Модель кролика прискореного атеросклерозу Методологічна перспектива клубової артерії

Резюме

Моделі атеросклерозу на тваринах необхідні для розуміння механізму та дослідження нових підходів для запобігання розвитку або розриву нальоту, що є основною причиною смерті в індустріальному світі. Цей протокол використовує поєднання балонної травми та дієти з високим вмістом холестерину для індукції атеросклеротичних бляшок в клубової артерії кролика.

Анотація

Вступ

За останнє десятиліття ця кролицька модель пошкодження балонів допомогла краще зрозуміти механізми прогресування нальоту 15 та регресії нальоту 16. Крім того, модель була використана для вивчення впливу нових терапевтичних засобів, таких як статини, антитромбоцитарні стандарти, антиоксидантні агенти 17, 18 та стенти, що елююють лікарські засоби, такі як еверолімус або стетал 19, 20, що елююють зотаролімус, на потовщення неоінтима. Ця модель також була використана для дослідження внутрішньосудинного катетера 21 для інфрачервоного флуоресцентного зображення .

Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.

Протокол

цей експериментальний протокол затверджений Кантональним ветеринарним управлінням, Фрібургом та Швейцарським ветеринарним управлінням, Швейцарія (2015 FR/58).

Примітка: Використовували самців кролів NZW вагою від 2,8 до 3,2 кг. Тварин утримували в стандартних умовах (12 годин світлового та темного циклу, забезпечуючи їжу та воду ad libitum). До денудації аеростатів тварини акліматизувались протягом тижня, протягом якого їх годували звичайним харчуванням. Після 1 тижня акліматизації кролики перейшли на атерогенну дієту, що складається з високим вмістом жиру (8,6%) і насичених жирних кислот з 205 мг/кг харчового холестерину (1%) на час вивчення всього. Пошкодження повітряної кулі в лівій клубовій артерії сталося через тиждень після початку дієти, а тварини жертвували через 2 тижні або 4 тижні після травм на балоні.

1. передопераційні процедури

2. Хірургічний протокол

3. Післяопераційний догляд

  1. ввести сульфадоксин 40 мг/кг та триметоприм 8 мг/кг або будь-який інший відповідний антибіотик відразу після операції.
  2. Під час періоду відновлення наркозу тримайте кролика на нагрівальній подушці, поміщеній у чисту клітку з автоклавом.
  3. Видаліть виправлення монітора та кліпів.
  4. Після одужання поверніть кроликів до домашньої клітки. Вводити бупренорфін 0,05 - 0,1 мг/кг підшкірно післяопераційно кожні 6-12 год протягом 48 год. атерогенна дієта триває ще два тижні або 4 тижні.

4. Збір тканин та аналіз складу плит

Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.

Репрезентативні результати

Пошкодження балону клубової артерії було виконано успішно без ускладнень (рис.1). Загальний час операції коливається від 20 до 30 хв для пошкоджень лише однієї клубової артерії та від 35 до 45 хв для пошкоджень обох артерій. Кролик видужав менш ніж через 1 год після травми на балоні. Усі тварини здавались здоровими без суттєвої втрати ваги. Не було виявлено інфекцій, набряків або тромбозів артерій. Ділянка рани була нормальною, крім легкого фіброзу на місці шва. Через 4 тижні атерогенної дієти у кроликів спостерігалася гіперхолестеринемія ± 44 18 мМ/л.

методологічна
Рисунок 1: Схематичне зображення, що ілюструє часову шкалу прогресування зубного нальоту після травми повітряної кулі. Натисніть тут, щоб переглянути збільшену версію цього малюнка.

Рисунок 2: Пошкодження повітряної кулі, спричинене атеросклерозом в клубовій артерії кролика. Репрезентативні зображення пентахрому Мовата (A-D), гематоксилін-еозин (E-H) і червоне масло O (ВІН) ділянки неофарбованих поранених (A, E, I), Через 2 тижні після аварії на повітряній кулі (B, F, J) (n = 5) та через 4 тижні після пошкодження повітряної кулі (C, G, K) (n = 3) сегменти клубової артерії з атерогенного раціону, що годували кролів NZW. Шкала для D, H і L становить 100 мкм. Шкала для інших зображень = 500 мкм. Міткою на зображенні B є просвіт, інтима, IEL (внутрішнє обмеження пружності) та вугор (зовнішнє обмеження пружності). Медіа - це область між ІЕЛ та вугром. Натисніть тут, щоб переглянути збільшену версію цього малюнка.

Рисунок 3: Морфометричний аналіз пластини. Діаграма розсіювання показує товщину співвідношення інтима/середовище, площа бляшки, просвіт і% червоного жиру O позитивний на ділянках неушкодженої контрольної клубової артерії, пошкодженої балоном артерії через 2 (n = 5) та 4 тижні (n = 3). Дані відображаються як середнє значення ± SD. * p Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.

Обговорення

Модель атеросклерозу клубової артерії клубової артерії широко використовується у дослідженнях атеросклерозу. За цим протоколом у кроликів швидко розвивалися більш важкі та розвинені бляшки порівняно зі спонтанними ураженнями, розвинутими лише при дієті з холестерином. Що важливо, тварини швидко одужують після операції.

Тварин слід годувати дієтою, збагаченою ліпідами, за 1 або 2 тижні до травми балоном, щоб переконатися, що пошкодження ендотелію відбувається в умовах гіперхолестеринемії. Це також допомагає тваринам адаптуватися до нового раціону. Хоча ця методика індукує розвинені бляшки у кроликів, морфологія бляшок відрізняється від такої у людей. Спонтанні ураження людини обмежуються субендотеліальною областю з неушкодженим внутрішнім еластичним шаром 32. Тут дослідження, проведені протягом 4 тижнів, не показали фіброзних ядер. Атеросклеротичне ураження залишається схожим на жирову смугу зі значною інфільтрацією макрофагів.

Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.

Розкриття інформації

Автори заявляють, що відсутні конкуруючі фінансові інтереси.