Практична доповідь Відокремлення лактози та білків з молоком - Аркуш - ptitbou
Автор ptitbou • 8 листопада 2015 р. • Аркуш • 1386 слів (6 сторінок) • 3 402 перегляди
G.M Group TD 1.6
Звіт TP III Поділ лактози та молочних білків
Молоко, продукт тваринного походження, містить три типи складових: білки, вуглеводи та ліпіди.
Білки молока в основному представлені казеїнами (молекулярна маса близько 35 кДа = 35000 г моль -1).
Існує також лактоза (або β-D-галактопіранозил (1 → 4) D-глюкопіраноза), яка є дисахаридом і, отже, має молекулярну масу (342 Да), помітно нижчу, ніж казеїнів, які, будучи поліпептидами, є послідовностями d 'аміно кислоти, кожна з яких становить близько 110 Да.
II - мета маніпуляції
У цій маніпуляції нам було запропоновано вивчити порядок елюції різних складових молока, перш за все шляхом відокремлення їх один від одного ексклюзійною хроматографією, а потім виявити їх присутність у різних фракціях за допомогою спектрофотометрії. Для білків та за реакцією з лікером Фелінга для оз.
III- Принцип використовуваних методів
У цій частині ми представимо принципи різних методів дослідження, що використовуються під час маніпуляції.
Техніка гель-фільтрації або ексклюзивна хроматографія
Цей метод розділення дозволить елюювати різні складові зразка, що вводяться в хроматографічну колонку, залежно від їх розміру і, отже, їх молекулярної маси.
Насправді гель, використаний у цьому способі фільтрації (тут Sephalex G-25), не буде взаємодіяти за хімічною спорідненістю з нашими макромолекулами, що нас цікавлять (як у афінної хроматографії), але дозволить їх відокремлювати, оскільки кульки, що складають три- розмірна мережа, в яку можуть проникати лише молекули з низькою молекулярною масою. Таким чином, вони бачитимуть час перебування в колонці подовженим порівняно з високомолекулярними макромолекулами, які вони не вставлятимуть серед мікрогранул і будуть уникати часу затримки. Великі молекули, повністю виключені з гелю, будуть елюйовані об'ємом розчинника, рівним V 0 (званий мертвим обсягом, він відповідає третині загального обсягу колони), а молекулами меншої молекулярної маси, які циркулюватимуть протягом довший час у колонці, буде виходити з більшим обсягом буфера, рівним V e = V 0 + K d V i з K d, яка є константою, специфічною для кожної молекули, і яка змінюється обернено пропорційно логарифму молекули маса розглянутої молекули.
Білки - це ланцюг амінокислот, об’єднаних так званими пептидними зв’язками, які мають особливість поглинання світла на довжині хвилі 280 нм. Спектрофотометрія використовує цю властивість для виявлення їх присутності і навіть для вимірювання їх концентрації завдяки закону Бера-Ламберта:
(з A: поглинання, l: ширина бака та c: мольна концентрація). [рис.3]
Спектрофотометр випромінює світлову хвилю, маніпулятор якої регулює довжину хвилі. Хвиля з початковою інтенсивністю I 0 проходить через вимірювальний резервуар, де знаходиться цікавить зразок, і виходить з меншою інтенсивністю, позначеною I. Таким чином, ми можемо виміряти поглинання, яке обернено пропорційне молярній масі:
Реакція на лікер Фелінга
Лікер Фелінга - це розчин, що містить іони Cu 2+, синього кольору в основному середовищі. У гарячому стані, у присутності відновлюючої речовини, лікер Фелінга дає червоний осад оксиду міді Cu 2 O. Тому ми додамо основу до фракцій, отриманих хроматографією, і поставимо цілий на нагрівання, і таким чином ми зможемо визначити ті, що містять ози а ті, що ні. Насправді лактоза є дисахаридом і зберігає відновлювальну функцію аномерного вуглецю вільної глюкози. Таким чином, у разі виявлення присутності дози утворюється цегляно-червоний осад.