Протокол хронічної сальмонели, викликаний фіброзом кишечника (переклад на німецьку)
Резюме
Цей протокол описує мишачу модель керованого сальмонелою фіброзу кишечника, що нагадує основні патологічні особливості хвороби Крона, включаючи трансмуральне запалення та фіброз. Цей метод можна використовувати для оцінки факторів-господарів, які змінюють фіброзні результати у мутантних мишей, утримуваних на генетичному тлі c57Bl/6.
Анотація
Фіброз тканин, який характеризується патологічним накопиченням позаклітинного матриксу, такого як колаген, є результатом стійкого запалення та порушення регульованого відновлення. При запальних захворюваннях кишечника (ВЗК) фіброз призводить до повторних стриктурних утворень, для яких немає іншої ефективної терапії, крім хірургічної резекції. Через його пізній початок процеси, що зумовлюють фіброз, менш вивчені і в основному невідомі. Таким чином, фіброзні ускладнення становлять основну проблему при ВЗК. Цей протокол описує надійну модель фіброзу кишечника in vivo, при якій попередня обробка стрептоміцином мишей C57Bl/6 з подальшим ротовим втручанням з дезінфекцією див. Фіброз сліпої кишки. Пояснено методи підготовки S. Typhimurium -AroA до вакцинації, кількісного визначення навантажень збудника у сліпій кишці та селезінці та оцінки відкладення колагену в тканинах кишечника. Ця експериментальна модель захворювання корисна для вивчення факторів господаря, які або посилюють, або посилюють CD-подібний фіброз кишечника.
Вступ
Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.
Протокол
Усі протоколи для тварин затверджені Комітетом з догляду за тваринами Університету Британської Колумбії.
1. Підготовка культур Salmonella Typhimurium AroA до ротової гінекології мишей
2. Оцінка забруднення сальмонелою в тканині
3. Пікросіріус Червоне фарбування та кількісне визначення колагену.
Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.
Репрезентативні результати
Лікування стрептоміцином, яке супроводжується пероральним зараженням S. Typhimurium -AroA, призводить до сильного запалення кишечника та фіброзу, особливо в сліпій кишці (Рисунок 1). Типові навантаження хвороби від 10 8 до 10 9 КУО на 1 г сліпої кишки та 10 4 КУО на 1 г селезінки можна отримати від заражених тварин (Рисунок 2). Оцінка фіброзу на червоних пофарбованих зрізах сліпої кишки пікросіріусом показує пік фіброзу через 21 день після зараження, тоді як значна частина патології вирішується до 42-го дня (рис. 3). та малюнок 4). Відкладення колагену найбільш виражене в підслизовій оболонці кишечника, тоді як фіброз м’якший у слизовій оболонці.
Сегмент 1, що представляє кінчик Cecal, може бути використаний для аналізу експресії генів, тоді як сегмент 2 фіксується в 10% забуференному формаліні для гістології, а сегмент 3 гомогенізується для бактеріального перерахування.
КУО сальмонели на масу тканини під час зараження. Цю цифру знайшли Ло та ін. 26 змінено. Клацніть тут, щоб переглянути збільшену версію цього зображення.
Зображення світлих полів від Ceca неінфікованих тварин та тварин через 21 та 42 дні після зараження S. Typhimurium AroA. Масштабний стовп, 200 м. Ця цифра взята від Lo et al. 26 змінено.
(А.) PSR + фарбування нормалізується в області тканини. Значимість визначається одностороннім тестом ANOVA Крускала-Уолліса з тестом Данна Поста. **, Р 0,05. Цю цифру знайшли Ло та ін. 26 змінено. (B.) Приклад кількісного визначення колагену в тканині сліпої кишки з Фіджі. Клацніть тут, щоб переглянути збільшену версію цього зображення.
Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.
Обговорення
Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.
Розкриття інформації
Автори не повинні розкривати будь-які фінансові конфлікти інтересів.