Матричні металопротеїнази та їх інгібітори в ході експериментального хронічного

Матричні металопротеїнази та їх інгібітори в процесі експериментального хронічного панкреатиту.

матричні

Матричні металопротеїнази та їх інгібітори в процесі експериментального хронічного панкреатиту. urn: nbn: de: gbv: 28-dys2010-0068-5

5 тез 48 6 Список скорочень 51 7 Література 52 8 Подяка 66 9 Декларація незалежності 67 3

Рисунок 1: Функції клітин під впливом протеолітично активних ММР. (A) Деградація ECM та міграція клітин. (B) індукція проліферації або апоптозу. (C) Модуляція медіаторів та їх рецепторів. (D) Активація подальших протеаз шляхом розщеплення їх проферментів або їх інгібітора (Vu and Werb, 2000). 3 Матричні металопротеїнази - це група з понад 20 відомих цинк-залежних протеаз. Вони здатні розщеплювати основні компоненти позаклітинного матриксу, такі як колаген, ламінін, фібронектин або еластин. Завдяки своїй структурі з різних доменів, ММР можна розділити на чотири групи: матрилізин, ММР з гемопексиноподібними доменами, ММП з трансмембранними доменами, ММП з фібронектиноподібними доменами. Всі ММП мають область, необхідну для секреції, знаходяться в прихованому стані і мають каталітичну область, яка містить активний сайт зв'язування цинку. 53 Однак класифікація MMP базується на поділі на сім'ї, які узагальнюють субстрати MMP (табл. 1). 52 13

Це також стосується проферментів. Перекриття конкретності пояснюється 50% гомологією послідовностей TIMP-1 та TIMP-2. 58,61 Отримана активність MMP залежить від співвідношення MMP і TIMP у тканині. Зміни в цій рівновазі призводять або до суттєво підвищеної активності протеолізу ММР 59, або до посилення фіброгенезу. 60 Назва TIMP-1 TIMP-2 TIMP-3 TIMP-4 Функція інгібує Pro-MMP-9 та інші активні MMP Інгібує Pro-MMP-2 та активний MMP-2 Не визначено Не визначено Таблиця 2: Інгібітори тканин матричних металопротеїназ ( TIMPs) та їх функції Рисунок 2: Каскад активації матриксних металопротеїназ катепсином та плазміном. Автоактивація Pro MMP активними MMP і MT MMP 1. Пригнічення деградації матриці TIMP. (Evans et al. 1999) 61 15

Довжина амплікону TIMP 2: 453 bp TIMP 2 антисмислова CAA CAG GCG TTT TGC AAT GCA GA довжина: 23 bp CCC ATT GAT GCT CTT CTC TGT GA довжина 23 bp вектори pqr2 і pqr3 від Graham M.A. Уеллс, Neures Limited, Великобританія. 2.1.3 Буфери та розчини Розчин Comassie Blue Розчин DBTC DEPC-H 2 O 1 частина крижаної оцтової кислоти (50 мл) 3 частини ізопропанолу (150 мл) 6 частин H2O (300 мл) Додати 0,25 г Comassie Blue до 100 мл (1,25 г). Розчиніть DBTC у 96% етанолі у двох частинах. Потім змішайте з трьома частинами гліцерину. Інкубуйте 1 L dh 2 O з 1% DEPC протягом ночі. Потім вимкніть DEPC автоклавуванням. Еозин 2,5 г Еозин (Колірний індекс № 45380) 500 мл H 2 O HBSS + FCS Mayers Гематоксилін PBS (сольовий розчин фосфатного буфера) Поліакриламідний буфер для електрофорезу 50 мл HBSS і 15 мл FCS 4%, помістити на лід. У 750 мл води розчиняють: 50 г сульфату алюмінію (KAl (SO 4) 2 12H 2 O) 1 г гематоксиліну (кольоровий індекс № 75290) 0,1 г йодиту натрію (NaIO 3) 1,0 г лимонної кислоти 50 г хлорогідрату Ad H 2 O до 1000 мл 120 мМ NaCl 170 мм NaH 2 PO 4 3 мм KCl 26 мм KH 2 PO 4, pH 7,2 3,03 г (0,025 М) Трис 14,1 г (0,152 М) гліцину 1,0 г (0,1%) SDS на 1000 мл з H 2 O заповнені. Буфер P1, Qiagen 50мМ Трис ph 8,0 10мМ EDTA Рназа A (400мкг/мл) Буфер P2, Qiagen 200мМ NaOH 1% SDS-буфер P3, Qiagen 2,55M KAc ph 4,8 Буфер QBT, Qiagen 750мМ NaCl 50мМ MOPS 15% Етанол ph 7%

Буфер QC, Qiagen Buffer QF, Qiagen Stop Solution Буфер підкладки TAE Буфер 1L 1M NaCl 50mM MOPS 15% етанолу Ph 7,0 1,25M NaCl 50mM MOPS 15% етанолу ph 8,2 25mg Оранжевий G 2,5g Ficoll 400 EDTA 0,5M 50mmol/l Трис ph8 + 5ммоль/л CaCl2 242 г Трис 57 мл оцтової кислоти 96% 100 мл EDTA 0,5М ph8 до 1000 мл H 2 O подвійний розд. Тріс-буфер Tris-HCl 1 М у DEPC-H 2 O, рН 7,4 Розчин тритону 2,5% 10 мл Тритон + 490 мл H2O 2.1.4 Бактеріальні культуральні середовища Використовували штам бактерій Escherichia coli DH5 від Gibco BRL (Еггенштайн, Німеччина) . Поживні середовища для росту бактерій були отримані від лабораторії Difco, Детройт, США. Ампіцилінові агаринові пластинки LB Додайте 100 мг/л ампіциліну до агарних пластинок LB. LB агарові пластини Luria Bertani (LB) - середній 5г екстракт дріжджів 10г триптичного пептону 10г NaCl аква дест. 15 г агару H 2 O переробити до 1 л 5 г дріжджового екстракту 10 г триптичного пептону 10 г NaCl аква дест. Налаштуйте pH до 7,4 H 2 O, переробіть. За допомогою 1 N NaOH. до 1 л буфера трансформації 10% (мас./об.) Поліетиленгліколь 1500 30мМ MgCl 2 у LB-Середній 2.1.5 Набори Qiagen Miniprep Qiagen Maxiprep QIAquick Spin RNeasy Mini Kit Qiagen, Hilden, Germany Qiagen, Hilden, Germany Qiagen, Hilden, Germany Qiagen, Гільден, Німеччина 20