. Дослідження впливу ізофлавоноїдної суміші геністеїну та дайдзеїну, а також екстракту S40cl на протеоми HUVEC неможливо було провести, оскільки дуже велика кількість HUVEC повинна зберігатися в культурі для отримання достатньої кількості білка для аналізу протеомів, що з технічних та фінансових причин не вдалося реалізувати.