Молекулярні механізми дії Grb14 на диференціацію, метаболізм адипоцитів та
Діана ГЕНАГА
Вівторок, 28 жовтня, о 14:30.
Інститут Кочіна
22 rue Méchain
Париж 75014
Конференц-зал, 2 поверх
Науковий керівник: Анн-Франсуаза Бурноль
Відділ: ендокринологія, метаболізм та рак
Короткий зміст дисертації:
В даний час ожиріння та діабет 2 типу є зростаючими умовами в розвинених країнах. Обидва умови пов’язані з інсулінорезистентністю, явищем, яке характеризується втратою ефективності дії інсуліну. Інсулін працює, зв'язуючись із своїм рецептором (ІЧ), що забезпечує передачу сигналу, активуючи сигнальні каскади, що призводить до різних метаболічних та мітогенних ефектів. Предметом мого дослідження, Grb14, є молекулярний адаптер сімейства Grb7, який експресується конкретно в цільових тканинах інсуліну. Це інгібітор передачі сигналів інсуліну, який зв’язується з ІЧ та блокує його активність тирозинкінази. Його експресія обернено корелює з резистентністю до інсуліну в жировій тканині, що робить її потенційною терапевтичною мішенню в контексті цієї патології. Моя дипломна робота полягала у визначенні впливу Grb14 на функціонування клітин адипоцитів, а також вивченні молекулярних детермінант білкових взаємодій Grb14 в межах інсулінової сигналізації.
Встановлення стійких ліній 3T3-L1-експресуючих адипоцитів Grb14, а також вивчення клітин фібробластів ембріона (MEF), у яких відсутній Grb14, дозволило мені визначити, що Grb14 пригнічує диференціацію адипоцитів, а також секрецію лептину, адипокіну, який є надзвичайно важливий для чутливості організму до інсуліну. На відміну від цього, метаболізм глюцидоліпідів (транспорт глюкози, ліполіз) не змінюється надмірною експресією Grb14. Крім того, дослідження MEF дозволило мені продемонструвати, що Grb14 пригнічує проліферацію клітин.
Крім того, на молекулярному рівні стратегія мутагенезу, спрямована на сайт, дозволила мені визначити молекулярні детермінанти дії Grb14. Справді, я показав, що спіраль АС ІЧ модулює зв'язування Grb14 і що залишок R385 Grb14 має вирішальне значення для взаємодії двох молекул. Я виявив передбачуване місце фосфорилювання Grb14, яке дозволяє регулювати його інгібуючу активність на ІЧ. Крім того, я визначив, що вплив Grb14 на сигналізацію інсуліну не контролюється лише взаємодією Grb14-IR. Grb14 виконує інші молекулярні взаємодії в межах цього передавання сигналів, наприклад, з кіназою PDK1, яка може регулювати пов'язані з інсуліном ефекти.
Моя робота дозволила нам краще зрозуміти дію Grb14 на клітинному та молекулярному рівнях. Я продемонстрував вирішальну нову роль для Grb14: його інгібуючий вплив на секрецію лептину. Були висунуті нові гіпотези для кращого розуміння зв'язку між Grb14 та чутливістю до інсуліну, а також для визначення того, чи може Grb14 брати участь у раку. Таким чином, всі мої результати показали, що Grb14, який раніше виступав лише простим інгібітором ІЧ, насправді є білком зі складними функціями, який бере участь у багатьох інших клітинних подіях.