Профіль міозиту - Клякса - Синево
Повідомтеţii загальне та рекомендації щодо визначення профілю міозиту
Ідіопатичні запальні міопатії - це група захворювань, що характеризуються слабкістю проксимальних м’язів кінцівок, атрофією м’язів, біохімічними та електроміографічними ознаками ураження м’язів, гістологічними відхиленнями, характерними шкірними змінами. Вони трапляються із частотою 0,1-1/100 000 жителів на рік і частіше зустрічаються у жінок. До цієї групи належать: поліміозит, дерматоміозит, міозит з органами включення, міозит, асоційований з неоплазією (паранеопластичний синдром), і міозит, асоційований з іншими захворюваннями сполучної тканини 6; 7 .
Як і при системному склерозі, специфічні аутоантитіла відіграють важливу роль у діагностиці та класифікації різних варіантів цих станів (включаючи синдроми, що перекриваються), тим більше, що поширеність антинуклеарних антитіл помітно низька (40-60%) порівняно з вовчаком. системна еритема. Ці аутоантитіла розпізнають численні антигенні мішені: трансфертні типи РНК (тРНК), аміноацил-т-РНК-синтетази, компоненти розпізнавання сигналів (SRP), трансляційні фактори, компоненти комплексу ремоделювання. нуклеосоми, але найважливішими є ті, що спрямовані проти аміноацил-т-РНК-синтетаз (сімейство ферментів, що знаходяться у всіх ядерних клітинах і яке виконує роль приєднання певної амінокислоти до власної тРНК). Наявність аутоантитіл пов'язана з певними підгрупами захворювання, що має прогностичне значення для різних клінічних проявів та для прогнозу захворювання 1; 2; 6; 7 .
Антитіла проти Jo-1 спрямовані проти ферменту гістидил-т-РНК-синтетази. In vitro ці аутоантитіла зв'язуються з конформаційними епітопами ферменту та пригнічують його каталітичну активність. Антиген знаходиться в димерній формі і знаходиться в цитоплазмі; молекулярна маса субодиниць становить 50 кДа. Поширеність антитіл проти Jo-1 при поліміозиті та дерматоміозиті становить 20-40%; аутоантитіла можна виявити рано, іноді передуючи появі симптомів. У дітей антитіла проти Jo-1 зустрічаються вкрай рідко. Пацієнти з антитілами проти Jo-1 мають типову тріаду симптомів: поліміозит (> 90%), полісиновіт (артралгії, нерозивний деформуючий артрит, теносиновіт у 50% випадків), фіброзуючий альвеоліт або фіброз легень (60%). Можна також додати: феномен Рейно (40%), лихоманка (20%), "рука механіка" (30%). Цей стан відомий як синдром антисинтетази. Більше 90% кавказьких пацієнтів з анти-Jo-1 мають алель HLA DR3 1; 4; 6; 7 .
Хоча антитіла спрямовані до інших аміноацил-т-РНК-синтетаз: анти-PL-7 (синтез антитреоніл-т-РНК), анти-PL-12 (анти-аланіл-т-РНК-синтетаза), анти-EJ (анти-гліцил-т-РНК-синтетаза) та анти-ОЖ (анти-лейцил-т-РНК-синтетаза) набагато рідше, ніж анти-Jo-1, вони пов'язані з тими ж клінічними проявами, сумісними з синтетаза 6. Зазвичай у пацієнта є лише один тип антитіл проти синтетази, але також були описані випадки, коли було виявлено всі 5 аутоантитіл. Синдром антисинтетази помірно реагує на терапію кортизоном. Оскільки всі синтетази знаходяться в цитоплазмі (місці синтезу білка), аутоантитіла викликають чудовий цитоплазматичний вигляд при непрямій імунофлуоресценції, використовуючи клітини Hep-2 як субстрат. .
Анти-PL-7 трапляються з поширеністю 3-6% у пацієнтів з міозитом, особливо при синдромах, що перекриваються (СЧВ, системний склероз, інтерстиціальний фіброз легенів).
Анти-PL12 виявляються з поширеністю 3% у хворих на міозит.
Anti-EJ і анти-ОЙ виникають при поліміозиті, але також при синдромах, що перекриваються 3 .
Анти-Мі-2 антитіла спрямовані проти ядерної гелікази (ядерно-білковий комплекс, що бере участь у регуляції транскрипції); зустрічаються у 15-30% пацієнтів з дерматоміозитом (що мають високу специфічність для цього стану) і рідко у пацієнтів з поліміозитом. Більшість пацієнтів з антитілами проти Мі-2 мають алель HLA DR7. Форма захворювання доброякісна, з хорошою реакцією на терапію кортизоном 6; 7 .
