Можливе використання проточної цитометрії з використанням FACS - LABOKLIN GMBH; КЛІНІЧНА ЛАБОРАТОРІЯ

Абревіатура FACS означає fлюоресценціяaактивізований cell ортування. Це особлива форма проточної цитометрії, при якій клітини, позначені флуоресценцією, можна виміряти та проаналізувати. Клітини протікають в потоці рідини через лазерний промінь і визначають розмір, внутрішню структуру та відносну інтенсивність флуоресценції. Існують антитіла, позначені флуоресценцією, доступні для численних типів клітин, особливо лімфоцитів, які спрямовані проти імунофенотипових особливостей поверхні (кластер диференціації, скорочено «CD») клітин. Використовуючи ці маркери CD, клітини тепер можна більш детально дослідити та ідентифікувати. Наприклад, цитотоксичні Т-клітинні лімфоцити позитивні для CD3 та CD8, але негативні для CD21 та CD4.

можливе

Це обстеження використовується в рутинній діагностиці, особливо в гематології. Оскільки досліджуваний матеріал повинен бути у рідкій формі, особливо придатні зразки крові. Для забезпечення вагомого результату важливо, щоб клітини були цілими, тому обстеження слід проводити якомога швидше, максимум протягом 3 днів. У LABOKLIN пристрій FACS використовується для різних важливих обстежень.

1. Тромбоцитарні антитіла

Підвищений імуноглобулін (переважно IgG) на поверхні тромбоцитів призводить до передчасного фагоцитозу тромбоцитів макрофагами з наслідком тромбоцитопенії. Ця імуно-опосередкована тромбоцитопенія (ІМТ) може бути первинною або вторинною. Рідкісна первинна форма спричинена аутоантитілами, спрямованими проти специфічних до тромбоцитів епітопів. Вторинна імуно-опосередкована тромбоцитопенія, навпаки, пов’язана з різними ліками, інфекційними агентами (бактеріями, вірусами, найпростішими або гемінтами), неоплазією та іншими імуно-опосередкованими захворюваннями.

Первинна ІМТ спостерігається переважно у собак, удвічі частіше у самок, ніж у собак чоловічої статі, у всіх вікових групах, але найчастіше у тварин середнього віку. Схильними породами є кокер-спаніель, мініатюрний та іграшковий пудель, давньоанглійська вівчарка (бобтейл), золотистий ретрівер та німецька вівчарка.
Виміряна кількість тромбоцитів, як правило, менше 30 Г/л при первинному ІМТ, ніж при вторинній формі.

Діагностику можна проводити за допомогою FACS з використанням антитромбоцитарних антитіл. Проводять подвійну інкубацію для виявлення IgG, зв’язаного з тромбоцитами. Рівень антитіл 30% оцінюється як позитивний доказ IMT. Матеріал зразка (цільна кров ЕДТА) не повинен бути старше 3 днів, щоб досягти оцінюваного імунофарбування. Обстеження необхідно розпочати перед початком імунодепресивної терапії, інакше будуть отримані хибнонегативні результати. Подальшими діагностичними варіантами є діагностична терапія кортизоном та виявлення мегакаріоцитарної гіперплазії в кістковому мозку.

2. Клітинний імунний статус

Клітинний імунний статус включає загальний аналіз крові, а також визначення відносної та абсолютної кількості периферичних лімфоцитів: В-клітин, загальних Т-клітин, а також CD4 + (Т-хелперні клітини) та CD8 + -клітини (цитотоксичні Т-клітини).

Імунофенотипування крові засноване на селективному розпізнаванні антигенів поверхневої клітини флуоресцентними міченими барвником моноклональними антитілами з використанням проточної цитометрії (FACS). Обстеження клітинного імунного статусу показано, якщо клінічні симптоми вказують на первинне або вторинне порушення в клітинній імунній системі.

У собак встановлення імунного статусу може бути корисним для діагностики піодермії, демодекозу, системного червоного вовчака, лейшманіозу та вроджених дефектів Т-клітин. Подальші обстеження можуть застосовуватися в лікарській терапії для контролю та корекції дози.
У коней його використовують для прояснення частих і тривалих інфекцій.

Визначення імунного статусу відіграє особливу роль у зараженні вірусом котячого імунодефіциту (FIV).

Вірус викликає хронічні стійкі інфекції з прогресуючим перебігом захворювання. Інфекція імунокомпетентних клітин поступово виснажує імунну систему.

Вірус виявляє помітний тропізм для Т-лімфоцитів і макрофагів. На функції Т-лімфоцитів в основному впливає пошкодження, при цьому переважають кількісні та якісні дефекти в популяції Т-хелперів. По-перше, збільшення клітин CD8 + призводить до процентного зменшення кількості клітин CD4 +. Кількість клітин CD8 + залишається збільшеною протягом безсимптомного періоду зараження і зменшується лише відносно незадовго до розвитку клінічних симптомів. На початку зараження заражаються переважно клітини CD4 +, саме тут виявляється найбільша кількість вірусу. У міру прогресування інфекції абсолютне падіння клітин CD4 + призводить до зменшення коефіцієнта CD4 +/CD8 +.

Гуморальний імунний захист виявляє пошкодження своєї функції відносно пізно. Зменшення кількості В-клітин зазвичай відбувається лише на заключній стадії. Кількість вірусу в крові знову значно зростає, але реакція антитіл більше не відбувається.

Тому створення імунного статусу може забезпечити оцінку прогнозу за наявності первинного або вторинного імунного дефіциту.

3. Диференціація лейкемії

При лімфоцитозі> 30 Г/л або при лімфопроліферативному захворюванні (лейкемія, V стадія лімфоми), підтвердженому тестуванням на клональність (PARR) з мінімальним вмістом лейкоцитів> 5 Г/л, можна проводити диференціацію лейкемії за допомогою FACS. Використовуючи маркери CD для ідентифікації клітин, це обстеження може бути використано для класифікації гострого або хронічного лейкозу (CD34: маркер стовбурових клітин), що може надати важливу інформацію про прогноз та вибір терапії. Крім того, неопластичні клітини можна розділити на В-клітини та Т-клітинні лімфоцити та підтипи.