Куряче яйце із зародками - Біологія
Як жарко занадто жарко для життя глибоко під дном океану?
Антибіотики від бактерій
Міграція клітин: нещодавно виявлена функція відомого білка
Молекулярний компас для вирівнювання клітин
Від чого листя старіє восени
Демократичність грифа-цесарки
Середовище Екембо: Люди також жили на відкритих ландшафтах
| Генетика | Сільське, лісове та тваринництво
Сорт пшениці був створений шляхом схрещування дикорослих трав
Як жарко занадто жарко для життя глибоко під дном океану?
Куряче яйце із зародками
Техніка зародженого курячого яйця
Тільки курячі яйця з інфекційно контрольованих популяцій курей використовуються для розмноження вірусів, оскільки ембріон не повинен попередньо заражатися природними збудниками, що викликають хвороби курей. Ці яйця також називають вказаний без патогенів (SPF яйця). Для того, щоб отримати відповідний розмір ембріона, запліднені курячі яйця додатково інкубують у спеціальних інкубаторах протягом 5-14 днів при температурі 38 ° C та відносній вологості повітря 60%, залежно від обраної пізніше техніки зараження. Ці інкубатори також мають поворотний пристрій, який регулярно переміщує яйця. За допомогою спеціального люмінесцентного екрану можна спостерігати розвиток ембріона після видалення яєць («прозорих»), перебору мертвих або незапліднених яєць.
Щеплення органів придатка
Зазвичай прищеплюється не сам зародок, а його придаткові органи. Залежно від виду вірусу або проблеми (розмноження або виявлення вірусу), це жовтковий мішок, амніон, алантоїс або хоріональна алантоїсна мембрана (CAM). Оскільки вони показують оптимальний розмір для інокуляції та сприйнятливість до вірусів у різний час впродовж ембріонального розвитку, тривалість часу інкубації використовуваних яєць також різна. Найкращий час для зараження жовткового мішка - 5 - 7 днів після запліднення, для амніону та алантоїсу - 10 днів, для САМ - 11 - 12 днів. Якщо щеплення відбувається занадто рано, орган апендикса недостатньо великий, якщо відбувається занадто пізно, дедалі гальмуючий вплив імунного захисту (включаючи утворення імуноглобуліну Y) або зниження сприйнятливості органів можуть запобігти успішному зараженню.
Інокуляцію проводять у стерильних умовах, щоб уникнути бактеріального забруднення. Після дезінфекції яєчну шкаралупу відкривають невеликим пуансоном. Коли прищеплюється САМ, це відбувається на тій стороні яйцеклітини, на якій знаходиться ембріон всередині; у всіх інших придаткових органах тупий яєчний полюс відкритий. За допомогою канюлі у відповідну структуру вводять приблизно 0,1–2,2 мл вірусовмісної рідини (інокуляту). Потім миску закривають клеєм або воском. Через добу подальшої інкубації яйця перевіряють легким приладом і мертві ембріони сортують як пошкодження щеплення. Через додаткові 1-6 днів віруси, що розмножуються, можуть бути отримані з алантоїсної або навколоплідних вод (яєчний білок) або мембрани САМ та жовткового мішка. Перед цим яйце зберігається протягом ночі при 4 ° C, щоб ембріон загинув, а кровоносні судини скоротилися. Зазвичай слідують подальші етапи очищення, такі як фільтрація або ультрацентрифугування, щоб отримати як можна більш чисті вірусні препарати.
Оцінка розвитку ембріона
Прищеплені яйця регулярно рентгенологічно, як правило, щодня, і оцінюється стан розвитку ембріона. Якщо виключити бактеріальне забруднення та пошкодження щепленням, загибель ембріона може свідчити про реплікацію вірусу, це можна спостерігати, наприклад, після щеплення жовткового мішка вірусами простого герпесу. Іншими макроскопічно видимими ознаками реплікації вірусу є посилення судинних міток в ембріоні, ознаки запалення, петехіальна кровотеча або вади розвитку. При вакцинації вірусом віспи, вірусом простого герпесу та вірусом саркоми Rous на CAM відбуваються темні, плямисті зміни, т.зв. "Поки". Вони настільки характерні, що за їх допомогою можна встановити діагноз при виявленні вірусу. У більшості випадків для ідентифікації збудника проводяться різні подальші обстеження, наприклад, електронно-мікроскопічне дослідження, тест гемаглютинації або безпосереднє виявлення компонентів вірусу (антигенів та нуклеїнової кислоти) для точного набору тексту.
Значення у діагностиці вірусів
Важливість зародженого курячого яйця для ізоляції вірусів та діагностики вірусів обмежена, у випадку вірусів людини зараз обмежується виділенням та типізацією вірусів грипу. Для виділення невідомих нових збудників, крім молекулярних методів, культури клітин та електронної мікроскопії, також використовуються зароджені курячі яйця. У ветеринарній медицині в культурі яєць вирощують ряд збудників, включаючи представників вірусів віспи, ортоміксовірусів, вірусів герпесу, тогавірусів та різних вірусів птахів. Наступна таблиця дає огляд найважливіших збудників та їх поведінку в зароджених курячих яйцях. Деякі віруси можуть успішно розмножуватися та мати прийнятний урожай у курячому яйці, лише якщо дикий тип був адаптований до курячого яйця через кілька проходів (сліпі проходи).
Виробництво вакцини в зародженому курячому яйці
Великою перевагою реплікації вірусу в зароджених курячих яйцях є високий вихід вірусу. Це використовувалося у виробництві різних вакцин ще в 1960-х роках, наприклад, для отримання достатньої кількості сировини для мертвих вакцин (розщеплених вакцин) проти вірусу кору та різних вірусів грипу. Зокрема, в останньому розмноження в клітинних культурах ще не досягло достатньо високих концентрацій вірусу, так що зароджене куряче яйце і донині визначає промислове виробництво вакцин проти грипу. Проблема цього методу, однак, полягає в трудомісткому очищенні яєчного матеріалу, який завжди залишає сліди яєчних білків і, отже, не може вводитися, якщо є алергія на курячий білок.