Анти-Ку антитіла спрямовані проти гетеродимерного типу ядерного білкового антигену, що складається з двох субодиниць з молекулярною масою відповідно 70 і 80 кДа, що входять до складу ДНК-залежного ферментного комплексу протеїнкінази. Цей комплекс відіграє важливу роль у клітинних процесах, пов’язаних з трансляцією, відновленням ДНК та перебудовою генів, що беруть участь у синтезі імуноглобулінів, а також рецепторів Т-клітин. Анти-Ku антитіла виявляються в широкому діапазоні захворювань сполучної тканини, особливо перекриваються синдроми склеродермії-міозиту, але також і СЧВ (3-10%). Поява при непрямій імунофлюоресценції має зернистий тип (плямистий); Також було описано зв'язок з алелем HLA DQw1. Поширеність антитіл до Ku при аутоімунних захворюваннях є різною, причому етнічна приналежність є важливим елементом. Наприклад, випадки СЧВ, пов’язані з антитілами до Ku, були зареєстровані в Північній Америці та Європі, але не в Японії. Первинний синдром Шегрена, як і первинна легенева гіпертензія, є іншими клінічними станами, які зазвичай асоціюються з анти-Ку.
Анти-PM-Scl антитіла спрямовані проти ядерного комплексу, що складається з 11-16 поліпептидів, функція яких ще не визначена 6. Антитіла виявляються у понад 90% випадків синдрому перекриття склеродермії-поліміозиту (склеродерматоміозиту), але лише у
8% усіх випадків міозиту і
3% усіх випадків склеродермії 5. У цієї групи пацієнтів прогноз відносно сприятливий. Це асоціюється з HLA DR3 та антиядерними антитілами з однорідною ядерною появою в імунофлуоресценції 2; 6. Два основні аутоантитіла виявляються окремо в лабораторії: проти PM-Scl100 і проти PM-Scl75 3 .
Анти-SRP ("Частинка розпізнавання сигналу") реагує з компонентом 54 кДа комплексу SRP, який опосередковує транспорт новосинтезованих білків до ендоплазматичного ретикулума. Вони були описані у пацієнтів з поліміозитом та дерматоміозитом (до 4% випадків), особливо у чорношкірих жінок. Анти-SRP є маркерами для некротизуючої міопатії, що характеризується вираженою проксимальною та симетричною гострою слабкістю скелетних м’язів, пов’язаною з м’язовим болем; також уражений серцевий м’яз. Захворювання пов’язане зі збільшенням смертності та поганою реакцією на терапію кортизоном 6; 7 .
Анти-Ro52 спрямовані проти антигену 52 кДа і були описані як неспецифічні аутоантитіла, пов'язані з ревматичними та неревматичними захворюваннями. Вони на 100% присутні у матерів плодів або новонароджених із вродженою атріо-шлуночковою блокадою або неонатальною вовчаком 6. Певний відсоток пацієнтів з поліміозитом/дерматоміозитом має анти-Ro52 у поєднанні з анти-аміноацил-t-РНК-антитілами до синтетази (особливо анти-Jo-1) 1; 2 .
Навчання пацієнта - à jeun (натщесерце) або після їжі (після їжі) 3.
Зібраний зразок - венозна кров 3 .
Збиральний контейнер Вакутейнер без антикоагулянта з/без розділюючого гелю 3 .
Необхідна обробка після збору врожаю - відокремити сироватку центрифугуванням 3 .
Обсяг вибірки - мінімум 1 мл ser 3 .
Причини відхилення спробувати
Стабільність зразка - виділена сироватка стабільна протягом 14 днів при 2-8 ° С і тривалий час при -20 ° С. Не розморожуйте/не заморожуйте 3 .
Метод - імуноблот. Використовувані антигени є нативними (Jo-1) та рекомбінантними.
Смужки складаються з мембранних чіпів, закріплених різними очищеними антигенами: Mi-2, Ku, PM-Scl 100, PM-Scl 75, Jo-1, SRP, PL-7, PL-12, EJ, OJ, Ро-52.
На першому етапі смужку, завантажену очищеними антигенами, інкубують разом із розведеною сироваткою пацієнта. Якщо специфічні антитіла присутні в сироватці крові, вони зв’язуватимуться з відповідними антигенами на смужці. Після етапу промивання смужку інкубують з міченою лужною фосфатазою кон'югатом людини проти IgG. Кон'югат приєднується до частини IgG комплексу антиген-антитіло. Після промивання незв'язаного кон'югату видаляють, додають фарбувальний розчин (ферментний субстрат) - колориметричну систему виявлення ферментів. Якщо присутній зв’язаний кон’югат, ферментативна реакція генерує продукт темно-синього кольору в смугах, зайнятих специфічними антитілами. Таким чином, смуги, візуалізовані на рівні смужки, є результатом зв'язування специфічних антитіл з окремими антигенами на рівні смужки.
На кожній смузі є смужка внутрішнього контролю. Поява інтенсивної кольорової реакції на цьому рівні свідчить про те, що всі етапи імуноблот-тесту були проведені правильно 3 .
Остаточна інтерпретація результатів тесту робиться за допомогою програмного забезпечення (після сканування смужок), яке, залежно від інтенсивності сигналу, дає оцінку для кожної смуги смуги, як показано нижче:
ОЦІНКА СИГНАЛУ
ІНТЕНСИВ СИГНАЛА
Довідкові значення